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細(xì)胞凋亡檢測-形態(tài)學(xué)特征的檢測方法
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2018-09-28 10:00 1195閱讀次數(shù)
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一、普通光學(xué)顯微鏡觀察方法1)蘇木素-伊紅染色(HE染色法)石蠟組織切片的HE染色1.取材組織塊,經(jīng)固定后,常規(guī)石蠟包埋,4μm切片。2.切片常規(guī)用二甲苯脫蠟,經(jīng)各級乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸餾水洗2min。3.蘇木素染色5min,自來水沖洗。4.鹽酸乙醇分化30s(提插數(shù)下)。5.自來水浸泡15min或溫水(約50℃)5min。6.置伊紅液2min。7.常規(guī)脫水,透明,封片:95%乙醇(I)min→95%乙醇(Ⅱ)1min→100%乙醇(I)1min→100%乙醇(Ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(I)1min→二甲苯(Ⅱ)1min→中性樹脂封固。2)甲基綠-派諾寧染色法1.新鮮取材組織固定液中4℃固定3~6小時。2.直接轉(zhuǎn)入95%乙醇脫水和無水乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋。3.切片經(jīng)二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化至蒸餾水。4.置染色液中室溫下染片約1h。5.取出切片,不經(jīng)水洗,用濾紙吸干多余染液。6.插入丙酮中迅速分化。7.轉(zhuǎn)入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。8.二甲苯透明2~3次。9.中性樹膠封固。3)Giemsa染色1.收集細(xì)胞(1×106),PBS洗1次。2.用細(xì)胞涂片離心機(jī)制成細(xì)胞涂片。3.甲醇固定3~5min。4.入Giemsa稀釋染色液15~30min,冬天在37℃溫箱中染色。5.用磷酸鹽緩沖液分色,以鏡下控制為準(zhǔn)。6.涂片晾干后用中性樹膠封片。4)瑞氏(Wright)染色1.收集細(xì)胞(1×106),PBS洗1次。2.用細(xì)胞涂片離心機(jī)制成細(xì)胞涂片。3.甲醇固定3~5min。4.用Wright液染色2min。5.入Wright磷酸緩沖液稀釋液4~10min,然后用蒸餾水沖洗。此時如果顏色較深,可0.08%醋酸分化數(shù)秒鐘6.直立晾干后,用中性樹膠封固。二、透射電子顯微鏡觀察方法1)透射電鏡樣本的取材和固定培養(yǎng)細(xì)胞的取材和固定1.常規(guī)收集帖壁和懸浮細(xì)胞,置離心管中離心,800~1000r/min,10min。2.用0.01mol/LPBS5ml重懸細(xì)胞。3.將細(xì)胞懸液吸入有瓊脂空槽的離心管中。4.離心,2000r/min,15~20min,使細(xì)胞成團(tuán)。5.小心吸去上清,加入2.5%戊二醛固定液固定細(xì)胞團(tuán),以免細(xì)胞團(tuán)散開。6.取出離心管內(nèi)的瓊脂,仔細(xì)切下尖槽內(nèi)含有細(xì)胞團(tuán)的瓊脂塊。7.將含細(xì)胞的團(tuán)瓊脂塊投入含戊二醛固定液的小瓶中,4℃(可長期)保存。8.用0.1mol/LPBS緩沖液洗1次。9.1%鋨酸后固定30~60min。三、熒光顯微鏡觀察方法1)吖啶橙染色法1.制備活細(xì)胞懸液,濃度約為107/ml。2.取95μl的細(xì)胞懸液,加5μl的吖啶橙貯存液混勻。3.吸一滴混合液點(diǎn)潔凈玻片上,直接用蓋玻片封片。4.熒光顯微鏡選用激發(fā)濾片BG12或BV等,阻斷濾片用515nm或SP3。2)Hoechst33258染色法1.原代細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞學(xué)涂片或細(xì)胞甩片機(jī)制備的單細(xì)胞片。2.細(xì)胞固定液4℃固定5min。3.蒸餾水稍洗后,點(diǎn)加Hoechst33258染色液,10min。4.蒸餾水洗片后,用濾紙沾去多余液體。5.封片劑封片后熒光顯微鏡觀察。3)Hoechst33342染色法1.將Hoechst33342加入培養(yǎng)的細(xì)胞中,終濃度為10μg/ml37℃孵育30min。2.4%的多聚甲醛和培養(yǎng)液以1:3混合,使多聚甲醛的濃度為1%,固定細(xì)胞5~10min。3.固定好后,將細(xì)胞懸液涂在載玻片加蓋玻片。4.熒光顯微鏡激發(fā)濾片選用UV激發(fā)濾片,阻斷濾片為400~500nm。以上是先將細(xì)胞染色后再行固定觀察的方法,也可先固定后染色:1.收集(0.5~3.0)×106個細(xì)胞,500~1000r/min,離心5min去上清。2.PBS洗1次,500~1000r/min,離心5min去PBS。3.用3%多聚甲醛50μl重懸細(xì)胞,室溫下固定10min。4.PBS洗1次,500~1000r/min離心5min去PBS。5.用15μl的Hoechst33258或33342重懸細(xì)胞,終濃度為16μg/ml,孵育15min。6.取10μl放在玻片上,熒光顯微鏡下觀察,可數(shù)500個細(xì)胞,計算調(diào)亡率。
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細(xì)胞凋亡檢測-形態(tài)學(xué)特征的檢測方法
