轉(zhuǎn)膜儀是用來轉(zhuǎn)印蛋白的儀器。電泳轉(zhuǎn)印為轉(zhuǎn)移蛋白Z常用的方法,該技術(shù)有效、迅速,并且使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。在凝膠中向印跡膜載體轉(zhuǎn)印分離的蛋白質(zhì)的過程,即是電泳轉(zhuǎn)印法。因?yàn)榇思夹g(shù)往膜上轉(zhuǎn)印蛋白GX、快速和準(zhǔn)確,并且能夠使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。,因此在轉(zhuǎn)移印跡技術(shù)中得到廣泛的應(yīng)用。
問題
問題:
轉(zhuǎn)移效率不高。
原因:
在凝膠依然留有分子。
1.凝膠濃度太大。

2、轉(zhuǎn)移緩沖液中的甲醇,從凝膠中洗掉阻滯蛋白,將甲醇除去,那么使轉(zhuǎn)移效率提高,然而卻使得與硝化纖維的結(jié)合效率下降。
3、在凝膠中沉淀蛋白,為了使轉(zhuǎn)移效率提高,使用含SDS的緩沖液。然而卻對(duì)某些抗體的結(jié)合反應(yīng)產(chǎn)生影響和使得與硝化纖維的結(jié)合效率下降。
4、轉(zhuǎn)膜時(shí)間偏短。
5、緩沖液的pH不在等電點(diǎn)周圍,電荷不是Z大,緩沖液改成適合pH的。
6.濾紙?zhí)伞?/span>
7.電路錯(cuò)誤。
移物丟失、彌散
3、若多張膜一次轉(zhuǎn)移,這種影響將會(huì)產(chǎn)生。
4、電壓過高
1、膜與凝膠結(jié)合不緊。
2、凝膠沒有完全平衡。
注意事項(xiàng)
1、不提倡轉(zhuǎn)移過久的時(shí)間,時(shí)間過久會(huì)導(dǎo)致儀器會(huì)過熱,如果轉(zhuǎn)移高于2h,那么將會(huì)燒毀儀器。
2、電源要求。Trans--Blot8cel1請(qǐng)不要使用Mode1250/2.5power supply壓器,要使用微電腦控制的Mode200/2.0o1y壓器(編號(hào):165-4761和165-4762),或者M(jìn)odel1000/500powesupply穩(wěn)壓器(編號(hào):165-4710和165-4711)。
3、環(huán)境溫度高于50攝氏度,請(qǐng)不要使用該儀器。
4、電源極性不要弄錯(cuò)。不然,將會(huì)被腐蝕不銹鋼電極板,此時(shí)應(yīng)當(dāng)使用溫和的清洗劑對(duì)電極進(jìn)行清潔。
5、該儀器電壓應(yīng)當(dāng)?shù)陀?5v。不然將會(huì)燒毀電極。
6、只有在特殊的情況下,才能夠?qū)D(zhuǎn)移緩沖液的pH值進(jìn)行調(diào)整。操作應(yīng)當(dāng)根據(jù)使用說明來進(jìn)行。無(wú)故對(duì)轉(zhuǎn)移緩沖液的pH值進(jìn)行調(diào)整,會(huì)降低緩沖液的電阻。Model200/2.0power suppl1能夠使較好的監(jiān)控電阻得以確保,使合適的電源被提供。
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