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Cytochrome Oxidase Activity
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CytochromeOxidaseActivityColorimetricAssayKitrev.04/13(Catalog#K287-100;100assays;Storeat-20°C)I.Introduction:CytochromecOxidase(EC1.9.3.1)orComplexIVisthefourthcomplexoftheElectronTransportChainlocatedinthemitochondrial(orbacterial)membrane.Itprovidesenergytothecellbycoup領(lǐng)electrontransportthroughtheCytochromecchainwiththeprocessofoxidativephosphorylation.ComplexIVcontains13differentsubunitsencodedbybothmitochondrialDNAandnuclearDNA.ItreceivesanelectronfromeachofthefourCytochromecmolecules,andtransfersittooneoxygenmolecule,convertingitintotwomoleculesofwater.Inthisprocess,italsobindstofourprotonmoleculesandtranslocatesthemacrossthemembranetoestablishelectrochemicalgradient,whichisutilizedforthesynthesisofATP.CytochromeOxidaseActivityAssayKitissimple,fastandhigh-throughputadaptable.Thisassaykitcanbeusedforpurifiedmitochondriaortissueextractscontainingmitochondria.TheactivityoftheenzymeisdeterminedcolorimetricallybyfollowingtheoxidationofreducedCytochromecasanabsorbancedecreaseat550nm.Theoverallreactionisasfollows:II.Application:FastandsimplemeasurementofCytochromeOxidaseenzymaticactivityin96-wellplateformat.Mitochondrialrespirationstudies,assemblyofthecomplexes,Mitochondriaoutermembraneintegrity.III.SampleType:PurifiedmitochondriaCells/TissueextractsIV.KitContents:V.UserSuppliedReagentsandEquipment:Multi-wellspectrophotometercapableofreadingabsorbance.Multi-channelpipetVI.StorageandHand領(lǐng):Storekitat-20°C,protectedfromlight.WarmAssayBuffertoroomtemperaturebeforeuse.KeepEnzymeDilutionBufferonice.Readtheentireprotocolbeforeperformingtheassay.VII.ReagentPreparationandStorageConditions:DTT:Aliquotandstoreat-20°C.Thawjustbeforeuse.Cytochromec:Reconstituteeachvialwith1mlofCytochromeOxidaseAssayBuffer.Mixbyvortexingtodissolvecompletely.Add5<lofDTTsolution.Mixwellandwaitfor15min.atroomtemperature.Keepthisworkingsolutionatroomtemperature.Afterassayiscompleted,aliquotandsaverestoftheCytochromecsolutionat-20°C.ThisisnowreducedformofCytochromec.VIII.ComplexIVActivityAssayProtocol:1.EfficiencyofReductionofCytochromec:Ina96-wellplate,mix20<lofreducedCytochromecwith100<lofCytochromeOxidaseAssayBuffer.PrepareaparallelwellasblankwithonlyAssayBuffer.ReadODat550nm.TheODat550nmofreducedCytochromecisbetween0.2-0.6.Ifnot,add5<lofDTT/mlofreconstitutedCytochromecandwaitfor15min.toreadagaintheOD.2.SamplePreparation:Isolatemitochondriafromculturedcells,yeastortissuesbyusingMitochondria/CytosolFractionationKit(BVcat.#K256)orYeastMitochondriaIsolationKit(K259-50)orusecellortissuelysate(BVcat.#1067).Therecommendedrangeofpurifiedmitochondriais0.5-5<gandtissueextractis1-60<gperreaction.Dilutethetestsamples,ifneededbyEnzymeDilutionBuffer.3.Cytochromecpreparation:Prepare1:6dilutionofCytochromecbyusingpre-warmedCytochromeOxidaseAssayBuffer(onepartofCytochromecto5partsofbuffer)inaseparatetubedependingonthenumberofassaysamplesandcontrols.Prepare120<lofdilutedCytochromecperreaction.4.ComplexIVActivityAssay:Beforethereaction,setthespectrophotometerat550nmonkineticprogramfor30-45minutesat30secinterval.Addthetestsamples(approx.volume5-10<l)toeachwellofa96-wellplate.Fornegativecontrol(Blank),addequalvolumeofEnzymeDilutionBuffer.Add120<lofthedilutedCytochromecfromStep3toeachsampleandcontrolusingamultichannelpipette.ShakeandimmediatelyreadandrecorddecreaseinODoveraperiodof30-45min.Note:Therateofthereactionisrelativetoacontrolornormalsample.Therateiscalculatedinlinearrange.5.Calculations:CalculaterateofthereactionbycalculatingchangeinOD:OD/minbyusingthemaximumlinearrate.Theoxidation
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Cytochrome Oxidase Activity
- CytochromeOxidaseActivityColorimetricAssayKitrev.04/13(Catalog#K287-100;100assays;Storeat-20°C)I.Introduction:CytochromecOxidase(EC1.9.3.1)orComplexIVisthefourthcomplexoftheElectronTransportChainlocatedinthemitochondrial(orbacterial)membrane.Itprovidesenergytothecellbycoup領(lǐng)electrontransportthroughtheCytochromecchainwiththeprocessofoxidativephosphorylation.ComplexIVcontains13differentsubunitsencodedbybothmitochondrialDNAandnuclearDNA.ItreceivesanelectronfromeachofthefourCytochromecmolecules,andtransfersittooneoxygenmolecule,convertingitintotwomoleculesofwater.Inthisprocess,italsobindstofourprotonmoleculesandtranslocatesthemacrossthemembranetoestablishelectrochemicalgradient,whichisutilizedforthesynthesisofATP.CytochromeOxidaseActivityAssayKitissimple,fastandhigh-throughputadaptable.Thisassaykitcanbeusedforpurifiedmitochondriaortissueextractscontainingmitochondria.TheactivityoftheenzymeisdeterminedcolorimetricallybyfollowingtheoxidationofreducedCytochromecasanabsorbancedecreaseat550nm.Theoverallreactionisasfollows:II.Application:FastandsimplemeasurementofCytochromeOxidaseenzymaticactivityin96-wellplateformat.Mitochondrialrespirationstudies,assemblyofthecomplexes,Mitochondriaoutermembraneintegrity.III.SampleType:PurifiedmitochondriaCells/TissueextractsIV.KitContents:V.UserSuppliedReagentsandEquipment:Multi-wellspectrophotometercapableofreadingabsorbance.Multi-channelpipetVI.StorageandHand領(lǐng):Storekitat-20°C,protectedfromlight.WarmAssayBuffertoroomtemperaturebeforeuse.KeepEnzymeDilutionBufferonice.Readtheentireprotocolbeforeperformingtheassay.VII.ReagentPreparationandStorageConditions:DTT:Aliquotandstoreat-20°C.Thawjustbeforeuse.Cytochromec:Reconstituteeachvialwith1mlofCytochromeOxidaseAssayBuffer.Mixbyvortexingtodissolvecompletely.Add5<lofDTTsolution.Mixwellandwaitfor15min.atroomtemperature.Keepthisworkingsolutionatroomtemperature.Afterassayiscompleted,aliquotandsaverestoftheCytochromecsolutionat-20°C.ThisisnowreducedformofCytochromec.VIII.ComplexIVActivityAssayProtocol:1.EfficiencyofReductionofCytochromec:Ina96-wellplate,mix20<lofreducedCytochromecwith100<lofCytochromeOxidaseAssayBuffer.PrepareaparallelwellasblankwithonlyAssayBuffer.ReadODat550nm.TheODat550nmofreducedCytochromecisbetween0.2-0.6.Ifnot,add5<lofDTT/mlofreconstitutedCytochromecandwaitfor15min.toreadagaintheOD.2.SamplePreparation:Isolatemitochondriafromculturedcells,yeastortissuesbyusingMitochondria/CytosolFractionationKit(BVcat.