本文由 上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商 整理匯編

2018-11-15 10:03 1673閱讀次數(shù)

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• ELISA的概念、原理、操作步驟

  ELISA的概念、原理、操作步驟ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。　?。ㄒ唬≡怼　LISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的GX催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法?！　。ǘ〔僮鞑襟E方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:　　1.　包被：用0.05MPH9.碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）?！　?.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）?！　?.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌?！　?.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘?！　?.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性?！　》椒ǘ∮糜跈z測未知抗體的間接法：　　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,Z后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。5.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。（三）　試劑器材　　1.　試劑　?。?）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　2.93克　　加蒸餾水至1000ml　　（2）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M　KH2PO40.2克　Na2HPO412H2O　2.9克　NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05％0.5ml加蒸餾水至1000ml　?。?）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA）0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。　?。?）　終止液（2MH2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml?！　。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml　0.1M檸檬酸（19.2克／L）24.3ml　加蒸餾水50ml?！　。?）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）10ml0.75％H2O2　32μl　?。?）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5）1ml　3％H2O2　2μl　?。?）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體?！　。?）　正常人血清和陽性對照血清?！　?.　器材:　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶?！　。?）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等?！　。?）　4℃冰箱，37℃孵育箱。（四）　注意事項　　1.　正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。　　2.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好?！　。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的Z適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值Zda而蛋白量Z少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。　?。?）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。　?。?）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA相關(guān)儀器試劑設(shè)備酶標(biāo)儀洗板機化學(xué)發(fā)光檢測儀ELISA檢測試劑盒ELISPOT檢測ELISA試劑盒抗體酶標(biāo)板[詳細(xì)]

  2018-11-15 10:03

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• ELISA試劑盒實驗原理與操作步驟

  上海勁馬生物科技有限公司ELISA試劑盒實驗原理與操作步驟實驗方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法操作步驟：具體請參照說明書（詳細(xì)說明書請聯(lián)系我司業(yè)務(wù)人員：021-60517348，13817140470。）注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1．試劑盒保存：2-8℃2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2024-09-11 18:03

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• 密煉機的操作步驟及工作原理

  密煉機的操作步驟及工作原理[詳細(xì)]

  2024-09-18 11:19

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• ELISA試劑盒操作步驟

  ELISA試劑盒操作步驟[詳細(xì)]

  2015-06-27 00:00

  期刊論文

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• 魚甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實驗原理

  魚甲狀腺素（T4）ELISA試劑盒操作步驟及實驗原理[詳細(xì)]

  2015-04-22 00:00

  操作手冊

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• ACTIVA的分析原理的概念介紹

  ACTIVA的分析原理的概念介紹[詳細(xì)]

  2007-07-12 00:00

  期刊論文

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• 分光光度計的操作步驟

  分光光度計的操作步驟[詳細(xì)]

  2011-08-18 00:00

  期刊論文

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• 加氫反應(yīng)釜的操作步驟

  加氫反應(yīng)釜的操作步驟[詳細(xì)]

  2016-07-28 00:00

  應(yīng)用文章

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• 生物安全柜的操作步驟

  生物安全柜的操作步驟[詳細(xì)]

  2016-09-21 00:00

  課件

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• 人羥脯氨酸Elisa試劑盒操作步驟

  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。EPI豬腎上腺素規(guī)格：48T/96THSP-90豬熱休克蛋白90規(guī)格：48T/96THSP-70豬熱休克蛋白70規(guī)格：48T/96THSP-40豬熱休克蛋白40規(guī)格：48T/96THSP-20豬熱休克蛋白20規(guī)格：48T/96TNE豬去甲腎上腺素規(guī)格：48T/96TGLUT2豬葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2規(guī)格：48T/96TPrednisolone豬潑尼松龍規(guī)格：48T/96TCORT豬皮質(zhì)酮/腎上腺酮規(guī)格：48T/96TCortisol豬皮質(zhì)醇規(guī)格：48T/96TBNP豬腦鈉素/腦鈉尿肽規(guī)格：48T/96TSGLT1豬鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運載體1規(guī)格：48T/96TeNOS-3豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3規(guī)格：48T/96TeNOS豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶規(guī)格：48T/96TET-1豬內(nèi)皮素1規(guī)格：48T/96T[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• 雞γ干擾素ELISA試劑盒操作步驟

  操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。120pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。[詳細(xì)]

