腦脊液為無(wú)色透明的液體，存在于各腦室、蛛網(wǎng)膜下腔和脊髓中央管內(nèi)，由腦室中的脈絡(luò)叢產(chǎn)生，平均每日產(chǎn)生量大約500mL，終被吸收在蛛網(wǎng)膜顆粒中。腦脊液充當(dāng)大腦的緩沖，為顱骨內(nèi)的大腦提供基本的機(jī)械和免疫保護(hù)。近幾年來(lái)，隨著對(duì)腦脊液的研究愈發(fā)深入，腦脊液中的某些物質(zhì)與腫瘤的治療預(yù)后間的關(guān)系也不斷被發(fā)現(xiàn)。其中，腦脊液分泌的外泌體已成為研究的熱點(diǎn)。

單個(gè)外泌體表型分析是將免疫學(xué)與光學(xué)結(jié)合的一種新技術(shù)[1]。該技術(shù)首先利用免疫識(shí)別將特定的外泌體進(jìn)行捕獲分離，然后再對(duì)目標(biāo)外泌體的表面標(biāo)志物及內(nèi)容物（如攜帶的蛋白質(zhì)、RNA、DNA及細(xì)胞因子）進(jìn)行定量分析，從而更加全面地反映外泌體的特性。該技術(shù)在短短兩年時(shí)間，備受廣大科研工作者的關(guān)注。本文收集了單個(gè)外泌體表型分析技術(shù)在腦脊液領(lǐng)域的相關(guān)應(yīng)用，以供參考。

Cancers：腦脊液中的外泌體濃度和miR-21表達(dá)的變化可作為軟腦膜轉(zhuǎn)移病的生物標(biāo)記物

軟腦膜轉(zhuǎn)移?。↙M）是通過(guò)腦脊液發(fā)展到整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)的晚期癌癥的臨床表現(xiàn)。研究顯示LM患者的總生存期約為6-8周，除腦脊液內(nèi)化學(xué)療法外，沒(méi)有明確的LM治療方法，但由于低反應(yīng)率和神經(jīng)毒性，腦脊液內(nèi)化學(xué)療法的效果值得商榷。同時(shí)由于癌細(xì)胞量非常少，暫時(shí)還沒(méi)有比較常規(guī)的生物標(biāo)志物來(lái)監(jiān)測(cè)其進(jìn)展或治療效果。Kyue-Yim Lee等檢測(cè)了472名患者和對(duì)照組的腦脊液外泌體濃度以及miRNA-21的表達(dá)，結(jié)果表明外泌體濃度升高的患者的生存期比其他患者長(zhǎng)。此外，在預(yù)后良好組miRNA-21表達(dá)升高。因此，外泌體濃度變化結(jié)合microRNA-21表達(dá)可能會(huì)作為監(jiān)測(cè)LM患者顱內(nèi)化療療效的生物標(biāo)志物。

值得注意的是，研究人員使用單個(gè)外泌體表型分析技術(shù)檢測(cè)了腦脊液外泌體增加組和外泌體減少組化療前后外泌體濃度變化，結(jié)果表明在腦脊液外泌體降低組中，經(jīng)過(guò)顱內(nèi)化療后的每種外泌體濃度（CD9 / CD63 / CD81）均顯著降低，而腦脊液外泌體增加組的外泌體濃度沒(méi)有顯著改變(圖C和D)。

Exoview檢測(cè)腦脊液外泌體增加組和減少組的化療前后外泌體的熒光強(qiáng)度和數(shù)量

Cancers：腦脊液分泌的外泌體非編碼RNA是潛在治療軟腦膜轉(zhuǎn)移病的靶標(biāo)