#K256)orYeastMitochondriaIsolationKit(K259-50)orusecellortissuelysate(BVcat.#1067).Therecommendedrangeofpurifiedmitochondriais0.5-5<gandtissueextractis1-60<gperreaction.Dilutethetestsamples,ifneededbyEnzymeDilutionBuffer.3.Cytochromecpreparation:Prepare1:6dilutionofCytochromecbyusingpre-warmedCytochromeOxidaseAssayBuffer(onepartofCytochromecto5partsofbuffer)inaseparatetubedependingonthenumberofassaysamplesandcontrols.Prepare120<lofdilutedCytochromecperreaction.4.ComplexIVActivityAssay:Beforethereaction,setthespectrophotometerat550nmonkineticprogramfor30-45minutesat30secinterval.Addthetestsamples(approx.volume5-10<l)toeachwellofa96-wellplate.Fornegativecontrol(Blank),addequalvolumeofEnzymeDilutionBuffer.Add120<lofthedilutedCytochromecfromStep3toeachsampleandcontrolusingamultichannelpipette.ShakeandimmediatelyreadandrecorddecreaseinODoveraperiodof30-45min.Note:Therateofthereactionisrelativetoacontrolornormalsample.Therateiscalculatedinlinearrange.5.Calculations:CalculaterateofthereactionbycalculatingchangeinOD:OD/minbyusingthemaximumlinearrate.Theoxidation[詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
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小鼠細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450)ELISA試劑盒說明書
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2018-09-13 10:00
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小鼠細(xì)胞色素C(Cytochrome C)ELISA試劑盒說明書
- 小鼠細(xì)胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠CytochromeC單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeC與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠CytochromeC,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CytochromeC濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeC濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):2ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液200ul。在**管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊,上下混勻。4.即用,或放-20/-70℃保存3天。計算結(jié)果時乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本CytochromeC的水平可能有較大差異,請根據(jù)實際情況靈活掌握稀釋度)5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH)。檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeC含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeC檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的小鼠CytochromeC。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠細(xì)胞色素C(Cytochrome C)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠細(xì)胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠CytochromeC單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeC與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠CytochromeC,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,CytochromeC濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeC濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeC含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeC檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠CytochromeC。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
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人細(xì)胞色素C(Cytochrome C)ELISA試劑盒說明書
- 人細(xì)胞色素C(CytochromeC)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CytochromeC單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeC與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CytochromeC,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CytochromeC濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeC濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清、血漿作1:10稀釋(取20ul,加標(biāo)本稀釋液180ul,稀釋10倍)。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeC含量即可,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeC檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人CytochromeC。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
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大鼠細(xì)胞色素CP450(Cytochrome C P450)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠細(xì)胞色素CP450(CytochromeCP450)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠CytochromeCP450單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeCP450與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠CytochromeCP450,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,CytochromeCP450濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeCP450濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeCP450含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeCP450檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠CytochromeCP450。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
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人細(xì)胞色素CP450(Cytochrome C P450)ELISA試劑盒說明書
- 人細(xì)胞色素CP450(CytochromeCP450)ELISA試劑盒原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CytochromeCP450單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeCP450與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CytochromeCP450,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CytochromeCP450濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeCP450濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeCP450含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeCP450檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人CytochromeCP450。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
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