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人IGF-ⅠELISA試劑盒說明書

本文由 上海恒遠ELISA試劑盒供應商 整理匯編

2018-11-15 10:03 817閱讀次數(shù)

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人IGF-ⅠELISA試劑盒說明書藥品名稱:通用名:人IGF-Ⅰ酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的:人IGF-ⅠELISA試劑盒用于測定人血清、血漿、組織或其它相關(guān)組織液中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)含量。實驗原理人IGF-ⅠELISA試劑盒應用夾心法測定標本中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平。用純化的人胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)受體包被微孔板,往微孔中依次加入胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),再與HRP標記的羊抗人受體結(jié)合,形成免疫復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)抗原濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液30ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(240μg/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行實驗。2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。3.可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。人IGF-ⅠELISA試劑盒操作步驟1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180μg/L,120μg/L,60μg/L,30μg/L,15μg/L)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。人IGF-ⅠELISA試劑盒注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.嚴格按照說明書操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.7.本試劑不同批號組分不得混用。底物請避光保存。8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.如與英文說明書有異,以英文說明書為準檢測范圍:10μg/L-200μg/L規(guī)格:96人份/盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月

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