本文由 研域（上海）化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

2018-09-14 10:01 763閱讀次數(shù)

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• ELISA試劑盒檢測(cè)樣本的原理和步驟

  ELISA試劑盒檢測(cè)樣本的原理和步驟標(biāo)本：細(xì)胞液、體液以及組織勻漿使用說(shuō)明書(shū)產(chǎn)品編號(hào)：E01H0019本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！預(yù)期應(yīng)用ELISA試劑盒定量檢測(cè)人細(xì)胞液、體液以及組織勻漿中8羥基脫氧鳥(niǎo)苷的含量。自備物品1.酶標(biāo)儀（盡量提前預(yù)熱）2.微量加液器、吸頭3.蒸餾水或去離子水以及濾紙樣本的采集及保存一般的生物標(biāo)本包括有：血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等一般為無(wú)菌操作，低溫保存（-80℃、液氮）一．如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求：1、器官實(shí)質(zhì)不能太小2、以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳：如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳3、同一病例裝入同一容器，并做好標(biāo)記4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲(chǔ)存和運(yùn)輸5、實(shí)質(zhì)性器官的處理：5.1、取實(shí)質(zhì)性器官約0.5mg左右，充分剪碎或研磨5.2、加入約500ul的PBS/生理鹽水，充分混勻5.3、離心5000rmpx10min，去上清5.4、-20℃保存，作為待檢標(biāo)本（切勿反復(fù)凍融）二．體液（常見(jiàn)的包括血清、血漿、唾液以及尿液等）的處理方式1、血液包括血漿和血清它們的主要區(qū)別就是：血清凝血而血漿不凝血，所以它們的處理方式也就不一樣1.1、采集血漿時(shí)一般不加抗凝劑（主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽），采集后立即離心800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?.2、如要采集血清，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般飯后半小時(shí)內(nèi)不易采集，因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，**的采集的時(shí)間時(shí)空腹采集；3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般隔夜尿不采集；4、組織提取液如肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫蝗S便以及天然孔排泄物：采集后一般現(xiàn)用PBS/生理鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆?；四．活檢組織一般進(jìn)行穿刺檢測(cè)，Z常見(jiàn)的就是肝活檢，像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進(jìn)行活檢簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確。三、表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)（一）真核表達(dá)產(chǎn)物1、細(xì)胞上清（分泌性蛋白）1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；1.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；2、細(xì)胞裂解物（非分泌性蛋白）2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，然后用001MPBS（pH7.4）將細(xì)胞吹下至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；2.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01MPBS（pH7.4）重懸，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；（二）原核（大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)）表達(dá)產(chǎn)物1、表達(dá)上清（非融合性蛋白）直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；2、菌體裂解物（融合性蛋白）直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmpx10min，棄上清，沉淀用PBS洗一遍，500-800rmpx10min，棄上清，DDW重懸沉淀，冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，如有需要可進(jìn)行透析或純化處理；ELISA試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。2．加樣：加樣時(shí)，要控制加樣速度，避免**孔與Z后一孔之見(jiàn)的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過(guò)多，可使用多道移液器。3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。4.洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響Z后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量如樣品濃度過(guò)高，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。7.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，SY幾個(gè)標(biāo)本），如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn)，可和所購(gòu)經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。操作步驟1.取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫（20-25℃）內(nèi)進(jìn)行。2.取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。3.空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水；4.在樣品孔中加入10μl的生物素；（不含空白對(duì)照孔,切忌：生物素只加樣品孔?。?.在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；（不含空白對(duì)照孔）6.將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng)1小時(shí)；（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）7.充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）8.酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干；9.各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對(duì)照孔）10.20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；ELISA試劑盒結(jié)果判斷1.30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；2.以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；3.根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍；4.敏感度：0.1ng/ml[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

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• ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟

  上海勁馬生物科技有限公司ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟實(shí)驗(yàn)方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）檢測(cè)原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法操作步驟：具體請(qǐng)參照說(shuō)明書(shū)（詳細(xì)說(shuō)明書(shū)請(qǐng)聯(lián)系我司業(yè)務(wù)人員：021-60517348，13817140470。）注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請(qǐng)避光保存。7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。保存條件及有效期1．試劑盒保存：2-8℃2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2024-09-11 18:03

