基于質(zhì)譜的脂質(zhì)組學(xué)面臨的一項(xiàng)主要挑戰(zhàn)是，實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品中寬濃度范圍內(nèi)大量 不同脂質(zhì)的全面表征。雖然鳥槍法脂質(zhì)組學(xué)推動(dòng)了脂質(zhì)分析領(lǐng)域的發(fā)展，但它受到 一些限制，包括無法區(qū)分可能具有重要生物學(xué)意義的同質(zhì)異位物質(zhì)，并且由于電 離YZ而導(dǎo)致動(dòng)態(tài)范圍較窄。由此催生了將GX液相色譜 (HPLC) 與高分辨率質(zhì)譜 (MS) 聯(lián)用的基于色譜的脂質(zhì)分析方法。 為了與計(jì)算機(jī)生成的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行子離子譜圖匹配，可靠的脂質(zhì)標(biāo)注需要在 MS/MS 模 式下進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。然而，雖然液相色譜分離有助于闡明同分異構(gòu)脂質(zhì)并降低復(fù)雜 性，但數(shù)據(jù)依賴型高分辨率 MS/MS 數(shù)據(jù)受到色譜洗脫過程中可選擇用于碎裂的母離 子數(shù)量的限制。因此，在復(fù)雜樣品的單次分析中無法獲得所有目標(biāo) MS/MS 譜圖。由 于存在濃度偏差，該策略經(jīng)常遺漏重要的低豐度脂質(zhì)。 本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)展示了應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn)的解決方案。我們使用反相 (RP) 色譜，其非常適合 分離許多同分異構(gòu)脂質(zhì)，并且是全面分析血漿1 、組織2 和細(xì)胞脂質(zhì)的常用方法。將 這種液相色譜分離技術(shù)與 Agilent 6546 LC/Q-TOF 相結(jié)合，后者是一種專門設(shè)計(jì)用于 同時(shí)提供寬動(dòng)態(tài)范圍和高分辨率的質(zhì)譜儀，并且其分辨率不受采集速度的影響。我 們還評(píng)估了全自動(dòng) Q-TOF 迭代 MS/MS 采集模式，其中對(duì)樣品多次進(jìn)樣，并循環(huán)排 除之前選擇用于 MS/MS 碎裂的母離子。這些結(jié)果表明，使用迭代 MS/MS 能夠顯著 改善血漿脂質(zhì)組覆蓋范圍。可以將迭代 MS/MS 數(shù)據(jù)用于 Agilent Lipid Annotator 軟 件，作為完整脂質(zhì)組學(xué)工作流程的一部分。