軟腦膜轉(zhuǎn)移病（LM）是一種致命的癌癥并發(fā)癥，其中癌癥通過(guò)腦脊液擴(kuò)散到大腦和脊髓周?chē)哪X膜，因此腦脊液被認(rèn)為是診斷LM細(xì)胞的新的生物標(biāo)記物。研究顯示microRNA-21被證實(shí)能在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移后維持基因調(diào)控功能，是癌癥中有效的預(yù)后標(biāo)志物和關(guān)鍵治療靶標(biāo)。Kyue-Yim Lee等通過(guò)無(wú)偏向多腺苷酸化smRNA文庫(kù)的構(gòu)建和NGS分析得到了來(lái)自LM患者腦脊液外泌體的全面smRNA譜，并驗(yàn)證了smRNA亞群偏向性表達(dá)的重要性。此外，作者使用了一種新的基于多功能慢病毒的microRNA-21監(jiān)測(cè)系統(tǒng)和基于生理細(xì)胞的方法驗(yàn)證了microRNA-21的功能在與LM患者的腦脊液外泌體相關(guān)的smRNA中是重要的。

其中，研究人員使用單個(gè)外泌體表型分析技術(shù)檢測(cè)了來(lái)自LM患者和健康志愿者（HC）腦脊液外泌體，結(jié)果顯示CD9 / CD63 / CD81抗體捕獲的外泌體的熒光成像以及每個(gè)抗體結(jié)合外泌體的數(shù)量相似（圖B），判斷出外泌體存在于LM患者和HC的腦脊液中。

Exoview檢測(cè)LM患者和HS的腦脊液外泌體的熒光強(qiáng)度、數(shù)量

在以上的研究中，ExoView系統(tǒng)以極高的靈敏度和特異性精準(zhǔn)地檢測(cè)了腦脊液外泌體的含量并對(duì)其表面蛋白marker進(jìn)行了準(zhǔn)確表征，為腦脊液外泌體的研究提供了新的思路。外泌體對(duì)疾病的診斷和治療顯示出了深厚的潛力，具有極高的研究?jī)r(jià)值。在今后的研究中，ExoView的精準(zhǔn)表征，將幫助科學(xué)家更深入地了解各種疾病，助力疾病診斷和治療方法的開(kāi)發(fā)。

全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)（ExoView R100）簡(jiǎn)介

Nanoview所開(kāi)發(fā)的全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)（ExoView R100）采用單粒子干涉反射成像傳感器（SP-IRIS）技術(shù)，是一款無(wú)需純化的全自動(dòng)的新型外泌體表征設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全方位的外泌體表征信息，包括顆粒大小、計(jì)數(shù)、表型與生物標(biāo)志物共定位等，提供多層次和全面的外泌體測(cè)量解決方案。ExoView R100允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過(guò)ExoView芯片，客戶能夠直接多分析9個(gè)不同的樣本，節(jié)省成本、時(shí)間，并減少純化所帶來(lái)的偏差。為了更好的服務(wù)您的科研工作，Quantum Design中國(guó)也建立了樣機(jī)演示實(shí)驗(yàn)室，可以為您提供為專(zhuān)業(yè)的售前、銷(xiāo)售、售后技術(shù)支持，歡迎老師您通過(guò)撥打電話010-85120280參觀試用！

參考文獻(xiàn)：

[1] Scherr, S. M., Daaboul, G. G., Trueb, J., Sevenler, D., Fawcett, H., Goldberg, B., ... & U?nlu?, M. S. (2016). Real-time capture and visualization of individual viruses in complex media. ACS nano, 10(2), 2827-2833.

[2] Lee, K. Y., Im J. H, Lin W.W...&Lee C.J.Nanoparticles in 472 Human Cerebrospinal Fluid: Changes in Extracellular Vesicle Concentration and miR-21 Expression as a Biomarker for Leptomeningeal Metastasis during pregnancy. Cancers, 2020, 12(10):2745.

[3] Lee, K. Y., Seo, Y., Im, J. H., Rhim, J., Baek, W., Kim, S., ... & Kim, J. H. Molecular Signature of Extracellular Vesicular Small Non-Coding RNAs Derived from Cerebrospinal Fluid of Leptomeningeal Metastasis Patients: Functional Implication of miR-21 and Other Small RNAs in Cancer Malignancy. Cancers, 2021, 13(2), 209.