本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 1140閱讀次數(shù)

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• ELISA法在梅毒檢測(cè)中的臨床意義

  梅毒是一種性傳播疾病,近幾年來(lái)在我國(guó)的發(fā)病率呈明顯的上升趨勢(shì)。當(dāng)前我國(guó)實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒常用TRUST或快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）篩選后再用TPPA或螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA）等確證。前類試驗(yàn)有較高的生物學(xué)假陰性和假陽(yáng)性，后類試驗(yàn)則成本高、不能自動(dòng)化、結(jié)果判斷受主觀影響。重組抗原ELISA是近年發(fā)展檢測(cè)梅毒的方法，具有敏感性高、特異性好、自動(dòng)化程度高、易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)研究應(yīng)用其對(duì)臨床檢測(cè)進(jìn)行評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法　　1.1.1臨床標(biāo)本均來(lái)自廣東惠州市ZX人民醫(yī)院，包括性病門診124例梅毒血清，其中24例為一期梅毒、28例為早期潛伏梅毒、72例為二期梅毒，各期梅毒的診斷按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行［2］。59例門診病人（其中19例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、40例慢性乙型肝炎），172例獻(xiàn)血員血清由血站提供。1.1.2試劑TRUST試劑盒（上海諾泰ZG生物技術(shù)有限公司）；TPPA試劑盒（美國(guó)諾泰生物技術(shù)有限公司）；重組抗原ELISA試劑盒（雙抗原夾心）（上海伊麗薩生物科技有限公司）。1.1.3方法所有血清TRUST試劑盒、重組抗原ELISA試劑盒、TPPA試劑盒。試劑盒操作均在有效期之內(nèi)，嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行。TRUST和TPPA目測(cè)觀察結(jié)果；ELISA結(jié)果用酶標(biāo)儀測(cè)光密度（OD值），以cutoff值為界判斷結(jié)果。2結(jié)果　　3種血清學(xué)方法檢測(cè)355份血清白標(biāo)本的結(jié)果得知，ELISA和TPPA均為陽(yáng)性的24例一期梅毒和28例早期潛伏梅毒中，TRUST分別為4例和3例陰性，而ELISA和TPPA均為陰性的類風(fēng)濕患者的TRUST有4例為假陽(yáng)性。TRUST和ELISA的敏感性、特異性分為92.7%（115/124）、98.3%（227/231）和1**%（124/124）、99.1%（229/231）。TRUST與TPPA的符合率為96.3%（342/355）。ELISA與TPPA的符合率為99.4%（353/355）。3討論梅毒（Syphilis）是由蒼白螺旋體（TreponemaPallidum,TP）所引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的性傳播疾病，近年來(lái)在我國(guó)有逐年上升趨勢(shì)。選擇好的檢測(cè)方法，可以有效的盡快對(duì)梅毒進(jìn)行ZL和預(yù)防。在我國(guó)當(dāng)前大多數(shù)單位仍然采用檢測(cè)非特異性抗體（如TRUST、RPR）作為梅毒初篩，陽(yáng)性者再用檢測(cè)特異性抗體（如TPPA、TPHA）作確診。非特異性的檢測(cè)試劑成本低、操作簡(jiǎn)便，結(jié)果易讀，常用于梅毒的初篩，但其檢測(cè)的是非特異性的抗心磷脂抗體，易受許多因素的影響，對(duì)于其他一些非梅毒者如紅斑狼瘡、類風(fēng)濕自身免疫性疾病、孕婦等易產(chǎn)生生物學(xué)假陽(yáng)性，及人工假陽(yáng)性［1］，特異性低。在本研究中，有4例TRUST為陽(yáng)性的標(biāo)本經(jīng)TPPA確定為假陽(yáng)性；此外，抗心磷脂抗體在梅毒的非活動(dòng)期和ZL后易消失，對(duì)隱性梅毒早期或晚期梅毒和ZL后梅毒的敏感性低［2］，造成假陰性而漏診，本研究中一期、隱性梅毒共有8例TRUST陰性而TPPA為陽(yáng)性，表明單靠檢測(cè)非特異性抗體來(lái)篩查梅毒易造成漏檢，給健康人群帶來(lái)潛在的危害，應(yīng)引起檢測(cè)單位的足夠重視。TPPA采用梅毒螺旋體天然抗原作為診斷抗原，有很高的特異性，采用間接凝集反應(yīng)的原理，敏感性高，作為確證試驗(yàn)在世界許多國(guó)家被廣泛使用，但梅毒螺旋體至今不能體外人工培養(yǎng)，抗原來(lái)源困難，因而TPPA試劑盒成本高，此外，TPPA測(cè)定包括多次吸液過(guò)程，會(huì)造成操作者出錯(cuò)的風(fēng)險(xiǎn)［3］，還有該方法結(jié)果都依賴于操作者肉眼來(lái)判斷和解釋，結(jié)果不易保存。并且，先初篩再進(jìn)行確診操作煩瑣。近年來(lái)，隨著梅毒螺旋體全基因序列的解析，通過(guò)基因工程途徑生產(chǎn)重組蛋白抗原或多肽作為抗原，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）將TP重組抗原包被在微孔測(cè)定板上，使試劑盒成本大大降低，重組抗原特異性高、純度高，多種重組抗原聯(lián)合使用可得到更高的敏感性和特異性，結(jié)合ELISA雙抗原夾心法，使重組抗原雙抗體夾心法ELISA試劑盒具有高度特異、靈敏、能自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于大樣本的測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)中，在總共355份標(biāo)本中，ELISA假陽(yáng)性僅2份，無(wú)漏檢，以TPPA結(jié)果為參照，ELISA的敏感性、特異性為1**%、99.1%，表明ELISA與TPPA有良好的相關(guān)性；而TRUST的敏感性、特異性為92.7%、98.3%，ELISA敏感性和特異性均高于TRUST。國(guó)內(nèi)外的研究也表明，梅毒-ELISA是目前檢測(cè)梅毒的一種良好方法?！　】傊?，雙抗原夾心ELISA法具有敏感性高，特異性好，能自動(dòng)化，判斷結(jié)果客觀準(zhǔn)確，成本低，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，是一種集篩查和確診為一體的檢測(cè)梅毒的好方法，應(yīng)該在臨床檢測(cè)方面進(jìn)行推廣，普遍使用。【參考文獻(xiàn)】　?。?］葉應(yīng)撫.全國(guó)臨床檢測(cè)操作規(guī)程［M］.第2版.南京：東南大學(xué)出版社，1997,432.　?。?］楊文林，楊健，劉丹瑩,等.早期梅毒ZL前后血清學(xué)分析［J］.臨床皮膚科雜志，1998，27（5）：314.［3］龔匡隆.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的內(nèi)部質(zhì)量控制［J］.ZG皮膚性病學(xué)雜志，1997，11（1）：31.閱讀延伸：ELISA法與TRUST法在梅毒檢測(cè)中的比較梅毒是一種廣泛流行的性病，近年來(lái)在ZG發(fā)病率又有所回升。梅毒螺旋體（TreponemaPallidun）是梅毒的病原體，因其透明，不易著色，故又稱蒼白螺旋體。檢測(cè)梅毒螺旋體的方法有快速血漿反應(yīng)素卡片試驗(yàn)（RPR）和甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）。RPR法和TRUST法為非特異性血清試驗(yàn)，敏感性及特異性較差，肉眼判斷結(jié)果易受檢測(cè)者的主觀性影響，易出現(xiàn)漏檢和誤判。下面采用梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA）與TRUST法進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果報(bào)告如下[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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  2018-09-28 10:00

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