數(shù)字PCR為第三代PCR技術(shù)，憑借較高靈敏度和jingzhun度廣泛應(yīng)用于核酸檢測(cè)領(lǐng)域。目前，越來越多的領(lǐng)域都會(huì)用到數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)，但關(guān)于實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)和結(jié)果評(píng)估缺少一個(gè)共識(shí)。在很多發(fā)表的文章中都缺乏足夠的dPCR實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)，這樣不利于評(píng)審文章，甚至難以根據(jù)文章重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

本期在線研討會(huì)給大家介紹通過6色熒光數(shù)字PCR技術(shù)檢測(cè)乳腺癌相關(guān)靶點(diǎn)，并借此闡述了整個(gè)數(shù)字PCR操作流程以及如何運(yùn)用MIQE，希望對(duì)大家的文章發(fā)表能有所幫助，少走彎路，多發(fā)好文章。

掃描二維碼進(jìn)入直播間

如今，隨著快速無(wú)創(chuàng)篩查、癌癥檢測(cè)以及臨床測(cè)序應(yīng)用的擴(kuò)大，診斷行業(yè)已經(jīng)鋪平了通往JZYL時(shí)代的道路。隨著市場(chǎng)對(duì)更kuai、更jingque診斷的需求，以及監(jiān)管的不斷發(fā)展，診斷專業(yè)人士需要一個(gè)能夠幫助他們建立伙伴關(guān)系、獲取行業(yè)知識(shí)、與同行建立網(wǎng)絡(luò)并從同行那里學(xué)習(xí)的綜合平臺(tái)，共同討論診斷行業(yè)的發(fā)展、里程碑、挑戰(zhàn)和機(jī)遇。第12屆Next-Generation Dx峰會(huì)將于8月25日-27日（美東時(shí)間）進(jìn)行線上舉辦。

會(huì)議期間Stilla Technologies公司也將聚焦“液體活檢”進(jìn)行交流互動(dòng)，針對(duì)6色Crystal Digital PCR?系統(tǒng)的多重檢測(cè)能力進(jìn)行zuixin技術(shù)的分享，大家可以觀看Stilla Technologies應(yīng)用專家Kimberley Gutierrez博士的演講，并且在會(huì)議現(xiàn)場(chǎng)可以訪問我們的線上展位。

Kimerley Gutierrez博士將介紹Stilla的6色Crystal Digital PCR?系統(tǒng)，并闡述其是如何創(chuàng)建1個(gè)panel可同時(shí)對(duì)至少6個(gè)癌癥突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。該報(bào)告將于美國(guó)東部時(shí)間8月25日下午1點(diǎn)25分在“液體活檢”ZT節(jié)目中播出。

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時(shí)間

2020年8月25-27日（美東時(shí)間）

會(huì)議ZT日程

2021年4月13日，深藍(lán)云Gene-π數(shù)字PCR學(xué)堂——數(shù)字PCR病毒載量檢測(cè)工具（北京站）在國(guó)家疾控ZX成功舉辦。為更好的服務(wù)于用戶，本次培訓(xùn)班以理論結(jié)合實(shí)踐的形式，聚焦數(shù)字PCR原理系統(tǒng)、實(shí)驗(yàn)操作、結(jié)果分析，病毒載量檢測(cè)等核心內(nèi)容，受到了用戶的一致好評(píng)。

數(shù)字PCR技術(shù)的誕生和發(fā)展為核酸定量和核酸檢測(cè)提供了全新的思路。無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線，可提供比qPCR的核酸定量，直接讀取陽(yáng)性信號(hào)，通過泊松分布校正得到目標(biāo)基因的JD拷貝數(shù)，并具有高靈敏度等特點(diǎn)。

本次訓(xùn)練營(yíng)對(duì)第三代數(shù)字PCR技術(shù)及naica??微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)介紹、naica??數(shù)字PCR核酸JD定量技術(shù)中的病原體檢測(cè)應(yīng)用、病毒載體JD拷貝濃度數(shù)字PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、特別是一步法數(shù)字PCR新冠病毒檢測(cè)試劑盒的使用和結(jié)果判讀等方面進(jìn)行了詳細(xì)介紹，同時(shí)進(jìn)行實(shí)操。