  2018-10-01 10:00

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• 牛血紅蛋白ELISA試劑盒操作步驟

  牛血紅蛋白（Hb）ELISA試劑盒使用說明書僅供科學(xué)研究使用實驗?zāi)康模罕驹噭┖杏糜跍y定牛血清，血漿及相關(guān)液體樣本中血紅蛋白（Hb）含量。實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛血紅蛋白（Hb）水平。用純化的牛血紅蛋白（Hb）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血紅蛋白（Hb），再與HRP標(biāo)記的血紅蛋白（Hb）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血紅蛋白（Hb）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中牛血紅蛋白（Hb）濃度。試劑盒組成：請下載產(chǎn)品說明書。樣本處理及要求：請下載產(chǎn)品說明書。1.試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測范圍：5ug/ml-100ug/ml保存條件及有效期：1.試劑盒保存：2-8℃2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2018-11-15 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 人一氧化氮（NO）ELISA試劑盒操作步驟

  使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中一氧化氮（NO）含量。標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。200μmol/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100μmol/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μmol/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25μmol/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液12.5μmol/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).[詳細(xì)]

  2018-12-30 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 小鼠白三烯C4（LTC4）ELISA的操作步驟

  小鼠白三烯C4（LTC4）ELISA的操作步驟[詳細(xì)]

  2015-03-18 00:00

  應(yīng)用文章

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• 人ELISA試劑盒操作步驟的注意要點

  我司將在本章中正確講解人ELISA試劑盒各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球兔ELSIA試劑盒，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細(xì)的使用說明，必能得出。Z后將人ELISA試劑盒板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應(yīng)如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反應(yīng)板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應(yīng)，人ELISA試劑盒操作時的室溫應(yīng)嚴(yán)格限制在規(guī)定的范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據(jù)的要求控制溫育。人ELISA試劑盒原材料批量進口與自配的特殊配方稀釋劑（預(yù)包被微孔板的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10％），經(jīng)過嚴(yán)格交叉反應(yīng)和干擾測試及穩(wěn)定性試驗，明確了其高靈敏度對檢測的樣本達(dá)到好的性能。ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析)通常用于定性和定量評估細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子、磷酸化后目標(biāo)、免疫球蛋白和其他免疫標(biāo)記，保證了產(chǎn)品的高品質(zhì)性能的同時兼顧成本。歡迎來電咨詢我司人Elisa試劑盒產(chǎn)品：人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1(ABCA1)ELISA試劑盒人?；碳さ鞍?ASP)ELISA試劑盒人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)ELISA試劑盒人細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)ELISA試劑盒人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(CagA)ELISA試劑盒人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒人復(fù)制蛋白A(RPA-70)ELISA試劑盒人未磷酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1ELISA試劑盒人嗜鉻蛋白A(CgA)ELISA試劑盒人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤YZ蛋白(pRB)ELISA試劑盒人生長激素結(jié)合蛋白(GHBP)ELISA試劑盒人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISA試劑盒人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒人去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)ELISA試劑盒人羥脯氨酸糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒人強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒人胃泌素釋放肽前體(ProGRP)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

