根據(jù)《中華人民共和國食品安全法》規(guī)定，經(jīng)食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)審評委員會審查通過，國家衛(wèi)生健康委員會、國家市場監(jiān)督管理總局和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部聯(lián)合發(fā)布的《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中41種獸藥Z大殘留限量》(GB 31650.1-2022)及21項獸藥殘留檢測方法食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，2023年2月1日即將實施。

新標(biāo)準(zhǔn)挑戰(zhàn)

新標(biāo)準(zhǔn)中《GB 31658.22-2022動物性食品中β-受體激動劑殘留量的測定》，收到了許多檢測單位的反饋，

新標(biāo)準(zhǔn)的前處理過程太復(fù)雜（繁瑣的提取過程，費時費力的pH調(diào)節(jié)，叔丁基甲醚提取后漫長的氮吹，SPE的活化、上樣、平衡、洗脫，又一次漫長的氮吹……）。

此外，新標(biāo)準(zhǔn)需同時檢測18種β-受體激動劑，這對色譜柱分離能力要求比較高。

根據(jù)廣大用戶反饋的問題，納鷗科技的技術(shù)團隊，春節(jié)前后加班加點，大年初十，趕在標(biāo)準(zhǔn)正式實施之前，第一時間快速推出了更簡單、更高效的前處理和色譜分析方法。

方法簡介&優(yōu)勢

方法摘要：

參考《GB 31658.22-2022 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)動物性食品中β-受體激動劑殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，建立了UPLC-MS/MS法測定動物性食品中18種β-受體激動劑的檢測方法：利用5%甲酸乙腈溶液作為提取溶劑，加入Anavo Que Extraction Salt Tube萃取鹽包后，使用Anavo HMR-Lipid萃取柱凈化，氮吹復(fù)溶后，采用Anavo PFP/C18色譜柱分離檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。

方法優(yōu)勢：

本方法前處理簡單，采用的是HMR-lipid通過式去除雜質(zhì)的凈化模式，省去使用陽離子固相萃取柱活化、平衡、淋洗等繁瑣流程，處理液可直接上樣凈化。定量限0.4 ug/kg，回收率在86.0%-115.4%之間。

注：GB 31658.22-2022標(biāo)準(zhǔn)中使用的是混合型陽離子交換固相萃取柱保留目標(biāo)化合物的凈化模式，此凈化模式過程繁瑣。

前處理過程對比：

實驗關(guān)鍵點和注意點：

ü  采用5%甲酸乙腈溶液作為提取溶劑，可有效提高目標(biāo)化合物回收率。

ü  使用Anavo HMR-Lipid萃取柱凈化，可快速、高效凈化樣品，提高檢測效率。

ü  采用Anavo PFP/C18核殼色譜柱分離檢測，目標(biāo)化合物峰形對稱，利于化合物定性、定量檢測。

實驗流程

1、酶解與提取

取試料5g（準(zhǔn)確至±0.02），于50 mL離心管內(nèi)，加0.2 mol/L乙酸銨緩沖溶液6 mL、β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶40 μL，渦旋混勻， 37℃避光水浴振蕩16h，放置至室溫，備用。

2、萃取、凈化

取備用液，加入濃度為100 μg/L混合內(nèi)標(biāo)使用液125 μL，加入3 mL純水，渦旋混勻，加入5%甲酸-乙腈溶液10 mL，渦旋1 min，加入Anavo Que Extraction Salt Tube 萃取鹽包（PN：AN50A007），渦旋1 min，在 4℃下，以10000 r/min離心 10 min，取4 mL上清液，加入1 mL純水混勻，直接經(jīng)過Anavo HMR-Lipid凈化柱（PN：AN60F035）凈化，流出液氮吹近干，用30%乙腈溶液定容至1 mL，過0.22 μm微孔濾膜，LC-MS/MS測定。

3、色譜條件

色譜柱：Anavo PFP/C18核殼柱, 2.7μm, 100* 2.1mm（PN：AN80A001）

流動相：A相為0.1%甲酸溶液，B相為0.1%甲酸乙腈溶液。流動相梯度：0-0.5 min保持5%B；0.5-5 min，5%B上升到60%B，5-6.5 min，保持95%B,6.5-8.5 min保持5%B。

柱溫：30℃

進(jìn)樣量：5 uL

流速：0.4 mL/min

4、質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應(yīng)離子監(jiān)測（MRM）；

電噴霧電壓：5500 V；

離子源溫度：550℃；

輔助氣1：50 psi；

輔助氣2：60 psi；

氣簾氣：30 psi；

碰撞氣體：Medium。

表1  待測化合物定性、定量離子對和對應(yīng)的去簇電壓、碰撞能量參考值

注：溴布特羅、利托君、克侖賽羅、馬噴特羅和克侖潘特采用萊克多巴胺同位素內(nèi)標(biāo)定量。

5、實驗數(shù)據(jù)

表2 18種化合物加標(biāo)回收率范圍及RSD

6、 譜圖

圖1 18種化合物及內(nèi)標(biāo)總離子流圖

圖2 18種化合物及內(nèi)標(biāo)特征離子質(zhì)量色譜圖

 GB31658.22-2022標(biāo)準(zhǔn)關(guān)鍵耗材

注：

*：如果您單位需嚴(yán)格遵照國標(biāo)進(jìn)行前處理，也可以選擇AN60A012混合型陽離子交換反相柱進(jìn)行凈化。

*：Anavo PFP/C18核殼柱等同于標(biāo)準(zhǔn)中的五氟苯基柱，這款色譜柱不但具有PFP柱的優(yōu)勢，對于結(jié)構(gòu)類似化合物具有較好分離效果，同時具有C18柱分離的優(yōu)勢。