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ACTIVA的分析原理的概念介紹
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本文由 廣東檢測技術(shù)有限公司 整理匯編
2007-07-12 00:00 306閱讀次數(shù)
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ACTIVA的分析原理的概念介紹
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ACTIVA的分析原理的概念介紹- ACTIVA的分析原理的概念介紹[詳細(xì)]
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2007-07-12 00:00
期刊論文
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ELISA的概念、原理、操作步驟- ELISA的概念、原理、操作步驟ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域?！ 。ㄒ唬≡怼 LISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的GX催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計，具體的方法步驟可有多種。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法?！ 。ǘ〔僮鞑襟E方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 1. 包被：用0.05MPH9.碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）?！ ?. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）?！ ?. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌?！ ?. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘?！ ?. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml?！ ?. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性?！ 》椒ǘ∮糜跈z測未知抗體的間接法： 1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,Z后一遍用DDW（超純水）洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。3. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。4. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。5. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。（三） 試劑器材 1. 試劑 ?。?） 包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: NaCO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml ?。?） 洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO412H2O 2.9克 NaCl8.0克KCl0.2克Tween-200.05％0.5ml加蒸餾水至1000ml （3） 稀釋液:牛血清白蛋白（BSA）0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用?！ 。?） 終止液（2MH2SO4）：蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml?！ 。?） 底物緩沖液（PH5.0磷酸檸檬酸）:0.2MNa2HPO4（28.4克／L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克／L）24.3ml 加蒸餾水50ml?！ 。?） TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml底物緩沖液（PH5.5）10ml0.75％H2O2 32μl ?。?） ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液（PH5.5）1ml 3％H2O2 2μl （8） 抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體?！ 。?） 正常人血清和陽性對照血清。 2. 器材: ?。?） 聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶?！ 。?） 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。 ?。?） 4℃冰箱，37℃孵育箱。（四） 注意事項 1. 正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉?！ ?. 在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括: （1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 ?。?）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的Z適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值Zda而蛋白量Z少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml?！ 。?） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度?！ 。?） 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA相關(guān)儀器試劑設(shè)備酶標(biāo)儀洗板機化學(xué)發(fā)光檢測儀ELISA檢測試劑盒ELISPOT檢測ELISA試劑盒抗體酶標(biāo)板[詳細(xì)]
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2018-11-15 10:03
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2014-03-28 00:00
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2016-06-20 00:00
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- 生物傳感器是用生物活性材料（酶、蛋白質(zhì)、DNA、抗體、抗原、生物膜等）與物理化學(xué)換能器有機結(jié)合的一門交叉學(xué)科，是發(fā)展生物技術(shù)必不可少的一種先進(jìn)的檢測方法與監(jiān)控方法，也是物質(zhì)分子水平的快速、微量分析方法。各種生物傳感器有以下共同的結(jié)構(gòu)：包括一種或數(shù)種相關(guān)生物活性材料（生物膜）及能把生物活性表達(dá)的信號轉(zhuǎn)換為電信號的物理或化學(xué)換能器（傳感器），二者組合在一起，用現(xiàn)代微電子和自動化儀表技術(shù)進(jìn)行生物信號的再加工，構(gòu)成各種可以使用的生物傳感器分析裝置、儀器和系統(tǒng)。生物傳感器的原理待測物質(zhì)經(jīng)擴散作用進(jìn)入生物活性材料，經(jīng)分子識別，發(fā)生生物學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生的信息繼而被相應(yīng)的物理或化學(xué)換能器轉(zhuǎn)變成可定量和可處理的電信號，再經(jīng)二次儀表放大并輸出，便可知道待測物濃度。生物傳感器的分類按照其感受器中所采用的生命物質(zhì)分類，可分為：微生物傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、細(xì)胞傳感器、酶傳感器、DNA傳感器等等。按照傳感器器件檢測的原理分類，可分為：熱敏生物傳感器、場效應(yīng)管生物傳感器、壓電生物傳感器、光學(xué)生物傳感器、聲波道生物傳感器、酶電極生物傳感器、介體生物傳感器等。[詳細(xì)]
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2018-10-14 10:00
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- 電化學(xué)（EC）檢測中的伏安法是一種非常強大的分析方法，已用于廣泛的應(yīng)用。當(dāng)與SPR技術(shù)相結(jié)合時，EC-SPR提供了對固液界面上發(fā)生的各種電化學(xué)現(xiàn)象和過程的許多見解，包括電荷誘導(dǎo)的分子吸附/解吸和吸附的結(jié)構(gòu)變化，電沉積和陽極剝離。
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2024-09-21 14:06
其它
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- 關(guān)于攪拌機的概念
- 攪拌機大致有以下幾種形式，在每一個攪拌過程它們都同時存在，在生產(chǎn)中根據(jù)實際需求來控制攪拌形式以達(dá)到主要的攪拌目的。關(guān)于攪拌機的概念，主要分為以下幾種：
【混合】?
混合就是把一個相分布到另一個相中。?
應(yīng)用行業(yè)：糖漿、香波、洗滌液、果汁濃縮液、酸奶、甜點、混合奶制品、油墨、瓷釉。
【分散】?
分散就是把大物粒粉碎分成幾個小物粒。?
應(yīng)用行業(yè)：懸浮液、藥丸包衣、藥品解聚、涂料分散、唇膏、蔬菜濃湯、芥末混合物、催化劑、消光劑、金屬，顏料、改性瀝青、納米材料的制備和解聚。
【乳化】?