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• ELISA的概念、原理、操作步驟

  ELISA的概念、原理、操作步驟ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域?！　。ㄒ唬≡怼　LISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的GX催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中，通過(guò)不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測(cè)抗體的間接法（圖a）、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法。　?。ǘ〔僮鞑襟E方法一　用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:　　1.　包被：用0.05MPH9.碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱洗滌，下同）。　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）?！　?.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌?！　?.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘?！　?.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性?！　》椒ǘ∮糜跈z測(cè)未知抗體的間接法：　　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,Z后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。5.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。（三）　試劑器材　　1.　試劑　?。?）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸餾水至1000ml　　（2）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO412H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05％0.5ml加蒸餾水至1000ml　?。?）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA）0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用?！　。?）　終止液（2MH2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml?！　。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml　0.1M檸檬酸（19.2克／L）24.3ml　加蒸餾水50ml。　?。?）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無(wú)水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）10ml0.75％H2O2　32μl　?。?）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5）1ml　3％H2O2　2μl　　（8）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。　?。?）　正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。　　2.　器材:　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。　?。?）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等?！　。?）　4℃冰箱，37℃孵育箱。（四）　注意事項(xiàng)　　1.　正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說(shuō)明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉?！　?.　在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。　?。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的Z適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值Zda而蛋白量Z少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg／ml?！　。?）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度?！　。?）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA相關(guān)儀器試劑設(shè)備酶標(biāo)儀洗板機(jī)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀ELISA檢測(cè)試劑盒ELISPOT檢測(cè)ELISA試劑盒抗體酶標(biāo)板[詳細(xì)]

  2018-11-15 10:03

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• ELISA試劑盒的洗滌步驟

  ELISA試劑盒的洗滌在ELISA進(jìn)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)進(jìn)程，但卻也決議著實(shí)驗(yàn)的勝敗。ELSIA?是靠洗刷來(lái)到達(dá)別離游離的和聯(lián)絡(luò)的酶符號(hào)物的目的。通過(guò)洗刷以根除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體聯(lián)絡(luò)的物質(zhì)，以及在反應(yīng)進(jìn)程中非特異性地吸附于固相載體的煩擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗刷時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的煩擾物質(zhì)洗刷下來(lái)?？梢哉f(shuō)在ELISA操作中，洗刷是Z主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)導(dǎo)致操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)厲按懇求洗刷，不得大意。洗刷的方法除某些ELISA儀器配有格外的主動(dòng)洗刷儀外，手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種，進(jìn)程如下：浸泡式a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液；b.用洗刷液過(guò)洗一遍（將洗刷液注滿板孔后，即甩去）；c.浸泡，即將洗刷液注滿板孔，放置1-2分鐘，間歇搖晃，浸泡時(shí)間不可隨意縮短；d.吸干孔內(nèi)液體。吸干應(yīng)徹底，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干；e.重復(fù)操作c和d，洗刷3-4次（或按說(shuō)明規(guī)矩）。ELISA試劑盒在間接法中如本底較高，可增加洗刷次數(shù)或延伸浸泡時(shí)間。微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的聯(lián)絡(luò)是疏水性的，非離子型洗刷劑既含疏水基團(tuán)，也含親水基團(tuán)，其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵聯(lián)絡(luò)，然后削弱蛋白質(zhì)與固相載體的聯(lián)絡(luò)，并借助于親水基團(tuán)和水分子的聯(lián)絡(luò)效果，使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液情況，然后脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑通常是吐溫20，其濃度可在0.05%-0.2%之間，高于0.2%時(shí)，可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實(shí)驗(yàn)的靈敏度。流水沖刷式流水沖刷法開(kāi)端用于小珠載體的洗刷，洗刷液僅為蒸餾水乃至可用自來(lái)水。洗刷時(shí)附接一格外設(shè)備，使小珠在流水沖擊下不斷地翻滾淋洗，持續(xù)沖刷2分鐘后，吸干液體，再用蒸餾水浸泡2分鐘，吸干即可。浸泡式猶如盆浴，流水沖刷式則比方淋浴，其洗刷效果更為徹底，且也簡(jiǎn)潔、敏捷。已有實(shí)驗(yàn)標(biāo)明，流水沖刷式一樣也適用于微量滴定板的洗刷。ELISA試劑盒洗刷時(shí)設(shè)法加大水流量或加大水壓，讓水流沖擊板孔表面，洗刷效果更佳。[詳細(xì)]