▲ 專家在進(jìn)行精彩的分享

▲ 實(shí)驗(yàn)操作

作為數(shù)字PCR頭部企業(yè)技術(shù)開創(chuàng)者的法國(guó)Stilla Technologies公司于2019年提出數(shù)字PCR在線學(xué)習(xí)資源ZXgene-π學(xué)堂，為使用和即將使用數(shù)字PCR技術(shù)的專家學(xué)者提供有效的途徑，同時(shí)開展Gene-π數(shù)字PCR線下實(shí)操培訓(xùn)課堂，為用戶提供完善的服務(wù)以及優(yōu)化的應(yīng)用解決方案。

naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)

naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)，以Sapphire芯片（全自動(dòng)）或Opal（高通量）芯片為耗材，形成25,000-30,000個(gè)微滴的2D陣列，以單層平鋪方式進(jìn)行PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。反應(yīng)完成后對(duì)微滴進(jìn)行三色通道或六色通道檢測(cè)，從而對(duì)起始核酸濃度進(jìn)行JD定量。2.5小時(shí)內(nèi)，可快速獲得結(jié)果。

【數(shù)字PCR網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)】

在CRISPR編輯的細(xì)胞系中

使用數(shù)字PCR進(jìn)行標(biāo)記拷貝數(shù)評(píng)估

       11月19日北京時(shí)間23:00（巴黎時(shí)間：17:00），歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺(tái)在線分享“在CRISPR編輯的細(xì)胞系中使用數(shù)字PCR進(jìn)行標(biāo)記拷貝數(shù)評(píng)估”相關(guān)知識(shí)。

本網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細(xì)胞中的綠色熒光蛋白拷貝數(shù)。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數(shù)據(jù)分析方法。

Moritz Kueblbeck在德國(guó)海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究技術(shù)員。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,在不同實(shí)驗(yàn)室的項(xiàng)目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用內(nèi)源性的標(biāo)記蛋白(在HeLa和U-2 OS細(xì)胞進(jìn)行不同標(biāo)簽的純合敲入)進(jìn)行人類細(xì)胞系基因組編輯。

內(nèi)容簡(jiǎn)介

l  熒光蛋白或自標(biāo)記是使用熒光顯微鏡研究活細(xì)胞中蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)的寶貴工具。然而，定量成像需要目標(biāo)蛋白(POI)的生理表達(dá)水平，特別是當(dāng)需要研究POI的化學(xué)計(jì)量相互作用時(shí)。

l  CRISPR使研究人員能夠標(biāo)記幾乎任何感興趣的目標(biāo)基因，使其可以研究相應(yīng)POI的生理表達(dá)水平。然而，正確編輯細(xì)胞克隆的產(chǎn)生和選擇——即標(biāo)記等位基因的預(yù)期數(shù)量和缺乏額外的整合——需要對(duì)標(biāo)記的拷貝數(shù)進(jìn)行定量評(píng)估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標(biāo)記CRISPR編輯細(xì)胞定量檢測(cè)方法。

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法國(guó)Stilla Technologies公司開發(fā)的—款多重PCR專用預(yù)混液：naica^?multiplex PCR MIX（見表1），專用于naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的多重檢測(cè)。并對(duì)naica^?multiplex PCR MIX的多重檢測(cè)性能進(jìn)行了詳細(xì)評(píng)估。當(dāng)面對(duì)有限的樣本量時(shí)，可保證多重?cái)?shù)字PCR檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性；在復(fù)雜背景基因存在的情況下，依然能精確檢出低豐度的目的基因。

★ naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進(jìn)行6個(gè)靶標(biāo)的同步準(zhǔn)確定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA樣品，使用10X naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上進(jìn)行6個(gè)靶標(biāo)的線性范圍分析，結(jié)果顯示6個(gè)靶標(biāo)的R²均＞0.99，說明在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上，能夠可靠地實(shí)現(xiàn)6靶標(biāo)同步準(zhǔn)確定量（圖1)。與2X和5X濃度的數(shù)字PCR預(yù)混液(dPCR Mixes)相比，10X濃度的數(shù)字PCR預(yù)混液體積加入量降低了50％至80％，最大限度地提高樣品加入量。尤其是在檢測(cè)低濃度樣品或稀有靶標(biāo)時(shí)，樣品加入量的增加可提高檢測(cè)靈敏度。

▲ 圖1：使用naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進(jìn)行6個(gè)靶標(biāo)的線性分析，分別在藍(lán)色、青色、綠色、黃色、紅色和紅外線6個(gè)通道進(jìn)行檢測(cè)。每個(gè)稀釋點(diǎn)的DNA濃度分別為：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每個(gè)稀釋度進(jìn)行3次重復(fù)。結(jié)果顯示6個(gè)靶標(biāo)的R2均大于0.99，說明所有靶標(biāo)的結(jié)果都高度真實(shí)可靠。

