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細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法

本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-02 10:00 2585閱讀次數(shù)

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六折特價(jià)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法產(chǎn)品簡介:產(chǎn)品編號品名/Packsize的11684817910在原位細(xì)胞凋亡檢測試劑盒,過氧化物酶1包(高達(dá)50測試)優(yōu)點(diǎn)敏感:細(xì)胞凋亡(細(xì)胞染色)標(biāo)簽的Zda強(qiáng)度高于缺口翻譯方法快速:使用熒光的dUTP允許后直接TUNEL反應(yīng),但在此之前的二次檢測系統(tǒng)除了對樣品的分析方便:直接標(biāo)記程序,使用熒光素-dUTP標(biāo)記允許在檢測過程中的TUNEL反應(yīng)效率的核查準(zhǔn)確:在分子水平(DNA鏈斷裂)和細(xì)胞凋亡的早期階段的細(xì)胞識別凋亡鑒定靈活:無基板;提供了選擇的機(jī)會,選擇染色過程六折特價(jià)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法6380元六折特價(jià)【021-54100800】InSituCellDeathPOD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法上海索寶特價(jià)【021-54100800】產(chǎn)品明細(xì):一、原理:TUNEL(TdT-mediateddUTPnickendlabe領(lǐng))細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細(xì)胞在凋亡早期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是熒光素(fluorescein)標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdTEnzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端,并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radishperoxidase)的熒光素抗體特異性結(jié)合,后者又與HRP底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)反應(yīng)產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)(呈深棕色),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片)在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測。還可應(yīng)用于抗腫瘤藥的藥效評價(jià),以及通過雙色法確定細(xì)胞死亡類型和分化階段。二、器材與試劑器材:光學(xué)顯微鏡及其成像系統(tǒng)、小型染色缸、濕盒(塑料飯盒與紗布)、塑料蓋玻片或封口膜、吸管、各種規(guī)格的加樣器及槍頭等;試劑:試劑盒含TdT10×、熒光素標(biāo)記的dUTP1×、標(biāo)記熒光素抗體的HRP;自備試劑:PBS、雙蒸水、二甲苯、梯度乙醇(100、95、90、80、70%)、DAB工作液(臨用前配制,5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS)、ProteinaseK工作液(10-20μg/mlin10mMTris/HCl,pH7.4-8)或細(xì)胞通透液(0.1%TritonX-100in0.1%sodiumcitrate,臨用前配制)、蘇木素或甲基綠、DNase1(3000U/ml3U/mlin50mMTris-HCl,pH7.5,10mMMgCl2,1mg/mlBSA)等。三、實(shí)驗(yàn)步驟操作流程圖:制作石蠟切片→脫蠟、水合→細(xì)胞通透→加TUNEL反應(yīng)液→加converter-POD→與底物DAB反應(yīng)顯色→光學(xué)顯微鏡計(jì)數(shù)并拍照。具體操作步驟(石蠟包埋切片的檢測):1.用二甲苯浸洗2次,每次5min;2.用梯度乙醇(100、95、90、80、70%)各浸洗1次,每次3min;注:上面兩步是針對石蠟切片樣本的處理4.用ProteinaseK工作液處理組織15-30min在2137°C(溫度、時間、濃度均需摸索)或者加細(xì)胞通透液8min;5.PBS漂洗2次;6.制備TUNEL反應(yīng)混合液,處理組用50μlTdT+450μl熒光素標(biāo)記的dUTP液混勻;而陰性對照組僅加50μl熒光素標(biāo)記的dUTP液,陽性對照組先加入100μlDNase1,反應(yīng)在15~25℃×10min,后面步驟同處理組。7.玻片干后,加50μlTUNEL反應(yīng)混合液(陰性對照組僅加50μl熒光素標(biāo)記的dUTP液)于標(biāo)本上,加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃×1h。8.PBS漂洗3次;9.可以加1滴PBS在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞(激發(fā)光波長為450~500nm,檢測波長為515~565nm);10.玻片干后加50μlconverter-POD于標(biāo)本上,加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min。11.PBS漂洗3次;12.在組織處加50~100μlDAB底物,反應(yīng)15~25℃×10min;13.PBS漂洗3次;14.拍照后再用蘇木素或甲基綠復(fù)染,幾秒后立即用自來水沖洗。梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。15.加一滴PBS或甘油在視野下,用光學(xué)顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞(共計(jì)200~500個細(xì)胞)并拍照??山Y(jié)合凋亡細(xì)胞形態(tài)特征來綜合判斷(未染色細(xì)胞變小,胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,晚期出現(xiàn)凋亡小體,貼壁細(xì)胞出現(xiàn)鄒縮、變圓、脫落;而染色細(xì)胞呈現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解,染色質(zhì)分割成塊狀/凋亡小體)對于.