- 一、普通光學(xué)顯微鏡觀察方法1)蘇木素-伊紅染色(HE染色法)石蠟組織切片的HE染色1.取材組織塊,經(jīng)固定后,常規(guī)石蠟包埋,4μm切片。2.切片常規(guī)用二甲苯脫蠟,經(jīng)各級乙醇至水洗:二甲苯(I)5min→二甲苯(Ⅱ)5min→100%乙醇2min→95%的乙醇1min→80%乙醇1min→75%乙醇1min→蒸餾水洗2min。3.蘇木素染色5min,自來水沖洗。4.鹽酸乙醇分化30s(提插數(shù)下)。5.自來水浸泡15min或溫水(約50℃)5min。6.置伊紅液2min。7.常規(guī)脫水,透明,封片:95%乙醇(I)min→95%乙醇(Ⅱ)1min→100%乙醇(I)1min→100%乙醇(Ⅱ)1min→二甲苯石碳酸(3:1)1min→二甲苯(I)1min→二甲苯(Ⅱ)1min→中性樹脂封固。2)甲基綠-派諾寧染色法1.新鮮取材組織固定液中4℃固定3~6小時。2.直接轉(zhuǎn)入95%乙醇脫水和無水乙醇脫水,二甲苯透明,石蠟包埋。3.切片經(jīng)二甲苯脫蠟,梯度乙醇水化至蒸餾水。4.置染色液中室溫下染片約1h。5.取出切片,不經(jīng)水洗,用濾紙吸干多余染液。6.插入丙酮中迅速分化。7.轉(zhuǎn)入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。8.二甲苯透明2~3次。9.中性樹膠封固。3)Giemsa染色1.收集細(xì)胞(1×106),PBS洗1次。2.用細(xì)胞涂片離心機(jī)制成細(xì)胞涂片。3.甲醇固定3~5min。4.入Giemsa稀釋染色液15~30min,冬天在37℃溫箱中染色。5.用磷酸鹽緩沖液分色,以鏡下控制為準(zhǔn)。6.涂片晾干后用中性樹膠封片。4)瑞氏(Wright)染色1.收集細(xì)胞(1×106),PBS洗1次。2.用細(xì)胞涂片離心機(jī)制成細(xì)胞涂片。3.甲醇固定3~5min。4.用Wright液染色2min。5.入Wright磷酸緩沖液稀釋液4~10min,然后用蒸餾水沖洗。此時如果顏色較深,可0.08%醋酸分化數(shù)秒鐘6.直立晾干后,用中性樹膠封固。二、透射電子顯微鏡觀察方法1)透射電鏡樣本的取材和固定培養(yǎng)細(xì)胞的取材和固定1.常規(guī)收集帖壁和懸浮細(xì)胞,置離心管中離心,800~1000r/min,10min。2.用0.01mol/LPBS5ml重懸細(xì)胞。3.將細(xì)胞懸液吸入有瓊脂空槽的離心管中。4.離心,2000r/min,15~20min,使細(xì)胞成團(tuán)。5.小心吸去上清,加入2.5%戊二醛固定液固定細(xì)胞團(tuán),以免細(xì)胞團(tuán)散開。6.取出離心管內(nèi)的瓊脂,仔細(xì)切下尖槽內(nèi)含有細(xì)胞團(tuán)的瓊脂塊。7.將含細(xì)胞的團(tuán)瓊脂塊投入含戊二醛固定液的小瓶中,4℃(可長期)保存。8.用0.1mol/LPBS緩沖液洗1次。9.1%鋨酸后固定30~60min。三、熒光顯微鏡觀察方法1)吖啶橙染色法1.制備活細(xì)胞懸液,濃度約為107/ml。2.取95μl的細(xì)胞懸液,加5μl的吖啶橙貯存液混勻。3.吸一滴混合液點(diǎn)潔凈玻片上,直接用蓋玻片封片。4.熒光顯微鏡選用激發(fā)濾片BG12或BV等,阻斷濾片用515nm或SP3。2)Hoechst33258染色法1.原代細(xì)胞培養(yǎng),細(xì)胞學(xué)涂片或細(xì)胞甩片機(jī)制備的單細(xì)胞片。2.細(xì)胞固定液4℃固定5min。3.蒸餾水稍洗后,點(diǎn)加Hoechst33258染色液,10min。4.蒸餾水洗片后,用濾紙沾去多余液體。5.封片劑封片后熒光顯微鏡觀察。3)Hoechst33342染色法1.將Hoechst33342加入培養(yǎng)的細(xì)胞中,終濃度為10μg/ml37℃孵育30min。2.4%的多聚甲醛和培養(yǎng)液以1:3混合,使多聚甲醛的濃度為1%,固定細(xì)胞5~10min。3.固定好后,將細(xì)胞懸液涂在載玻片加蓋玻片。4.熒光顯微鏡激發(fā)濾片選用UV激發(fā)濾片,阻斷濾片為400~500nm。以上是先將細(xì)胞染色后再行固定觀察的方法,也可先固定后染色:1.收集(0.5~3.0)×106個細(xì)胞,500~1000r/min,離心5min去上清。2.PBS洗1次,500~1000r/min,離心5min去PBS。3.用3%多聚甲醛50μl重懸細(xì)胞,室溫下固定10min。4.PBS洗1次,500~1000r/min離心5min去PBS。5.用15μl的Hoechst33258或33342重懸細(xì)胞,終濃度為16μg/ml,孵育15min。6.取10μl放在玻片上,熒光顯微鏡下觀察,可數(shù)500個細(xì)胞,計算調(diào)亡率。[詳細(xì)]
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ANNEXIN V-FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒
- ANNEXINV-FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途ANNEXINV-FITC標(biāo)記法細(xì)胞凋亡檢測試劑是一種旨在使用異硫氰酸熒光素標(biāo)記的膜粘連蛋白-5(AnnexinV),探尋細(xì)胞膜的磷脂酰絲氨酸外翻移位,來分析特征性早期細(xì)胞凋亡狀況的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。主要適用于各種活體細(xì)胞(動物、人體、植物等)的細(xì)胞凋亡測定。廣泛用于細(xì)胞凋亡的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,反應(yīng)敏感,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞凋亡,或細(xì)胞程序性死亡,在諸如形態(tài)發(fā)育、免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)、以及腫瘤和神經(jīng)退行性疾病等各種生物學(xué)過程中,起著實質(zhì)性的作用。