許多科研工作者將HIC用于蛋白質(zhì)純化，作為根據(jù)電荷、尺寸或生物特異性識(shí)別進(jìn)行分離等技術(shù)的補(bǔ)充。

在分離過程中，科研工作者以較小的體積純化和洗脫樣品，這樣可以濃縮樣品，使其可直接進(jìn)行尺寸排阻層析，或者在緩沖液置換后進(jìn)行離子交換分離?？梢詫IC用于純化方案中的捕獲、中度純化或精純步驟。生產(chǎn)的填料可用于實(shí)驗(yàn)室的小規(guī)模分離，也可用于生產(chǎn)千克級(jí)產(chǎn)品。

本期層析純化小課堂將從疏水相互作用層析的理論和應(yīng)用兩方面出發(fā)，帶大家探索奧秘，熟練選擇和運(yùn)用疏水相互作用層析填料產(chǎn)品。

HIC是根據(jù)蛋白質(zhì)表面疏水性的不同，利用蛋白質(zhì)和疏水層析介質(zhì)疏水表面可逆的相互作用來分離蛋白質(zhì)。運(yùn)行緩沖液中的某些鹽會(huì)顯著影響蛋白質(zhì)和HIC填料相互作用的方式。高鹽濃度會(huì)增強(qiáng)相互作用，而低鹽濃度會(huì)減弱相互作用。

在圖1所示的例子中，所有四種蛋白質(zhì)都與HIC填料的疏水表面相互作用。但是當(dāng)降低緩沖液的離子強(qiáng)度時(shí)，這種相互作用就會(huì)逆轉(zhuǎn)，疏水性最低的蛋白質(zhì)會(huì)首先洗脫。疏水性最強(qiáng)的蛋白質(zhì)會(huì)最后洗脫，這需要更大程度地降低鹽濃度來逆轉(zhuǎn)相互作用。

Sepharose填料是基于瓊脂糖基架的，具有高流速與高分辨率不同區(qū)分的填料，可根據(jù)純化過程對(duì)分辨率的要求程度、結(jié)合載量及流速選擇最合適的填料。

Capto填料比Sepharose基架填料具有更高的剛性，且反壓更低，使得該填料具有更好的穩(wěn)定性，更適合于具有規(guī)模放大的應(yīng)用需求。

SOURCE基架由聚苯乙烯和二乙烯基苯制成，產(chǎn)生高度球形（單分散）、小 (15 μm) 的多孔顆粒，有助于在高流速下實(shí)現(xiàn)高分辨率分離。

將樣品調(diào)節(jié)至選定的鹽濃度（如有必要，調(diào)節(jié)pH值 ）。過濾，并上樣到層析柱。

用5至10個(gè)CV的起始緩沖液清洗，或直到紫外基線和電導(dǎo)率穩(wěn)定，這表示所有未結(jié)合的物質(zhì)都已通過層析柱進(jìn)行清洗。

用2至5個(gè)CV的無鹽洗脫緩沖液清洗，洗脫任何殘留的疏水結(jié)合物質(zhì)。

用5至10個(gè)CV的起始緩沖液再平衡，或直到電導(dǎo)率達(dá)到所需值。

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