培養(yǎng)細(xì)胞的預(yù)處理:①在載玻片上鋪一層薄薄的多聚賴氨酸(見備注4),干燥后在去離子水中漂洗,干燥后4℃保存;②適當(dāng)方法誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,同時設(shè)未經(jīng)誘導(dǎo)的對照組,各組離心收集約1×106個細(xì)胞,PBS洗一次,重懸,加到鋪好的多聚賴氨酸載玻片上,自然干燥,使細(xì)胞很好的吸附到載玻片上;③將吸附細(xì)胞的載玻片在4%多聚甲醛(見備注2)中固定25min;④PBS浸洗二次,每次5min;⑤將吸附細(xì)胞的載玻片在0.2%的TritonX-100(見備注5)中處理5min;⑥PBS浸洗二次,每次5min;后續(xù)操作如同石蠟包埋切片的615四、注意事項(xiàng)1.進(jìn)行PBS清洗時,每次清洗5min。2.PBS清洗后,為了各種反應(yīng)的有效進(jìn)行,請盡量除去PBS溶液后再進(jìn)行下一步反應(yīng)。3.在載玻片上的樣本上加上實(shí)驗(yàn)用反應(yīng)液后,請蓋上蓋玻片或保鮮膜,或在濕盒中進(jìn)行,這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體,又可以防止反應(yīng)液干燥造成實(shí)驗(yàn)失敗。4.TUNEL反應(yīng)液臨用前配制,短時間在冰上保存。不宜長期保存,長期保存會導(dǎo)酶活性的失活。5.如果20×DAB溶液顏色變深成為紫色,則不可使用,需重新配制。6.用甲基綠(MethylGreen)染液(3-5%甲基綠溶于0.1M醋酸PH4.0)染色后,請用滅菌蒸餾水清洗多余的甲基綠。然后進(jìn)行洗凈(1**%乙醇)、脫水(二甲苯)透明、封片后通過光學(xué)顯微鏡觀察操作。如果此時使用80~90%的乙醇洗凈時,甲基綠比較容易脫色,注意快速進(jìn)行脫水操作。7.熒光素標(biāo)記的dUTP液含甲次酸鹽和二氯鈷等致癌物,可通過吸入、口服等途徑進(jìn)入機(jī)體,注意防護(hù)。8.試劑保存;未打開的試劑盒貯存在-20℃(-15~25℃);converter-POD液一旦解凍,以后就保存在4℃(2~8℃)下,至少在6m內(nèi)穩(wěn)定,避免再次凍存;TUNEL反應(yīng)液臨用前配好后,放至冰上直至使用。9.結(jié)果分析時注意:在壞死的晚期階段或在高度增殖/代謝的組織細(xì)胞中可產(chǎn)生大量DNA斷,從而引起假陽性結(jié)果;而有些類型的凋亡性細(xì)胞死亡缺乏DNA斷裂或DNA裂解不完全,以及細(xì)胞外的矩陣成分阻止TdT進(jìn)入胞內(nèi)反應(yīng),進(jìn)而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。六折特價(jià)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法上海索寶特價(jià)【021-54100800】InSituCellDeathPOD細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法上海索寶特價(jià)【021-54100800】ShanghaisolarbioBioscience&TechnologyCo.,LTD上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷售生化試劑、實(shí)驗(yàn)耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體,并能提供技術(shù)支持的專業(yè)性生物科技公司。公司秉承“以客戶為ZX,以產(chǎn)品為保障、以誠信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念,在依靠客戶的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長。公司組織結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)部管理科學(xué),擁有一支既分工細(xì)致又高度合作的年輕化隊(duì)伍,保持了各個部門之間的GX合作運(yùn)轉(zhuǎn),充分保障了公司在充滿競爭的市場中處于領(lǐng)xian地位。公司注重與業(yè)界精英合作,目前公司已經(jīng)和Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf、等企業(yè)結(jié)成緊密的合作伙伴關(guān)系,代理其領(lǐng)xian世界的產(chǎn)品,并在全國各地設(shè)有分銷機(jī)構(gòu)。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫存、準(zhǔn)確的交貨時間、極具競爭力的價(jià)格,所有這些都保證了我們向您提供的是Z專業(yè)Zyou質(zhì)的服務(wù)!立足北京,上海,輻射全國,隨著產(chǎn)品營銷戰(zhàn)略的不斷延伸,我們將逐步發(fā)展成為yi流的專業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶一起,利用各自的資源優(yōu)勢和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神,為ZG生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好、更全面的發(fā)展,現(xiàn)公司正在誠招各地dai理商和招聘若干銷售、研發(fā)人員,歡迎垂詢并期待您的加入!六折特價(jià)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法上海索寶特價(jià)【021-54100800】聯(lián)系方式上海索萊寶生物科技有限公司電話:021-6485566518018609966傳真:021-54261506郵編:200233地址:上海市欽江路15號14層郵箱:solarbio@126.com網(wǎng)址:www.shsolarbio.com優(yōu)質(zhì)試劑質(zhì)量放心價(jià)格Zdi為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻(xiàn)六折特價(jià)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒POD法上海索寶特價(jià)【021-54100800】手機(jī)18018609966

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