凋亡細(xì)胞具有形態(tài)、生化、和分子方面的顯著特征??鼓鞍啄ふ尺B蛋白-5(AnnexinV)是35至36kd的鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白,主要與磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine;PS)可逆性結(jié)合,每個分子AnnexinV結(jié)合50個單體磷脂酰絲氨酸。在正常生理狀態(tài)下,磷脂酰絲氨酸,是四種主要細(xì)胞膜磷脂成分之一,和磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine;PE)一起分布在細(xì)胞質(zhì)膜的內(nèi)側(cè),即面向胞漿的一面。一旦細(xì)胞凋亡啟動,細(xì)胞膜失去了磷脂雙層的非對稱性分布和完整性,導(dǎo)致磷脂酰絲氨酸移位到細(xì)胞膜外側(cè),成為巨噬細(xì)胞的識別目標(biāo),由此細(xì)胞膜外側(cè)的磷脂酰絲氨酸可以通過異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的AnnexinV進(jìn)行探測。伴隨碘化丙啶(Propidiumiodide;PI)的染色以區(qū)別晚期細(xì)胞凋亡。碘化丙啶為膜非通透性染料,受到活細(xì)胞排外,如果細(xì)胞處于晚期凋亡或死亡,則呈現(xiàn)紅色熒光的細(xì)胞核。借助細(xì)胞流式儀,可以清晰探測細(xì)胞凋亡的程度。流式細(xì)胞術(shù)(FLOWCYTOMETRY)是七十年代發(fā)展起來的集計算機(jī)、激光、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)為一體的高科學(xué)技術(shù)。[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人細(xì)胞凋亡YZ因子(IAP)檢測試劑盒
- 人細(xì)胞凋亡YZ因子(IAP)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 17:58
選購指南
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的檢測方法
- 的檢測方法[詳細(xì)]
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2024-09-29 03:28
安裝說明
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細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理
- 細(xì)胞凋亡的分子機(jī)理[詳細(xì)]
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2015-10-29 00:00
安裝說明
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含油量的檢測方法
- 含油量的檢測方法[詳細(xì)]
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2014-08-13 00:00
專利
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檢測TOC的方法
- 檢測TOC的方法[詳細(xì)]
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2016-02-17 00:00
選購指南
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白酒檢測的方法
- 白酒檢測的方法[詳細(xì)]
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2015-08-05 00:00
其它
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活性炭的檢測方法
- 活性炭的檢測方法[詳細(xì)]
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2024-09-27 23:57
應(yīng)用文章
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機(jī)械雜質(zhì)的檢測方法
- YT-511石油產(chǎn)品和添加劑機(jī)械雜質(zhì)測定儀是根據(jù)中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)GB/T511《石油產(chǎn)品和添加劑機(jī)械雜質(zhì)測定法(重量法)》規(guī)定的要求設(shè)計的,適用于按照GB/T511標(biāo)準(zhǔn)的要求測定石油產(chǎn)品中的各類輕、重質(zhì)油、潤滑油及添加劑的機(jī)械雜質(zhì)的含量。YT-511石油產(chǎn)品和添加劑機(jī)械雜質(zhì)測定儀技術(shù)指標(biāo):1.工作電源:AC220V±10%,50Hz。2.水浴加熱功率:1000W。3.水浴控溫范圍:室溫90℃內(nèi)可調(diào)。4.水浴溫度顯示:LED數(shù)字顯示。5.水浴控溫精度:±1℃。6.漏斗控溫范圍:室溫90℃內(nèi)可調(diào)。7.漏斗控溫顯示:LED數(shù)字顯示。8.漏斗控溫精度:±2℃。9.環(huán)境溫度:≤35℃。10.相對濕度:≤85%。11.整機(jī)功耗:不大于1100W。相關(guān)產(chǎn)品:YT-511石油產(chǎn)品和添加劑機(jī)械雜質(zhì)[詳細(xì)]
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2024-09-15 01:21