  2024-09-29 06:47

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• 大鼠多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟

  大鼠多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟[詳細(xì)]

  2015-04-21 00:00

  操作手冊(cè)

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• 植物凝集素ELISA 檢測(cè)試劑盒操作步驟

  植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒PHA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn).已知PHA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將PHA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PHA的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制：植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：40nmol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒自備材料蒸餾水。加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng):植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法:植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備:植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：0nmol/L（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟:植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案:植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/L）A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析:植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒1、儀器值：植物凝集素ELISA檢測(cè)試劑盒于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PHA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PHA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-40nmol/L4、敏感度：0.1nmol/L[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• ELISA實(shí)驗(yàn)原理、步驟、問(wèn)題分析

  上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)各種屬elisa試劑盒，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí)性。我公司對(duì)試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問(wèn)題，我們無(wú)條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息，請(qǐng)來(lái)的咨詢：電話：021-6052049813636351217業(yè)務(wù)QQ:1005074258何經(jīng)理ELISA實(shí)驗(yàn)原理、步驟、ELISA問(wèn)題分析ELISA實(shí)驗(yàn)原理酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測(cè)定的文章，使得1966年開(kāi)始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度類型及步驟ELISA的主要常用類型及步驟1.間接法測(cè)抗體間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（二抗）以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。2）加稀釋的樣本，保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，樣本中的其他成份在洗滌過(guò)程中被洗去。3）加酶標(biāo)抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合，從而間接記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。4）加底物顯色。2.雙抗體夾心法測(cè)抗原雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原Z常用的方法，操作步驟如下：1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。2）加受檢樣本，保溫反應(yīng)。樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關(guān)。4）加底物顯色。3.雙抗原夾心法測(cè)抗體反應(yīng)原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體4.競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，Z后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。ELISAQ&A如何選擇合適的陽(yáng)性對(duì)照?陽(yáng)性對(duì)照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成一致，一般陽(yáng)性對(duì)照多以含蛋白保護(hù)劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如，以人血清為標(biāo)本的測(cè)定，陽(yáng)性對(duì)照多用確定的病人血清或者以復(fù)鈣人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。如何選擇合適的陰性對(duì)照?陰性對(duì)照的基本組成也應(yīng)該盡量與檢測(cè)樣本的組成一致，**先行檢測(cè)確定其中不含待檢物質(zhì)。比如，檢測(cè)人血清標(biāo)本時(shí)，陰性對(duì)照應(yīng)該選擇正常人血清;檢測(cè)免疫動(dòng)物血清中抗體效價(jià)時(shí)，陰性對(duì)照應(yīng)該選擇該動(dòng)物的免疫前血清。如何選擇Zyou化的包被條件?1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上，再通過(guò)特異性反應(yīng)使抗原固相化）。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上，一般都先使其與無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過(guò)夜或者37度保溫2小時(shí)，我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被濃度的選擇包被的Z適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對(duì)特定包被抗原的Z適包被濃度需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。包板后需要封閉嗎?應(yīng)該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。一般說(shuō)來(lái)，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作時(shí)洗滌徹底，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測(cè)定中，封閉一般是必不可少的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價(jià)廉而且封閉能力強(qiáng)，不過(guò)5%脫脂奶粉只適合短期內(nèi)使用，不宜長(zhǎng)期保存，所以試劑盒中較少使用。如何正確使用酶結(jié)合物?1.酶結(jié)合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)（例如1%BSA或5%脫脂奶粉），通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)YZ酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠YZ蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20（0.05%的濃度較為適宜）。2.正確稀釋酶結(jié)合物酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定，濃度過(guò)高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過(guò)低則會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性信號(hào)的減弱。酶結(jié)合物**在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長(zhǎng)期保存，因?yàn)榈蜐舛鹊拿附Y(jié)合物極易失活。問(wèn)題可能的原因解決方法陰性對(duì)照產(chǎn)生了陽(yáng)性的結(jié)果試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材洗板出現(xiàn)問(wèn)題更換更強(qiáng)配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長(zhǎng)洗板時(shí)間如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn)，有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應(yīng)更換包被抗體或二抗使用了過(guò)多的抗體減少抗體使用量整板出現(xiàn)高背景二抗產(chǎn)生了非特異性吸附減少二抗使用量，縮短二抗反應(yīng)時(shí)間顯色液不新鮮使用現(xiàn)配的顯色液顯色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)沒(méi)有終止控制顯色反應(yīng)時(shí)間，及時(shí)終止反應(yīng)試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材反應(yīng)溫度過(guò)高導(dǎo)致的非特異性吸附嚴(yán)格控制反應(yīng)在Z適溫度下進(jìn)行封閉條件不佳導(dǎo)致的非特異性吸附更換封閉能力更強(qiáng)的封閉液，延長(zhǎng)封閉時(shí)間反應(yīng)信號(hào)偏低包被條件不合適提高包板濃度，延長(zhǎng)包板時(shí)間抗原抗體反應(yīng)不夠充分延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，確保反應(yīng)在Z適溫度下進(jìn)行顯色液配方不恰當(dāng)增加顯色底物的量二抗結(jié)合不夠提高二抗?jié)舛龋娱L(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，更換效果更好的二抗梯度稀釋做ELISA時(shí)產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象酶標(biāo)板疊放導(dǎo)致傳熱不均勻，各孔反應(yīng)溫度有差異盡量避免酶標(biāo)板疊放在一起移液器稀釋時(shí)未能保持連續(xù)性定期校準(zhǔn)移液器，確保移液器的正確使用反應(yīng)溶液蒸發(fā)酶標(biāo)板用封條密封或者加蓋洗板不均勻確定洗板機(jī)能夠正常工作酶標(biāo)板底有雜物或者水珠讀板時(shí)清理干凈酶標(biāo)板底部[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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• ELISA試劑盒操作步驟

