丙烯酰胺作為具有神經(jīng)、生殖、發(fā)育毒性，容易致癌，已被國家癌癥中心 (IARC)列為ⅡA類致癌物，在Z新頒布的GB/T 5750-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法》對丙烯酰胺的測定方法進(jìn)行了拓展，在2006版氣相色譜法的基礎(chǔ)上，新增了高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。

GB/T 5750.8-2023 (13)丙烯酰胺的測定，第一法（新增高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法）相比第二法（氣相色譜法）的優(yōu)勢：

? 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法與氣相色譜法相比，采用活性炭固相萃取柱進(jìn)行樣品富集、凈化，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的液液萃取方式。

? 其次，無需樣品的溴化反應(yīng)過程，減少了硫酸等復(fù)雜溶劑的使用。

基于以上液質(zhì)法的優(yōu)勢，新國標(biāo)GB/T 5750-2023擴(kuò)項過程中，越來越多的檢測工作者采用了新增的液質(zhì)法進(jìn)行飲用水中丙烯酰胺的測定。不過，我們收到很多檢測工作者的反饋，在擴(kuò)項過程中遇到了以下挑戰(zhàn)：

挑戰(zhàn)1：由于丙烯酰胺的強極性，目前市面上提供的大部分前處理產(chǎn)品（包括進(jìn)口），在大量上樣后出現(xiàn)了丙烯酰胺的穿透現(xiàn)象，在小柱上幾乎沒有保留。因此，從水中萃取丙烯酰胺存在較大挑戰(zhàn)。

挑戰(zhàn)2：由于丙烯酰胺易溶于水，屬強極性化合物，在傳統(tǒng)的反相色譜柱上保留較弱。

納鷗科技技術(shù)團(tuán)隊，采用Anavo AC SPE小柱作為萃取填料（500 mg/6 mL ,PN: AN60C059）凈化和富集水樣，對水中的高極性化合物丙烯酰胺具有極強的吸附能力。在色譜分離方面，使用Anavo HSS T3色譜柱（2.1*50 mm, 1.8 μm，PN：AN80A058），對丙烯酰胺具有優(yōu)異分離效果。

Anavo AC SPE小柱前處理過程：

前處理過程關(guān)鍵點&注意事項：

（1）在SPE裝置上用截止閥（考克）控制流速，1滴/秒或者3滴/2秒。

（2）甲醇洗脫的時候慢一點，控制流速，0.5-1 mL/min洗脫液收集后加入1 mL水，40 ℃下緩慢通入氮氣吹至約1 mL，再上機(jī)。

結(jié)果表明, 丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.05 μg/L，回收率96.6% ~106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=3.7%；丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.1 μg/L，回收率94.7% ~102.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=3.0%；丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.5 μg/L，回收率96.5% ~103.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.3%。

生活飲用水中丙烯酰胺測定

1 方法原理

水樣通過活性炭固相萃取柱凈化和富集，甲醇洗脫液經(jīng)濃縮、定容和過濾后，采用液相色譜分離，串聯(lián)質(zhì)譜檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。取100 mL水樣經(jīng)提取后定容至1.0 mL測定，Z低檢測質(zhì)量濃度為0.02 μg/L。

1.1試劑、材料和儀器設(shè)備

1.1.1 甲醇：（色譜純 納鷗科技）

1.1.2甲酸：（色譜純 Aladdin公司）

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液：甲醇中的丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（DRE-A10045300ME- 100，德國Dr.E公司，濃度100 mg/L）；丙酮中13C3-丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（20128XB，曼哈格公司，濃度100 mg/L）。

1.1.4 固相萃取柱：（AC小柱 500 mg 6 mL，納鷗科技，PN：AN60C059）

1.1.5 水系微孔濾膜：（RC再生纖維素濾膜 0.22 μm，納鷗科技，PN：AN40A025）

1.1.6 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國waters公司液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀TQ-XS）。

1.1.7 Milli-Q超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）

1.1.8 氮氣吹干儀（瑞典Biotage公司）

1.1.9 液相色譜柱（Anavo HSS T3色譜柱：2.1*50 mm, 1.8 μm , 納鷗科技，PN：AN80A058）

1.2 分析步驟

1.2.1 樣品采集

使用棕色玻璃瓶采集水樣，水樣充滿樣品瓶并加蓋密封，避光0 ℃～4 ℃冷藏保存，保存時間為48 h。

1.2.2 水樣的前處理

用5 mL甲醇及5 mL水活化固相萃取柱。取100 mL水樣，加入50 μL質(zhì)量濃度為100 μg/L丙烯酰胺13C3內(nèi)標(biāo)使用液，混勻，內(nèi)標(biāo)物在水中的質(zhì)量濃度為0.05 μg/L。水樣以1 mL/min過富集柱。用氮氣吹2 min，使固相萃取柱干燥，之后用10 mL甲醇洗脫到試管中。洗脫液收集后加入1 mL水，于40 ℃下用氮氣吹至1 mL，微孔濾膜過濾，供儀器測定。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

1.2.3.1 丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)中間液：準(zhǔn)確移取丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.2.3）1 mL 至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，濃度為10 mg/L。

1.2.3.2 丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)中間液（2.3.2.1）1 mL至100 mL容量瓶中，用純水定容，濃度為100 μg/L。

1.2.3.3 13C3-丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)中間液：準(zhǔn)確移取13C3-丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)溶液（2.2.3）1 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容，濃度為10 mg/L。

1.2.3.4 13C3-丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)使用液：準(zhǔn)確移取13C3-丙烯酰胺內(nèi)標(biāo)中間液（2.3.2.3）1 mL至100 mL容量瓶中，用純水定容，濃度為100 μg/L。

1.2.3.5 標(biāo)準(zhǔn)系列：丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)使用液（2.3.2.2）以純水逐級稀釋，配制得到 2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液系列。每個濃度的標(biāo)曲樣品加入固定濃度5 μg/L的13C3-丙烯酰胺。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理  

式中：

r——水樣中丙烯酰胺的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）;

r1——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的丙烯酰胺的質(zhì)量濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V1——樣品溶液上機(jī)前定容體積，單位為毫升（mL）；

V2——樣品溶液所代表試樣的體積，數(shù)值為100，單位為毫升（mL）；

1000——毫克每升與微克每升的換算系數(shù)。

2 實驗結(jié)果

2.1 定量限和試劑空白

以信噪比（S/N=10）確定目標(biāo)組分定量限。將2 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液按標(biāo)準(zhǔn)方法規(guī)定步驟測定。對比試劑空白（超純水）色譜出峰情況，對目標(biāo)組分無顯著干擾。由于樣品經(jīng)過100倍的富集，由此確定丙烯酰胺的定量限為0.020 μg/L。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以丙烯酰胺的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以丙烯酰胺峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制擬合曲線。丙烯酰胺的擬合曲線方程y=0.524254x+0.430776（r=0.9995）。

2.4回收率和精密度

采用末梢水樣品進(jìn)行加標(biāo)回收（0.05 μg/L, 0.1 μg/L和0.5 μg/L）和精密度（n=7）實驗。結(jié)果表明, 丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.05 μg/L，回收率96.6% ~106.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=3.7%；丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.1 μg/L，回收率94.7% ~102.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=3.0%；丙烯酰胺加標(biāo)濃度0.5 μg/L，回收率96.5% ~103.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=2.3%；

表1末梢水樣品加標(biāo)回收率及精密度實驗結(jié)果（n=7）

3.典型譜圖

水樣凈化后質(zhì)譜圖（加標(biāo)濃度0.5 μg/L）

水樣凈化后質(zhì)譜圖（加標(biāo)濃度0.1 μg/L）

水樣凈化后質(zhì)譜圖（加標(biāo)濃度0.05 μg/L）

丙烯酰胺測定關(guān)鍵耗材丙烯酰胺測定關(guān)鍵耗材

GB 5750-2023納鷗科技配套耗材