摘要

本文建立了維生素 D3 代謝物衍生物 25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S- isomer)及 C3-差向異構(gòu)體-維生素 D3 代謝物衍生物 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)等 4 個(gè)化合物的 LC-MS/MS 測(cè)定方法。

結(jié)果表明，采用色譜柱 Shim- pack Velox Biphenyl(2.1×50mm,1.8 μm )分析25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD (6S-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)，4 個(gè)同分 異構(gòu)體能實(shí)現(xiàn)很好的分離，此方法可為血清中維生素D3的檢測(cè)提供參考。

1. 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材

Shimadzu LC-30A與LCMS-8050聯(lián)用系統(tǒng);

色譜柱:Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm 1.8μm;P/N:227-32013-02;S/N:1610319 ); 

SHIMSEN Arc Disc HPTFE 針式過(guò)濾器(P/N:380-00341-05);

LC/MS 認(rèn)證樣品瓶 LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);

SHIMSEN Pipet 移液槍:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);

SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04); SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。

1.2 混合溶液的制備

取客戶提供的 4 個(gè)衍生物母液適量，加甲醇稀釋至如下濃度:25(OH)D3-PTAD(6R- isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)為 5.3747 nmol/L;3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R- isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)為 3.8467 nmol/L。

1.3 分析條件 

UHPLC 條件

色譜柱:Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm，1.8μm;P/N:227-32013-02;S/N:1610319 ) 

流 速:0.3 mL/min

進(jìn)樣量:5 μL
柱 溫:30 °C
流動(dòng)相: A:0.1%甲酸水溶液 B:0.1%甲酸甲醇溶液梯度洗脫程序如下:

質(zhì)譜條件

離子化模式:ESI，正離子掃描 

碰撞氣:氬氣
霧化氣:氮?dú)?3 L/min

接口溫度: 300°C 

加熱模塊溫度:400 °C

掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)

加熱氣:氮?dú)?10 L/min

干燥氣:氮?dú)?10 L/min

DL 溫度:250 °C

4個(gè)化合物 MRM 參數(shù)見(jiàn)下表

按照上述色譜條件(1.3)進(jìn)行采集，4 個(gè)化合物混合溶液色譜圖如下:

4個(gè)化合物重現(xiàn)性

本文建立了維生素 D3 代謝物衍生物 25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)及 C3-差向異構(gòu)體-維生素 D3 代謝物衍生物 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3- PTAD(6S-isomer)等4個(gè)化合物的 LC-MS/MS 測(cè)定方法。結(jié)果表明，采用色譜柱 Shim-pack Velox Biphenyl(2.1×50mm，1.8μm )分析25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)、 3-epi-25(OH)D3-PTAD(6R-isomer)、3-epi-25(OH)D3-PTAD(6S-isomer)，4個(gè)同分異構(gòu)體能實(shí)現(xiàn)很 好的分離，此方法可為血清中維生素 D3 的檢測(cè)提供參考。