產(chǎn)品樣冊
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溴的檢測方法
- 溴的檢測方法[詳細(xì)]
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2024-10-03 06:20
專利
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塑化劑的檢測方法
- 塑化劑的檢測方法[詳細(xì)]
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2024-09-23 02:55
標(biāo)準(zhǔn)
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V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品說明
- AnnexinV-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒產(chǎn)品簡介: 細(xì)胞凋亡普遍存在于生物界,是細(xì)胞的基本特征之一,對胚胎發(fā)育及形態(tài)發(fā)生、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、機(jī)體的防御和免疫反應(yīng)等方面都起到十分重要的作用?! nnexinV-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(AnnexinV-FITC/PIApoptosisDetectionKit)是用FITC融合的重組人AnnexinV來檢測細(xì)胞凋亡時出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨酸(PS)的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒??梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。AnnexinV是一種分子量為35.8kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,廣泛分布于真核細(xì)胞胞漿內(nèi),參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。AnnexinV能與磷酯酰絲氨酸(phosphatidylserine,簡稱PS)高親和力、特異地結(jié)合。在正常細(xì)胞中,PS主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè),在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期,細(xì)胞膜上的PS會外翻到細(xì)胞表面。用帶有綠色熒光的AnnexinV-FITC標(biāo)識出凋亡細(xì)胞。 本試劑盒還提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI),PI可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,呈現(xiàn)紅色熒光。保存條件: 4℃保存,AnnexinV-FITC、PI染色液需避光保存,半年有效。若長期保存,可以把PI染色液適當(dāng)分裝后-20℃保存,AnnexinV-FITC結(jié)合液可以直接-20℃保存。包裝規(guī)格:貨號規(guī)格包裝規(guī)格AnnexinV-FITC1×BindingBufferPIA005-15assays25ul2ml50ulA005-220assays100ul8ml200ulA005-350assays250ul20ml500ulA005-4100assays500ul40ml1mlA005-X100次以上[詳細(xì)]
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2018-09-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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用99Tcm-rh-Anexin V檢測放療或化療后腫瘤細(xì)胞凋亡
- 用99Tcm-rh-Anexin V檢測放療或化療后腫瘤細(xì)胞凋亡[詳細(xì)]
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2024-09-30 14:04
產(chǎn)品樣冊
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塑化劑檢測方法和國標(biāo)檢測方法
- 塑化劑檢測方法和國標(biāo)檢測方法[詳細(xì)]
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2011-06-02 00:00
課件
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HPLC-ELSD檢測方法對植物油的檢測分析
- HPLC-ELSD檢測方法對植物油的檢測分析[詳細(xì)]
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2024-09-28 01:14
其它
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皮革奶的檢測方法
- 皮革奶的檢測方法[詳細(xì)]
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2011-05-24 00:00
期刊論文
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