★ 在復(fù)雜的背景基因下，對(duì)低豐度目的基因進(jìn)行精確定量

數(shù)字PCR的—個(gè)重要技術(shù)優(yōu)勢(shì)是能夠在存在多個(gè)靶標(biāo)擴(kuò)增的情況下檢測(cè)到低濃度靶標(biāo)。為了評(píng)估naica^?multiplex PCR MIX的穩(wěn)定性。使用同一個(gè)目標(biāo)DNA模板的不同濃度系列稀釋液（0.2~ 13000 cp/uL)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)其中摻入5種外部靶標(biāo)模板（每個(gè)靶標(biāo)的濃度為3000 cp/ul)。在不同測(cè)試條件下，結(jié)果均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖2A和2C)。這些結(jié)果與同一DNA 靶點(diǎn)在不同濃度下單獨(dú)檢測(cè)以及在不添加外部靶標(biāo)的情況下獲得的結(jié)果具有可比性（圖2B和2D）。

▲ 圖2：使用naica^?multiplex PCR MIX的擴(kuò)增結(jié)果真實(shí)可靠。將pUC18質(zhì)粒（圖A和B)和pUC57質(zhì)粒（圖C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀釋液在5個(gè)外部擴(kuò)增靶標(biāo)背景下（每個(gè)靶標(biāo)為3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶標(biāo)(B,D)的情況下進(jìn)行定量檢測(cè)，3次重復(fù)。線性擬合系數(shù) R2>0.99，表明在不考慮多重背景的情況下，對(duì)所有靶標(biāo)的測(cè)定結(jié)果都是真實(shí)可靠的。5個(gè)外部靶標(biāo)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，顯示出極好的重復(fù)性。

★ naica^?multiplex PCR MIX應(yīng)用亮點(diǎn)

?  實(shí)現(xiàn)數(shù)字PCR方法多重檢測(cè)的高度穩(wěn)定性和高檢測(cè)靈敏度；

?  可在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)同時(shí)定量檢測(cè)6個(gè)獨(dú)立的DNA靶標(biāo)，均具有良好線性關(guān)系；

?  5X和10X的數(shù)字PCR預(yù)混液，提高了naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)高階多重檢測(cè)能力；

?  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的體積用量，從而增加DNA的加入量。在檢測(cè)低濃度樣品或稀有靶標(biāo)時(shí)，樣本加入量的增加可提高檢測(cè)靈敏度。

表1 naica^?multiplex PCR MIX貨號(hào)及規(guī)格

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國(guó)Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動(dòng)化微滴生成和擴(kuò)增，每個(gè)樣本孔可實(shí)現(xiàn)6熒光通道的檢測(cè)，智能化識(shí)別微滴并進(jìn)行質(zhì)控，3小時(shí)內(nèi)即可獲得至少6個(gè)靶標(biāo)基因的拷貝數(shù)濃度。

11月19日北京時(shí)間23:00（巴黎時(shí)間：17:00），歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室研究員Moritz Kueblbeck將于Genomeweb平臺(tái)在線分享“在CRISPR編輯的細(xì)胞系中使用數(shù)字PCR進(jìn)行標(biāo)記拷貝數(shù)評(píng)估”相關(guān)知識(shí)。

本網(wǎng)絡(luò)研討會(huì)將介紹如何使用dPCR快速定量CRISPR編輯的HeLa細(xì)胞中的綠色熒光蛋白拷貝數(shù)。討論還將介紹dPCR的工作原理和采集后的數(shù)據(jù)分析方法。

Moritz Kueblbeck在德國(guó)海德堡的癌癥研究ZX(DKFZ)做了八年的研究員。2014年,他加入了Jan Ellenberg在海德堡的歐洲分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室,在不同實(shí)驗(yàn)室的項(xiàng)目中，他使用CRISPR/Cas9方法利用內(nèi)源性的標(biāo)記蛋白(在HeLa和U-2 OS細(xì)胞進(jìn)行不同標(biāo)簽的純合敲入)進(jìn)行人類細(xì)胞系基因組編輯。