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• ELISA實驗原理、步驟、問題分析

  上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)供應(yīng)各種屬elisa試劑盒，提供免費代測服務(wù)，保證實驗結(jié)果客觀真實性。我公司對試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問題，我們無條件包退換。若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息，請來的咨詢：電話：021-6052049813636351217業(yè)務(wù)QQ:1005074258何經(jīng)理ELISA實驗原理、步驟、ELISA問題分析ELISA實驗原理酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）原理1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度類型及步驟ELISA的主要常用類型及步驟1.間接法測抗體間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（二抗）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗原，洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。2）加稀釋的樣本，保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體，樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。3）加酶標(biāo)抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合，從而間接記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。4）加底物顯色。2.雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是檢測抗原Z常用的方法，操作步驟如下：1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。2）加受檢樣本，保溫反應(yīng)。樣本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與樣本中受檢抗原的量相關(guān)。4）加底物顯色。3.雙抗原夾心法測抗體反應(yīng)原理和模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體4.競爭法測抗原小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，Z后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。ELISAQ&A如何選擇合適的陽性對照?陽性對照的基本組成應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩沖液為基質(zhì)，加入一定量的待檢物質(zhì)。比如，以人血清為標(biāo)本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以復(fù)鈣人血漿為原料加入一定量標(biāo)準(zhǔn)品。如何選擇合適的陰性對照?陰性對照的基本組成也應(yīng)該盡量與檢測樣本的組成一致，**先行檢測確定其中不含待檢物質(zhì)。比如，檢測人血清標(biāo)本時，陰性對照應(yīng)該選擇正常人血清;檢測免疫動物血清中抗體效價時，陰性對照應(yīng)該選擇該動物的免疫前血清。如何選擇Zyou化的包被條件?1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上，再通過特異性反應(yīng)使抗原固相化）。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們強烈建議4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的保持。4.包被濃度的選擇包被的Z適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化，一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的Z適包被濃度需要通過實驗來確定。包板后需要封閉嗎?應(yīng)該選擇什么樣的封閉體系?封閉是否必要，取決于ELISA的模式及具體的實驗條件。一般說來，雙抗體夾心法，只要酶標(biāo)記物是高活性的，操作時洗滌徹底，不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。而在間接法測定中，封閉一般是必不可少的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART推薦使用5%脫脂奶粉，價廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉只適合短期內(nèi)使用，不宜長期保存，所以試劑盒中較少使用。如何正確使用酶結(jié)合物?1.酶結(jié)合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)（例如1%BSA或5%脫脂奶粉），通過競爭YZ酶結(jié)合物在固相載體上的非特異性吸附。一般還加入能夠YZ蛋白質(zhì)吸附于塑料表面的非離子型表面活性劑，如吐溫20（0.05%的濃度較為適宜）。2.正確稀釋酶結(jié)合物酶結(jié)合物的合適工作濃度需要通過預(yù)實驗來確定，濃度過高易導(dǎo)致本底偏高，濃度過低則會導(dǎo)致陽性信號的減弱。酶結(jié)合物**在使用前稀釋，稀釋后的酶結(jié)合物不宜長期保存，因為低濃度的酶結(jié)合物極易失活。問題可能的原因解決方法陰性對照產(chǎn)生了陽性的結(jié)果試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材洗板出現(xiàn)問題更換更強配方的洗滌液，增加洗板次數(shù)，延長洗板時間如果是在雙抗體夾心法中出現(xiàn)，有可能是包被抗體與二抗間有交叉反應(yīng)更換包被抗體或二抗使用了過多的抗體減少抗體使用量整板出現(xiàn)高背景二抗產(chǎn)生了非特異性吸附減少二抗使用量，縮短二抗反應(yīng)時間顯色液不新鮮使用現(xiàn)配的顯色液顯色反應(yīng)時間過長沒有終止控制顯色反應(yīng)時間，及時終止反應(yīng)試劑或者耗材污染更換試劑，使用一次性耗材反應(yīng)溫度過高導(dǎo)致的非特異性吸附嚴(yán)格控制反應(yīng)在Z適溫度下進行封閉條件不佳導(dǎo)致的非特異性吸附更換封閉能力更強的封閉液，延長封閉時間反應(yīng)信號偏低包被條件不合適提高包板濃度，延長包板時間抗原抗體反應(yīng)不夠充分延長反應(yīng)時間，確保反應(yīng)在Z適溫度下進行顯色液配方不恰當(dāng)增加顯色底物的量二抗結(jié)合不夠提高二抗?jié)舛?，延長反應(yīng)時間，更換效果更好的二抗梯度稀釋做ELISA時產(chǎn)生跳孔現(xiàn)象酶標(biāo)板疊放導(dǎo)致傳熱不均勻，各孔反應(yīng)溫度有差異盡量避免酶標(biāo)板疊放在一起移液器稀釋時未能保持連續(xù)性定期校準(zhǔn)移液器，確保移液器的正確使用反應(yīng)溶液蒸發(fā)酶標(biāo)板用封條密封或者加蓋洗板不均勻確定洗板機能夠正常工作酶標(biāo)板底有雜物或者水珠讀板時清理干凈酶標(biāo)板底部[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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• ELISA試劑盒檢測樣本的原理和步驟

