【概述】

       4,4'-二氨基聯(lián)苯俗稱“聯(lián)苯胺”，分子式為(C₆H₄NH₂)_?，系聯(lián)苯的衍生物之一，為 IARC **類致癌物，有強烈的致癌作用，是染料合成的中間體，在染色的棉紡織品中容 易超標(biāo)。 聯(lián)苯胺是重要的染料中間體，聯(lián)苯及其衍生 物廣泛用于各種染料合成，其種類多達(dá) 250 種。 4,4'-二氨基聯(lián)苯及其鹽都是有毒且會致癌的物 質(zhì)，進(jìn)入體內(nèi)，引起皮炎，刺激黏膜，損害肝和 腎臟，且會造成膀胱癌和胰 腺癌 。聯(lián)苯胺的濃 度只要達(dá)到 6.7ppb，對人體就有致癌的風(fēng)險，世 界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)公布的致癌物清單初步整理參考，4,4'-二氨基聯(lián)苯（聯(lián)苯胺）在一 類致癌物清單中，因此，建立一套快速處理、富集水中聯(lián)苯胺并檢測的方法是非常有必要的。本文使用 SPE-1000 全自動固相萃取系統(tǒng)對水 中聯(lián)苯胺進(jìn)行固相萃取富集，用GX液相色譜儀進(jìn)行檢測。 

       本文參考“HJ 1014-2019 水質(zhì) 聯(lián)苯胺的測定 GX液相色譜法”采用 SPE1000 配置兩種不同類型的固相萃取柱，測試其對聯(lián)苯胺的回收效果，經(jīng)過實驗， SCX 固相萃取柱的回收率在 78.7%~94.2%之間，重現(xiàn)性 RSD 在 2.0%~6.4%之間；HLB 固相萃取柱的回收率在 81.0%~91.9%之間，重現(xiàn)性 RSD 為 6.0%。兩種萃取柱均得到較好的回收率和良好的重現(xiàn)性，說明 SPE-1000 全自動固相萃取系統(tǒng)可靠穩(wěn)定，適用于大體積水中的聯(lián)苯胺樣品前處理。

【實驗/操作方法】

1 SCX 萃取柱實驗過程

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

       取一定量的聯(lián)苯胺標(biāo)品于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，濃度為 1000 μg/mL,用甲醇稀 釋成 1 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成濃度分別為 5μg/L、 10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

樣品準(zhǔn)備 

       取 150 mL 水樣，加入 8 mg 硫代硫酸鈉，超聲 10 min，用鹽酸或者氫氧化鈉將水樣調(diào) 至 PH=5-6（蒸餾水無需調(diào)節(jié) PH），在分別加入 60 μL、150 μL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使待測水 樣中聯(lián)苯胺的加標(biāo)濃度分別為 0.40 μg/L，將樣品混勻待處理。

固相萃取及濃縮 

       按照圖 1 所示的方法進(jìn)行 SPE-1000 方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進(jìn)行樣品的固 相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，進(jìn)行 30℃氮吹至 1 mL，水定容至 2 mL，待檢測。

圖 1 水中聯(lián)苯胺的 SPE 富集方法

HPLC 測定水中聯(lián)苯胺 

色譜柱： C18，5 μm，4.6 mm*150 mm； 

波長：激發(fā)波長：292 nm，檢測波長 395 nm； 

流速：1.0 mL/min； 

進(jìn)樣量：20 μL； 

試驗結(jié)果

水中聯(lián)苯胺色譜圖  

（1）水中聯(lián)苯胺標(biāo)品色譜圖 

       圖 2 為取 30 μL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液用甲醇：水（1：1）定容到 1.0 mL 檢測，聯(lián)苯胺標(biāo)品出峰色譜圖，出峰時間分別為 6.1 min。流動相：乙酸銨：乙腈=85:15（0.05%甲酸）

圖 2 聯(lián)苯胺標(biāo)品出峰色譜圖

（2）水中聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品色譜圖 

       圖 3 聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品出峰色譜圖，出峰時間為 6.1 min

圖 3 聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品出峰色譜圖

聯(lián)苯胺線性 

       聯(lián)苯胺線性如下圖 4。

圖 4 聯(lián)苯胺線性圖

HPLC 測定水中聯(lián)苯胺回收率 

       HPLC 測定蒸餾水中聯(lián)苯胺回收率計算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率均在 78.7%~83.0%之間，重現(xiàn)性 RSD 為 2.0%。