內(nèi)容簡(jiǎn)介

l  熒光蛋白或自標(biāo)記是使用熒光顯微鏡研究活細(xì)胞中蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)的寶貴工具。然而，定量成像需要目標(biāo)蛋白(POI)的生理表達(dá)水平，特別是當(dāng)需要研究POI的化學(xué)計(jì)量相互作用時(shí)。

l  CRISPR使研究人員能夠標(biāo)記幾乎任何感興趣的目標(biāo)基因，使其可以研究相應(yīng)POI的生理表達(dá)水平。然而，正確編輯細(xì)胞克隆的產(chǎn)生和選擇——即標(biāo)記等位基因的預(yù)期數(shù)量和缺乏額外的整合——需要對(duì)標(biāo)記的拷貝數(shù)進(jìn)行定量評(píng)估。

l  探討dPCR是一種快速、可靠的熒光標(biāo)記CRISPR編輯細(xì)胞定量檢測(cè)方法。

注冊(cè)地址：https://event.on24.com/eventRegistration/EventLobbyServlet?target=reg20.jsp&partnerref=stilla&eventid=2111188&sessionid=1&key=2206BD6DA2548F0F9C46911E3A71DD

安東帕在線研討會(huì)持續(xù)更新中，點(diǎn)擊您感興趣的“主題”，報(bào)名參加！

主題：建筑材料表征-從原料材料到成品

時(shí)間：2022-05-11, 15:00 - 18:00

主題：炭黑表面積測(cè)量-橡膠填料、黑色顏料和電池導(dǎo)電劑

時(shí)間： 2022-05-11, 21:00 - 22:00

主講人：Dr. Martin Thomas

主題：用SAXSpoint 5.0探索納米世界

時(shí)間：2022-05-18,15:00 - 15:45 

主講人：HeinerSantner, PhD

主題：從輔料處理到制片：制藥行業(yè)的粉體流變解決方案

時(shí)間：2022-05-24,16:00 - 17:00 

主講人：Dr.Helena Weingrill Marion

注冊(cè)：iphone手機(jī)需復(fù)制鏈接，瀏覽器打開

全封閉Naica數(shù)字PCR新型冠狀病毒超敏檢測(cè)方案

Cycloud與MicroFuture合作

深藍(lán)云生物科技與北京微未來科技，基于國(guó)家疾控ZX和WHO推薦區(qū)域，針對(duì)2019新型冠狀病毒的四段保守序列作為檢測(cè)靶標(biāo)，開發(fā)超敏的數(shù)字PCR檢測(cè)方法和快速的定量PCR檢測(cè)方法。

【圖源：北京微未來科技】

區(qū)段分別為：RdRP基因（特異性靶點(diǎn)），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S區(qū)位點(diǎn)。確保對(duì)2019新型冠狀病毒鑒定的高度特異性和靈敏度。      

與人冠狀病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型無(wú)交叉。

深藍(lán)云生物科技以專業(yè)服務(wù)科學(xué)為使命，愿所學(xué)，以致用，共戰(zhàn)病毒！

北京微未來科技有限公司以“解碼病原微生物，致力于傳染病防控”為企業(yè)使命。與北京深藍(lán)云生物科技共同在病毒的超敏檢測(cè)的數(shù)字PCR方法展開深入合作。 

聯(lián)系方式：

公司名稱：北京深藍(lán)云生物科技有限公司
聯(lián)系電話：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

在2021版的Methods in Molecular Biology·Lung Cancer第10章(127頁(yè)開始)介紹了使用naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測(cè)NSCLC患者ctDNA樣本中的19種活化和耐藥位點(diǎn)，并對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行了詳細(xì)的描述。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測(cè)流程

文中闡述，naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)多重檢測(cè)速度快，每個(gè)患者樣本可獲得大量突變信息，通過naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進(jìn)行液體活檢可實(shí)現(xiàn)高靈敏度和高效的治療監(jiān)測(cè)，早期發(fā)現(xiàn)治療耐藥性。

Methods in Molecular Biology是Springer出版的權(quán)威分子生物學(xué)方法學(xué)系列著作，共1110冊(cè)，涵蓋了生物學(xué)的方方面面。包括生命科學(xué)、藥物科學(xué)、化學(xué)、藥學(xué)、材料學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、人類基因組學(xué)、植物性、免疫學(xué)等。Lung Cancer就肺腫瘤生物學(xué)常用的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了深入的討論和細(xì)致的描述，包括用于建立肺癌診斷和預(yù)后的相關(guān)研究方法。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國(guó)Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動(dòng)化微滴生成和擴(kuò)增，每個(gè)樣本孔可實(shí)現(xiàn)6熒光通道的檢測(cè)，智能化識(shí)別微滴并進(jìn)行質(zhì)控，3小時(shí)內(nèi)即可獲得至少6個(gè)靶標(biāo)基因的拷貝數(shù)濃度。