  ELISA試劑盒操作步驟[詳細(xì)]

  2015-06-27 00:00

  期刊論文

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• ELISA實(shí)驗(yàn)中給檢測(cè)樣本加樣的步驟詳解

  ELISA實(shí)驗(yàn)中給檢測(cè)樣本加樣的步驟詳解：1.細(xì)胞上清：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。2.腦脊液：前處理必須是細(xì)胞離心去除，每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液直接稀釋。3.血清血漿：加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本,如稀釋量大，請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。①血清標(biāo)本應(yīng)是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；②血漿標(biāo)本，推薦用EDTA的方法收集若待測(cè)樣本不能及時(shí)檢測(cè)，標(biāo)本收集后請(qǐng)分裝，凍存于－20℃，避免反復(fù)凍融。③血清標(biāo)本不應(yīng)添加任何防腐劑或抗凝劑；④標(biāo)本應(yīng)清澈透明，檢測(cè)前樣本中如有懸浮物應(yīng)通過(guò)離心去除。⑤請(qǐng)勿使用溶血，高血脂或污染的標(biāo)本檢測(cè)，否則結(jié)果將不準(zhǔn)確。4.組織勻漿液的樣本：要制備過(guò)程中需要在緩沖液中加入蛋白酶YZ劑，防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解，造成檢測(cè)結(jié)果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實(shí)驗(yàn)參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進(jìn)行，否則就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。具體是加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標(biāo)本，需稀釋時(shí)，請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 魚(yú)甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實(shí)驗(yàn)原理

  魚(yú)甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實(shí)驗(yàn)原理[詳細(xì)]

  2015-04-22 00:00

  操作手冊(cè)

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• 人硫氧還蛋白還原酶ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟

  人(Human)硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗(yàn)原理：TrxR試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知TrxR濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將TrxR和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中TrxR的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：80ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗TrxR抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備材料1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。人(Human)硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：80ng/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40ng/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20ng/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ng/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0ng/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5ng/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品人(Human)硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA檢測(cè)試劑盒局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的TrxR標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的TrxR含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-80ng/ml4、敏感度：0.1ng/ml[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

