前言

GLP-1 受體激動劑作為近年來極具臨床價值的合成多肽類藥物，憑借模擬天然 GLP-1 激素調(diào)控血糖的作用機(jī)制，成為代謝疾病治療領(lǐng)域的核心方向。這類藥物通常由約 30 個氨基酸組成，并搭載化學(xué)修飾的脂肪酸側(cè)鏈，結(jié)構(gòu)極其精細(xì)，微小差異即可直接影響藥物的安全性與療效，對分析檢測提出了極高要求。

在實(shí)際檢測中，GLP-1 類多肽極易與金屬管路、色譜硬件發(fā)生非特異性吸附，直接導(dǎo)致峰形拖尾、回收率偏低、數(shù)據(jù)重復(fù)性差等問題，嚴(yán)重影響分析結(jié)果的可靠性。因此，選擇生物兼容、高惰性的液相色譜系統(tǒng)與色譜柱，成為實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)分析的關(guān)鍵。

本方案依托 Agilent Altura 超高惰性 Peptide Plus 色譜柱，搭配 1290 Infinity II 生物液相色譜系統(tǒng)，構(gòu)建專用于合成多肽的高效分析平臺。通過對替爾泊肽（tirzepatide）與瑞他魯肽（retatrutide）開展高分辨分析，全面展現(xiàn) Altura Peptide plus 色譜柱在 GLP-1 受體激動劑檢測中低吸附、高惰性、峰形優(yōu)異的卓越性能，為多肽藥物研發(fā)與質(zhì)量控制提供可靠支撐。

實(shí)驗(yàn)部分

表 1. 儀器和樣品條件

結(jié)果和討論

Altura Peptide Plus 色譜柱在甲酸的流動相條件下可以實(shí)現(xiàn)高效分離，同時獲得了尖銳、對稱的色譜峰。峰面積和拖尾因子的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為 0.69%–1.22% 和 0.9%–0.83% (n = 5)。參見圖 1。

圖 1. 替爾泊肽和瑞他魯肽的 LC-UV 色譜圖

而在經(jīng)熱處理的替爾泊肽和瑞他魯肽樣品的色譜圖中，Altura Peptide Plus 色譜柱表現(xiàn)出卓越的分離效率和分離度，多個雜質(zhì)峰與 API 主成分峰充分分離，且峰形優(yōu)異。 在熱處理?xiàng)l件下，兩種多肽均出現(xiàn)明顯降解，表現(xiàn)為一系列分離良好、強(qiáng)度較低的降解產(chǎn)物峰，充分證明了該色譜柱在檢測 細(xì)微成分變化方面的高靈敏度與高分離能力。參見圖 2。

圖 2. 經(jīng)熱處理的替爾泊肽和瑞他魯肽與對照組的 LC-UV 色譜圖比較

通過高分辨質(zhì)譜鑒定其組成時，TIC 圖顯示出清晰的主峰，以及分離良好的微量雜質(zhì)產(chǎn)物特征信號。進(jìn)一步證明了其具有優(yōu)異的柱效、分離度和檢測靈敏度。低強(qiáng)度峰經(jīng)鑒定為雜質(zhì)及多肽異構(gòu)體。

圖 3. 替爾泊肽和瑞他魯肽的 TIC 與解卷積質(zhì)量

結(jié)論

Altura Peptide Plus 色譜柱是一款表面帶有正電荷修飾的 C18 色譜柱，即使在甲酸流動相條件下仍然有尖銳對稱的峰形和優(yōu)異的雜質(zhì)分離度。采用超高惰性的柱硬件，是幫助藥物分析工作者們進(jìn)行合成多肽藥物藥學(xué)質(zhì)量研究的利器。

參考文獻(xiàn)

1. Müller, T. D.; et al. Glucagon-Like Peptide 1 (GLP-1). Mol. Metab. 2019, (30), 72–130

標(biāo)簽：安捷倫