轉膜儀是用來轉印蛋白的儀器。電泳轉印為轉移蛋白Z常用的方法,該技術有效、迅速,并且使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。在凝膠中向印跡膜載體轉印分離的蛋白質的過程,即是電泳轉印法。因為此技術往膜上轉印蛋白GX、快速和準確,并且能夠使得蛋白在凝膠中保持高分辨率。因此在轉移印跡技術中得到廣泛的應用。
準備工作
1、準備對緩沖液進行轉移,緩沖液的pH值.不要無故調整,如果儀器過熱出錯,那么可能選擇了不適合的緩沖液。
2、通電以后,凝膠在轉移緩沖液中平衡,平衡能夠將電泳緩沖液中的鹽和清潔劑從凝膠中除去。若不將鹽去除,將對緩沖液產(chǎn)生很大的影響,并且使得儀器在轉移過程中過熱。除此以外,在緩沖液中,低濃度的凝膠(<12%的聚丙烯酰胺)會縮水。平衡調整凝膠在Z終大小,,為電泳轉移提供便利。凝膠的濃度決定了平衡所需時間。

3、以凝膠為依據(jù)將適宜大小的膜剪裁出來,在緩沖液中通過4545度夾角緩慢滑入膜,并且浸泡15-30分鐘,從而濕潤完全,不然的話,那么會容易起對轉移起到阻滯作用的氣泡。應當使用鑷子或者帶手套來避免污染膜。
4、以凝膠為依據(jù)將適宜大小的膜剪裁出來,2張加厚型濾紙或4張厚濾紙或6張薄濾紙被需要,將濾紙在轉移緩沖液中浸透完全。
5、若一次轉膜多張,使用透析膜隔開。也應當完全浸透透析膜。
使用方法
1、本過程請帶手套操作,從而避免污染膜。
2、將外蓋和不銹鋼電極板打開。
3、首先將預先沒泡過的厚濾紙放置在鉑金陽極板上。在移液管或玻璃棒濾紙表面滾動,對氣泡進行驅趕,將空氣排出。
4、放置預先浸泡過的轉移膜,將空氣排出。
5、放置預先浸泡過的厚濾紙,將空氣排出。
6、放置平衡過的凝膠,排出空氣。在膜的中間放置凝膠。
7、如果將多余1張全大小的膜同時轉移,應當使用預先浸泡過的透析膜隔開,之后再繼續(xù)2-5步。如果凝膠比較小,能夠將它們挨著平鋪在一起轉膜。將所有空氣排出。
8、將電極板小心的裝上,將電極板裝好,使嚙合,然而濾紙堆不要弄。
9、將外蓋安上,將電源插上,若是陰極到陽極,黑色插黑色,黑色插黑色,那么轉膜正常。不要弄飯,不然的話,會毀壞不銹鋼板。
10、將電打開。轉移大的膜30-60分鐘,轉移小的膜15-30分鐘
11、轉膜結束,將電源開關關閉,將電源連接切斷,將外蓋和陰極板打開,將濾紙與透析膜去掉。
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