  ELISA試劑盒檢測樣本的原理和步驟標(biāo)本：細(xì)胞液、體液以及組織勻漿使用說明書產(chǎn)品編號：E01H0019本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床及診斷使用！預(yù)期應(yīng)用ELISA試劑盒定量檢測人細(xì)胞液、體液以及組織勻漿中8羥基脫氧鳥苷的含量。自備物品1.酶標(biāo)儀（盡量提前預(yù)熱）2.微量加液器、吸頭3.蒸餾水或去離子水以及濾紙樣本的采集及保存一般的生物標(biāo)本包括有：血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等一般為無菌操作，低溫保存（-80℃、液氮）一．如果采集的實質(zhì)器官則要求：1、器官實質(zhì)不能太小2、以采集實質(zhì)性病灶區(qū)為佳：如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳3、同一病例裝入同一容器，并做好標(biāo)記4、應(yīng)在0-8℃的低溫儲存和運輸5、實質(zhì)性器官的處理：5.1、取實質(zhì)性器官約0.5mg左右，充分剪碎或研磨5.2、加入約500ul的PBS/生理鹽水，充分混勻5.3、離心5000rmpx10min，去上清5.4、-20℃保存，作為待檢標(biāo)本（切勿反復(fù)凍融）二．體液（常見的包括血清、血漿、唾液以及尿液等）的處理方式1、血液包括血漿和血清它們的主要區(qū)別就是：血清凝血而血漿不凝血，所以它們的處理方式也就不一樣1.1、采集血漿時一般不加抗凝劑（主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽），采集后立即離心800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?.2、如要采集血清，一般要加入總體積1%的抗凝劑，采集后先室溫或4℃靜置半小時后，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般飯后半小時內(nèi)不易采集，因為剛進食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶，**的采集的時間時空腹采集；3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的，即現(xiàn)采現(xiàn)用，但是一般隔夜尿不采集；4、組織提取液如肺泡灌洗液等，采集后離心分離，800-1000rmpx5min，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆?；三．糞便以及天然孔排泄物：采集后一般現(xiàn)用PBS/生理鹽水溶解，充分混勻，800-1000rmpx5min分離，取上清，-20℃或4℃保存?zhèn)溆?；四．活檢組織一般進行穿刺檢測，Z常見的就是肝活檢，像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進行活檢簡單方便、準(zhǔn)確。三、表達(dá)產(chǎn)物的檢測（一）真核表達(dá)產(chǎn)物1、細(xì)胞上清（分泌性蛋白）1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；1.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，吸取上清至另一10ml離心管中，10000rmpx10min，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；2、細(xì)胞裂解物（非分泌性蛋白）2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁，直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出，然后用001MPBS（pH7.4）將細(xì)胞吹下至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；2.2、不貼壁細(xì)胞，將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至另一10ml離心管中，0.01MPBS（pH7.4）重懸，500-800rmpx10min，棄上清，沉淀移至1.5ml離心管中，DDW重懸，置冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；（二）原核（大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)）表達(dá)產(chǎn)物1、表達(dá)上清（非融合性蛋白）直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；2、菌體裂解物（融合性蛋白）直接將培養(yǎng)物和上清吸出，10000rmpx10min，棄上清，沉淀用PBS洗一遍，500-800rmpx10min，棄上清，DDW重懸沉淀，冰水浴中用超聲波裂解儀進行裂解，10000rmpx10min，取上清，-20℃或4℃保存，作為標(biāo)本進行檢測，如有需要可進行透析或純化處理；ELISA試劑盒注意事項1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。2．加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免**孔與Z后一孔之見的時間間隔過大，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實驗的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器。3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響Z后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，10分鐘左右），如果顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。6.建議實驗前預(yù)測樣品含量如樣品濃度過高，應(yīng)對樣品進行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實驗（即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線，SY幾個標(biāo)本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經(jīng)銷商聯(lián)系，如果因運輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。操作步驟1.取出試劑盒，于室溫（20-25℃）放置15-30分鐘。實驗過程應(yīng)在室溫（20-25℃）內(nèi)進行。2.取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。3.空白微孔中加入50μl的樣品，空白對照加入50μl的蒸餾水；4.在樣品孔中加入10μl的生物素；（不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔?。?.在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；（不含空白對照孔）6.將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng)1小時；（在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度）7.充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓；（濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋）8.酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙徹底拍干；9.各孔加入顯色劑A、B液各50μl；（不含空白對照孔）10.20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘；11.各孔加入50μl終止液，終止反應(yīng)；ELISA試劑盒結(jié)果判斷1.30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值；2.以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖；3.根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍；4.敏感度：0.1ng/ml[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

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• 植物凝集素ELISA 檢測試劑盒操作步驟

  植物凝集素ELISA檢測試劑盒PHA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗.已知PHA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將PHA和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PHA的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制：植物凝集素ELISA檢測試劑盒試劑盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品：40nmol/L1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按說明書進行稀稀植物凝集素ELISA檢測試劑盒自備材料蒸餾水。加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。植物凝集素ELISA檢測試劑盒安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項:植物凝集素ELISA檢測試劑盒試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法:植物凝集素ELISA檢測試劑盒血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備:植物凝集素ELISA檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：0nmol/L（空白對照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。操作步驟:植物凝集素ELISA檢測試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，植物凝集素ELISA檢測試劑盒振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案:植物凝集素ELISA檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品濃度（nmol/L）A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析:植物凝集素ELISA檢測試劑盒1、儀器值：植物凝集素ELISA檢測試劑盒于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PHA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PHA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍：0-40nmol/L4、敏感度：0.1nmol/L[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 大鼠鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶（CaN）Elisa試劑盒操作步驟

  使用目的：本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)水平。用純化的大鼠鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)，再與HRP標(biāo)記的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)濃度。標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。[詳細(xì)]

  2018-10-01 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 豬傳染性胃腸炎ELISA試劑盒操作步驟

  使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中傳染性胃腸炎(TGEV)含量。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（480U/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個[詳細(xì)]

  2018-10-01 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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