表 1 蒸餾水中聯(lián)苯胺的加標(biāo)回收率（加標(biāo)濃度 0.4 μg/L）

       HPLC 測定自來水中聯(lián)苯胺回收率計算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率均在 79.4%~94.2%之間，重現(xiàn)性 RSD 在 6.4%。

表 2 自來水中聯(lián)苯胺的加標(biāo)回收率（加標(biāo)濃度 0.4 μg/L）

儀器與試劑

SPE-1000 全自動固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）； 

LC600 高壓GX液相色譜儀（萊伯泰科公司）； 

聯(lián)苯胺，＞99.5%，遠(yuǎn)航試劑廠； 

甲醇（色譜純）；

乙腈（色譜純）；

甲酸（分析純）；

乙酸（分析純）； 

SCX 固相萃取柱（500 mg/3 mL 萊伯泰科） 

自來水；超純水。

2 HLB 萃取柱試驗過程

標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制 

       取一定量的聯(lián)苯胺標(biāo)品于 10 mL 容量瓶中，用甲醇定容，濃度為 1000 μg/mL，用甲醇稀釋成 1 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成濃度為 30 μg/L 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

試驗方法 

樣品準(zhǔn)備 

       取 150 mL 自來水樣品，加入 8 mg 硫代硫酸鈉，超聲 10 min，用鹽酸或者氫氧化鈉將 水樣調(diào)至 PH=6~9，在分別加入 60 μL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，使待測水樣中聯(lián)苯胺的加標(biāo)濃度分別 為 0.40 μg/L，將樣品混勻待處理。

固相萃取及濃縮 

       按照圖 5 所示的方法進(jìn)行 SPE-1000 方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進(jìn)行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，進(jìn)行 32℃氮吹至 1 mL，水定容至 2 mL，待檢測。

圖 5 水中聯(lián)苯胺的 SPE 富集方法

HPLC 測定水中聯(lián)苯胺 

色譜柱： C18，5 μm，4.6 mm*150 mm； 波長：激發(fā)波長：292 nm，檢測波長 395 nm； 流速：1.0 mL/min； 進(jìn)樣量：20 μL； 流動相：乙酸銨：乙腈=85:15（0.05%甲酸）

試驗結(jié)果 

水中聯(lián)苯胺色譜圖 

水中聯(lián)苯胺標(biāo)品色譜圖 

       圖 6 為取 30 μL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液用甲醇：水（1：1）定容到 1.0 mL 檢測，聯(lián)苯胺標(biāo) 品出峰色譜圖，出峰時間分別為 6.6min。

圖 6 聯(lián)苯胺標(biāo)品出峰色譜圖

水中聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品色譜圖 

      圖 7 聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品出峰色譜圖，出峰時間為 6.6min

圖 7 聯(lián)苯胺加標(biāo)樣品出峰色譜圖

HPLC 測定水中聯(lián)苯胺回收率 

       HPLC 測定自來水中聯(lián)苯胺回收率計算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率均在 81.0%~91.9%之間，重現(xiàn)性 RSD 為 6.0%之間。 

表 3 自來水中聯(lián)苯胺的加標(biāo)回收率（加標(biāo)濃度 0.4 μg/L）

結(jié)論與討論 

1 從實驗效果上來看，兩種萃取柱均滿足實驗要求，可任意選擇其中一種； 

2 聯(lián)苯胺屬于二元弱堿，在使用陽離子交換柱時，將樣品 PH 調(diào)至弱酸性，有利于固 相萃取柱對于目標(biāo)物的吸附； 

3 SPE-1000 處理水樣，回收率好、穩(wěn)定性高，適宜處理大體積水樣； 

4 SPE-1000 自動在線富集方便快捷，極大節(jié)省了實驗成本。 

5 乙酸銨和乙腈體系的流動相，保留時間過短，容易產(chǎn)生雜質(zhì)干擾，流動相中引入 酸，既可以增大目標(biāo)物的響應(yīng)，又能延長目標(biāo)物的保留時間。 

參考文獻(xiàn) 

固相萃取-GX液相色譜法測地表水中的聯(lián)苯胺 

飲用水源中痕量聯(lián)苯胺的檢測方法 

HJ 1014-2019 水質(zhì) 聯(lián)苯胺的測定 GX液相色譜法

（來源：北京萊伯泰科儀器股份有限公司）

標(biāo)簽：全自動固相萃取系統(tǒng)