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利用Patchliner Dynamite8實時模擬IK1在人誘導(dǎo)多能干細胞來源的心肌細胞中的作用

本文由 耐尼恩技術(shù)(北京)有限公司 整理匯編

2024-09-21 19:42 1250閱讀次數(shù)

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文摘:

目前的體外試驗通常不能很好地預(yù)測心臟傾向性,因為它們聚焦于細胞系中過表達的單個離子通道。另一方面,人誘導(dǎo)多能干細胞衍生心肌細胞(hiPSC‐CMs)為使用高通量系統(tǒng)對人心肌細胞進行藥物測試提供了一個獨特的機會。然而,這些細胞在離子通道表達和電生理特性上與成人心肌細胞不同。hiPSC‐CMs的主要挑戰(zhàn)之一是離子通道的生理表達,如向內(nèi)整流器(如Kir2.1-2.3),它引導(dǎo)心臟向內(nèi)整流鉀電流(IK1)。IK1是維持心臟細胞靜息膜電位穩(wěn)定的主要貢獻者之一,這對興奮性至關(guān)重要。膜片鉗研究顯示,在hiPSC‐CMs中,這只在低水平表達,有時完全不表達。動態(tài)鉗是一種將離子流(如IK1)引入細胞以補償內(nèi)源性表達缺失的方法,從而提供電位來記錄hiPSC‐CMs中更穩(wěn)定的動作電位。在本文中,我們描述了在自動膜片鉗裝置(Patchliner)上使用hiPSC‐CMs和自動動態(tài)膜片鉗附加裝置(Dynamite8)的方法。我們描述了在Patchliner上使用的優(yōu)化細胞處理和收獲協(xié)議,以及在動態(tài)鉗模式下自動執(zhí)行實驗和數(shù)據(jù)分析所需的步驟。?2019 by John Wiley & Sons, Inc.

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