WNT信號通路是調(diào)節(jié)組織形態(tài)發(fā)生和再生的核心路徑。WNT配體與RSPO蛋白作為強(qiáng)效共激活因子，在肝臟和腸道的干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)中起著關(guān)鍵作用。但天然蛋白存在穩(wěn)定性差、易聚集等問題，研究團(tuán)隊因此開發(fā)了一系列工程化外泌體作為遞送載體。但挑戰(zhàn)隨之而來：如何證明這些配體（如WNT3A、RSPO1）確實(shí)成功裝載到了外泌體上？它們是包裹在內(nèi)部還是錨定在表面？兩個配體是在同一個外泌體上，還是分屬于不同的囊泡？

研究組首先以一種名為Wntless (WLS)的八次跨膜蛋白作為外泌體骨架蛋白^[1]，增加了純化外泌體上的WNT3A配體水平，提升了誘導(dǎo)WNT信號的活性。進(jìn)一步實(shí)驗證實(shí)，分別裝載了RSPO1外泌體和WNT3A的外泌體具有協(xié)同作用，可增強(qiáng)WNT信號激活，誘導(dǎo)肝內(nèi)胚層細(xì)胞向肝祖細(xì)胞的轉(zhuǎn)變；RSPO1外泌體也能夠調(diào)節(jié)腸道干細(xì)胞的增殖，支持腸道的再生。為確認(rèn)RSPO1在外泌體上的定位，研究組使用dSTORM超分辨成像技術(shù)，在不透過及破壞外泌體膜結(jié)構(gòu)的前提下，確定RSPO1位于外泌體的表面（圖1）。這一發(fā)現(xiàn)為RSPO1通過與靶細(xì)胞表面受體直接結(jié)合而激活信號通路提供了堅實(shí)的形態(tài)學(xué)證據(jù)。

然而，在體內(nèi)同步遞送兩種不同的外泌體具有挑戰(zhàn)性，這凸顯出了開發(fā)同時負(fù)載WNT3A和RSPO1的外泌體的必要性。因此，研究組構(gòu)建了生產(chǎn)同時負(fù)載WNT3A和RSPO1的外泌體的細(xì)胞。為確認(rèn)細(xì)胞分泌的外泌體同時含有兩種蛋白，研究組再次使用dSTORM超分辨成像，證實(shí)了兩種蛋白存在于同一外泌體上（圖2）^[2]。

參考文獻(xiàn)：

[1] Yang, L., Wang, S., Qiao, Z., Liu, Y., Wang, X., Liu, L., ... & Chan, Y. S. (2025). Dual-ligand engineered exosome regulates WNT signaling activation to promote liver repair and regeneration. Nature Communications, 16(1), 9019.

[2] Yang, L., Wang, X., Wei, X., Yu, P., Liu, Y., Wang, S., ... & Chan, Y. S. (2026). Oral Delivery of R‐spondin1‐Loaded Small Extracellular Vesicles Activates WNT Signalling Pathway to Accelerate Intestinal Injury Repair and Reverse Ageing. Journal of Extracellular Vesicles, 15(1), e70226.