乳化就是把一個相均勻穩(wěn)定的分布到另一個相中。?
應(yīng)用行業(yè)：藥乳液、藥膏、雪花膏、面膜、面霜、乳化香精、油水乳化、乳化瀝青、樹脂化、蠟乳化、水性聚氨酯乳化、農(nóng)藥。
【均質(zhì)】?
均質(zhì)就是把粒徑大小不一的物料分散成均勻的物粒。?
應(yīng)用行業(yè)：藥乳液、藥膏、雪花膏、面膜、面霜、組織勻漿、奶制品均質(zhì)、果汁、打印墨水、果醬。?[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:42
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SPE-8全自動固相萃取儀原理及概念- SPE-8全自動固相萃取儀原理及概念[詳細(xì)]
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2014-03-18 00:00
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- 北京哈科試驗儀器廠是一所集科研與生產(chǎn)于一體專門從事液體表面張力儀,表面張力測定儀,薄膜透氣性測試儀,旋轉(zhuǎn)滴超低界面張力儀等領(lǐng)域測試儀器的開發(fā)、設(shè)計、制造的專業(yè)廠家、也是國內(nèi)能系列生產(chǎn)表、界面領(lǐng)域測試儀器的制造商，產(chǎn)品完全可以與國外同類產(chǎn)品相媲美。本廠擁有一批行業(yè)yi流的專業(yè)技術(shù)人才具有豐富的專業(yè)設(shè)計制造經(jīng)驗。多年來與各大學(xué)、科研院所保持著緊密的合作關(guān)系，先后開發(fā)了以下系列產(chǎn)品：浸液循環(huán)器系列、高低溫恒溫浴槽系列、表、界面張力儀系列、接觸角測定儀系列、浸潤速度測定儀(動態(tài)接觸角測定儀)系列、塑料領(lǐng)域材料試驗機、實驗室制樣設(shè)備。產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于石油、化工、學(xué)校、表、界表化學(xué)、醫(yī)學(xué)、造紙、電力等科研部門教學(xué)與科學(xué)技術(shù)研究用。
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- ATOS阿托斯溢流閥原理概念A(yù)TOS阿托斯溢流閥的工作原理及分類：定壓溢流作用：在定量泵節(jié)流調(diào)節(jié)系統(tǒng)中，定量泵提供的是恒定流量。當(dāng)系統(tǒng)壓力增大時，會使流量需求減小。此時溢流閥開啟，使多余流量溢回油箱，保證溢流閥進(jìn)口壓力，即泵出口壓力恒定(閥口常隨壓力波動開啟)。安全保護(hù)作用：系統(tǒng)正常工作時，閥門關(guān)閉。只有負(fù)載超過規(guī)定的極限(系統(tǒng)壓力超過調(diào)定壓力)時開啟溢流，進(jìn)行過載保護(hù)，使系統(tǒng)壓力不再增加(通常使溢流閥的調(diào)定壓力比系統(tǒng)Z高工作壓力高10％20％)。作卸荷閥用，作遠(yuǎn)程調(diào)壓閥，作高低壓多級控制閥，作順序閥，用于產(chǎn)生背壓(串在回油路上)。ATOS錐閥式直動型溢流閥：錐閥2的左端設(shè)有偏流盤1托住彈壓彈簧5，錐閥右端有一阻尼活塞3(阻尼活塞一方面在錐閥開啟或閉合時起阻尼作用，用來提高錐閥工作的穩(wěn)定性；另一方面用來保證錐閥開啟后不會傾斜)。進(jìn)口的壓力油(壓力為P)可以由此活塞的徑向間隙進(jìn)入活塞底部，形成一個向左的液壓力F=PA(A為活塞底部面積)。當(dāng)作用在底部的液壓力F大于彈簧力時，錐閥閥口打開，油液由錐閥口經(jīng)回流口溢回油箱。只要閥口打開，有油液流經(jīng)溢流閥，溢流閥入口的壓力就基本保持恒定。通過調(diào)節(jié)桿4來改變調(diào)壓彈簧5的預(yù)緊力Ft，即可調(diào)整溢流壓力。230/50/60AC,DHI-0713/1-X230/50/60AC,DHI-0713/WP-X12DC,DHI-0713/WP-X230/50/60AC,DHI-0713/WP-X24DC,DHI-07139-X24DC,DHI-0713P24DC,DHI-0713-X110/50/60AC,DHI-0713-X230/50/60AC,DHI-0713-X24DC,DHI-0713-X24DC,DHI-0714/WP-X230/50/60AC,DHI-0714/WP-X230/50/60AC,DHI-0714-X230/50/60AC,DHI-0714-X24DC,DHI-0715/FI/NC-X24DC,DHI-0715-X24DC,DHI-0716-X24DC,DHI-0717-X24DC,DHI-0718-X230/50/60AC,DHI-0718-X24DC,DHI-0750/2-X24DC,DHI-0751/2/FI/NC-X24DC,DHI-0751/2/FI-X24DC,DHI-0751/2/WP-X230/50/60AC,DHI-0751/2/WP-X230/50/60AC,DHI-0751/2/WP-X24DC,DHI-0751/2-X110/50/60AC,DHI-0751/2-X[詳細(xì)]
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2018-09-29 10:00
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