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• E+H液位傳感器的分類和檢測(cè)步驟

  E+H液位傳感器，不僅具有高靈敏度、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、工作可靠等特點(diǎn)，在冶金、化工、環(huán)保等行業(yè)有著重要的應(yīng)用；而且種類眾多，按照不同的分類方法，E+H液位傳感器的種類是不同的。為此接下來(lái)小編為大家介紹E+H液位傳感器的分類方法。按E+H液位傳感器的所屬學(xué)科分類，可分為物理型、化學(xué)型和生物型。把被測(cè)量轉(zhuǎn)換成電址參數(shù);化學(xué)型是利用化學(xué)反應(yīng)，物理型是利用各種物理效應(yīng)，把被測(cè)量轉(zhuǎn)換成為電量參數(shù);生物型是利用生物按E+H液位傳感器轉(zhuǎn)換過(guò)程中的能量關(guān)系分類，可分為能Z轉(zhuǎn)換型和能Z控制型。能量轉(zhuǎn)換型是磁性翻柱E+H液位傳感器直接將被測(cè)量的能Z轉(zhuǎn)換為輸出量的能量;能量控制型是由外部供給E+H液位傳感器能量。而由被測(cè)量來(lái)控制輸出的能量。按E+H液位傳感器轉(zhuǎn)換原理分類，可分為電阻式、微波式、激光式、超聲式、光電式、熱電式、電感式、電容式、電磁式、壓電式、髯爾式、光纖式及核輻射式等等。按E+H液位傳感器轉(zhuǎn)換過(guò)程中的物理現(xiàn)象分類，可分為結(jié)構(gòu)型和物性型。結(jié)構(gòu)型是依靠E+H液位傳感器結(jié)構(gòu)變化來(lái)實(shí)現(xiàn)參數(shù)轉(zhuǎn)換的;物性型是利用E+H液位傳感器的敏感元件特性變化實(shí)現(xiàn)參數(shù)轉(zhuǎn)換的。按E+H液位傳感器的用途分類.可分為重址、位移、速度、加速度、力、電壓、電流、溫度、壓力、流傲、功率物性參數(shù)等等。效應(yīng)及機(jī)體部分組織、微生物，把被測(cè)量轉(zhuǎn)換為電Z參數(shù)。按E+H液位傳感器輸出量的形式分類，可分為模擬式和數(shù)字式傳感器。模擬式E+H液位傳感器槍出為模擬量;數(shù)字式E+H液位傳感器輸出直接為數(shù)字量。按E+H液位傳感器的功能分類.可分為傳統(tǒng)型和智能型。傳統(tǒng)型磁翻板E+H液位傳感器一般是指只具有顯示和輸出功能的E+H液位傳感器;真正意義上的智能E+H液位傳感器，推理、感知、應(yīng)該具備學(xué)習(xí)、通訊等功能，具有精度高、性能價(jià)格比高、使用方便等特點(diǎn)。E+H液位傳感器，具有耐酸、防潮、防震、防腐蝕等優(yōu)點(diǎn)，并在環(huán)保、化工、電力、冶金等行業(yè)有著重要的應(yīng)用。但如果平時(shí)不注意保養(yǎng)，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的使用后E+H液位傳感器就會(huì)出現(xiàn)故障問(wèn)題，不僅使得測(cè)量精度降低，而且還會(huì)影響E+H液位傳感器的使用壽命。因此需要定期對(duì)E+H液位傳感器進(jìn)行檢測(cè)。E+H液位傳感器的檢測(cè)步驟：一、把有故障的E+H液位傳感器從儀表上拆下來(lái)，用萬(wàn)用表兩表棒去測(cè)傳感器兩端，若萬(wàn)用表上顯示的電阻值很大，要更換同類型傳感器。二、把E+H液位傳感器從儀表輸入端拆下，再用任何一根導(dǎo)線把儀表E+H液位傳感器輸入端短路。通電時(shí)，儀表上排數(shù)碼管顯示值約為室溫時(shí)，說(shuō)明E+H液位傳感器內(nèi)部連線開(kāi)路，應(yīng)更換同類型傳感器。三、把上述故障儀表的E+H液位傳感器拆去，換用旁邊運(yùn)行正常的同種分度號(hào)儀表上接入的傳感器，通電后，原故障儀表上排數(shù)碼管顯示發(fā)熱體溫度時(shí)，說(shuō)明E+H液位傳感器內(nèi)部連線開(kāi)路，更換同類型傳感器。以上內(nèi)容是對(duì)E+H液位傳感器的檢測(cè)步驟的介紹，希望的對(duì)大家的使用有所幫助。[詳細(xì)]

  2018-10-16 10:01

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• 人促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測(cè)試劑盒的使用原理

  人促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測(cè)試劑盒的使用原理[詳細(xì)]

  2024-09-20 13:31

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• 小鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟

  小鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。小鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）ELISA檢測(cè)試劑盒試劑的準(zhǔn)備1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：800pg/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。400pg/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200pg/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100pg/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50pg/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25pg/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0pg/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• 人ELISA試劑盒操作步驟的注意要點(diǎn)

  我司將在本章中正確講解人ELISA試劑盒各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球兔ELSIA試劑盒，國(guó)外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說(shuō)明，必能得出。Z后將人ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時(shí)候更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴還是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng)，人ELISA試劑盒操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時(shí)可根據(jù)的要求控制溫育。人ELISA試劑盒原材料批量進(jìn)口與自配的特殊配方稀釋劑（預(yù)包被微孔板的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％），經(jīng)過(guò)嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測(cè)試及穩(wěn)定性試驗(yàn)，明確了其高靈敏度對(duì)檢測(cè)的樣本達(dá)到好的性能。ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)通常用于定性和定量評(píng)估細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子、磷酸化后目標(biāo)、免疫球蛋白和其他免疫標(biāo)記，保證了產(chǎn)品的高品質(zhì)性能的同時(shí)兼顧成本。歡迎來(lái)電咨詢我司人Elisa試劑盒產(chǎn)品：人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)ELISA試劑盒人?；碳さ鞍?ASP)ELISA試劑盒人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒人未磷酸化類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1ELISA試劑盒人嗜鉻蛋白A(CgA)ELISA試劑盒人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤YZ蛋白(pRB)ELISA試劑盒人生長(zhǎng)激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA試劑盒人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒人去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)ELISA試劑盒人羥脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒人強(qiáng)啡肽(Dyn)ELISA試劑盒人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法和步驟

  農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法和步驟[詳細(xì)]

  2024-09-18 19:21

  專利

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• 人白細(xì)胞介素15（IL-15）ELISA試劑盒原理檢測(cè)

  人白細(xì)胞介素15（IL-15）ELISA試劑盒原理檢測(cè)[詳細(xì)]

  2015-04-23 00:00

  其它

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• 鎂原卟啉（Mg-Proto）elisa試劑盒檢測(cè)原理

  植物鎂原卟啉（Mg-Proto）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：96T0.4ng/L-20ng/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中鎂原卟啉（Mg-Proto）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法。用鎂原卟啉（MG-PROTO）抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的鎂原卟啉（MG-PROTO）與包被的鎂原卟啉（MG-PROTO）競(jìng)爭(zhēng)生物素標(biāo)記的抗鎂原卟啉（MG-PROTO）單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變?yōu)辄S色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，鎂原卟啉（MG-PROTO）濃度與OD450值之間呈反比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中鎂原卟啉（MG-PROTO）的濃度操作步驟1.在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各50μL2.立即在各孔中加入50μL生物素化抗體工作液3.37℃孵育45分鐘4.洗滌3次5.加入100μL酶結(jié)合物工作液，37℃孵育30分鐘6.洗滌5次7.加入90μL底物溶液，37℃孵育15分鐘左右8.加入50μL終止液，立即在450nm波長(zhǎng)處測(cè)量OD值9.結(jié)果計(jì)算[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人整合素αⅤβ3 ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

  人(Human)整合素αⅤβ3（ITGαⅤβ3）ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿試驗(yàn)原理：ITGαⅤβ3試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知ITGαⅤβ3濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將ITGαⅤβ3和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ITGαⅤβ3的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：800ug/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的抗ITGαⅤβ3抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型標(biāo)本稀釋液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自備材料1．蒸餾水。2．加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1．避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2．實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。人(Human)整合素αⅤβ3（ITGαⅤβ3）ELISA檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)1．試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。2．實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6．洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7．底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8．加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9．按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液5、保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1．標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：800ug/ml（6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。400ug/ml（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ug/ml（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ug/ml（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ug/ml（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25ug/ml（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ug/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2．洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1．使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3．加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。4．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6．甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。8．取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9．在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ug/ml）A800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2525樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。人(Human)整合素αⅤβ3（ITGαⅤβ3）ELISA檢測(cè)試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的ITGαⅤβ3標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的ITGαⅤβ3含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-800ug/ml4、敏感度：1.0ug/ml[詳細(xì)]

  2024-10-02 09:30

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• 兔抗磷脂抗體（APA）ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟

  兔抗磷脂抗體（APA）ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟[詳細(xì)]

  2016-01-26 00:00

  報(bào)價(jià)單

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