在2021版的Methods in Molecular Biology·Lung Cancer第10章(127頁開始)介紹了使用naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測NSCLC患者ctDNA樣本中的19種活化和耐藥位點，并對檢測方法進行了詳細的描述。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)檢測流程

文中闡述，naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)多重檢測速度快，每個患者樣本可獲得大量突變信息，通過naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進行液體活檢可實現(xiàn)高靈敏度和高效的治療監(jiān)測，早期發(fā)現(xiàn)治療耐藥性。

Methods in Molecular Biology是Springer出版的權(quán)威分子生物學(xué)方法學(xué)系列著作，共1110冊，涵蓋了生物學(xué)的方方面面。包括生命科學(xué)、藥物科學(xué)、化學(xué)、藥學(xué)、材料學(xué)、細胞生物學(xué)、生物化學(xué)、人類基因組學(xué)、植物性、免疫學(xué)等。Lung Cancer就肺腫瘤生物學(xué)常用的實驗方法進行了深入的討論和細致的描述，包括用于建立肺癌診斷和預(yù)后的相關(guān)研究方法。

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的拷貝數(shù)濃度。

法國Stilla Technologies公司開發(fā)的—款多重PCR專用預(yù)混液：naica^?multiplex PCR MIX（見表1），專用于naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的多重檢測。并對naica^?multiplex PCR MIX的多重檢測性能進行了詳細評估。當(dāng)面對有限的樣本量時，可保證多重數(shù)字PCR檢測的靈敏度和準確性；在復(fù)雜背景基因存在的情況下，依然能精確檢出低豐度的目的基因。

★ naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進行6個靶標(biāo)的同步準確定量

采用0.2~13000cp/ul的DNA樣品，使用10X naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上進行6個靶標(biāo)的線性范圍分析，結(jié)果顯示6個靶標(biāo)的R²均＞0.99，說明在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)上，能夠可靠地實現(xiàn)6靶標(biāo)同步準確定量（圖1)。與2X和5X濃度的數(shù)字PCR預(yù)混液(dPCR Mixes)相比，10X濃度的數(shù)字PCR預(yù)混液體積加入量降低了50％至80％，最大限度地提高樣品加入量。尤其是在檢測低濃度樣品或稀有靶標(biāo)時，樣品加入量的增加可提高檢測靈敏度。

▲ 圖1：使用naica^?multiplex PCR MIX在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR上進行6個靶標(biāo)的線性分析，分別在藍色、青色、綠色、黃色、紅色和紅外線6個通道進行檢測。每個稀釋點的DNA濃度分別為：0.2、1.5、8.0、50、320、2050和13000 cp/ul，每個稀釋度進行3次重復(fù)。結(jié)果顯示6個靶標(biāo)的R2均大于0.99，說明所有靶標(biāo)的結(jié)果都高度真實可靠。

★ 在復(fù)雜的背景基因下，對低豐度目的基因進行精確定量

數(shù)字PCR的—個重要技術(shù)優(yōu)勢是能夠在存在多個靶標(biāo)擴增的情況下檢測到低濃度靶標(biāo)。為了評估naica^?multiplex PCR MIX的穩(wěn)定性。使用同一個目標(biāo)DNA模板的不同濃度系列稀釋液（0.2~ 13000 cp/uL)進行檢測，同時其中摻入5種外部靶標(biāo)模板（每個靶標(biāo)的濃度為3000 cp/ul)。在不同測試條件下，結(jié)果均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖2A和2C)。這些結(jié)果與同一DNA 靶點在不同濃度下單獨檢測以及在不添加外部靶標(biāo)的情況下獲得的結(jié)果具有可比性（圖2B和2D）。

▲ 圖2：使用naica^?multiplex PCR MIX的擴增結(jié)果真實可靠。將pUC18質(zhì)粒（圖A和B)和pUC57質(zhì)粒（圖C和D)的13000至0.2 cp/ul的系列稀釋液在5個外部擴增靶標(biāo)背景下（每個靶標(biāo)為3000 cp/ul(A,C)）和在不含外部靶標(biāo)(B,D)的情況下進行定量檢測，3次重復(fù)。線性擬合系數(shù) R2>0.99，表明在不考慮多重背景的情況下，對所有靶標(biāo)的測定結(jié)果都是真實可靠的。5個外部靶標(biāo)的相對標(biāo)準偏差保持在2.3％至3.1% (n=21)，顯示出極好的重復(fù)性。

★ naica^?multiplex PCR MIX應(yīng)用亮點

?  實現(xiàn)數(shù)字PCR方法多重檢測的高度穩(wěn)定性和高檢測靈敏度；

?  可在naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)的動態(tài)范圍內(nèi)同時定量檢測6個獨立的DNA靶標(biāo)，均具有良好線性關(guān)系；

?  5X和10X的數(shù)字PCR預(yù)混液，提高了naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)高階多重檢測能力；

?  10X PCR MIX比5X PCR MIX降低50％的體積用量，從而增加DNA的加入量。在檢測低濃度樣品或稀有靶標(biāo)時，樣本加入量的增加可提高檢測靈敏度。

表1 naica^?multiplex PCR MIX貨號及規(guī)格

naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^?六通道微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的拷貝數(shù)濃度。

全封閉Naica數(shù)字PCR新型冠狀病毒超敏檢測方案

Cycloud與MicroFuture合作

深藍云生物科技與北京微未來科技，基于國家疾控ZX和WHO推薦區(qū)域，針對2019新型冠狀病毒的四段保守序列作為檢測靶標(biāo)，開發(fā)超敏的數(shù)字PCR檢測方法和快速的定量PCR檢測方法。

【圖源：北京微未來科技】

區(qū)段分別為：RdRP基因（特異性靶點），E蛋白基因，N蛋白基因，保守基因S區(qū)位點。確保對2019新型冠狀病毒鑒定的高度特異性和靈敏度。      

與人冠狀病毒HcoV-229E、 HcoV-HKU1、 HcoV-OC43、 HcoV-NL63等型無交叉。

深藍云生物科技以專業(yè)服務(wù)科學(xué)為使命，愿所學(xué)，以致用，共戰(zhàn)病毒！

北京微未來科技有限公司以“解碼病原微生物，致力于傳染病防控”為企業(yè)使命。與北京深藍云生物科技共同在病毒的超敏檢測的數(shù)字PCR方法展開深入合作。 

聯(lián)系方式：

公司名稱：北京深藍云生物科技有限公司
聯(lián)系電話：010-57256059
E-mail：info@cycloudbio.com

背景導(dǎo)讀—何為嵌合狀態(tài)的檢測？

gusui和外周血干細胞移植是許多惡性和非惡性疾病的有效ZL方法。造血干細胞移植后，受體產(chǎn)生新的血細胞，這些血細胞在遺傳上來自于供體DNA。確認新的造血系統(tǒng)來源于供體是臨床復(fù)發(fā)監(jiān)測的重要組成部分。一般采用血細胞基因型檢測的方式，稱為嵌合體分析。完全供體細胞嵌合狀態(tài)意味著100%的血細胞來自供體，而混合或部分嵌合意味著受體細胞也存在。因此檢測時需要分析受體在移植后的血液或gusui中供體和受體的基因型的各自比例。

法國蘇黎世輸血服務(wù)ZX實驗室使用Stilla Technologies的Naica? Crystal數(shù)字PCR系統(tǒng)進行雙等位基因單核苷酸變異（SNV）檢測，從而確定嵌合體狀態(tài)。

嵌合體檢測的兩步策略

移植前：要想得到正確的移植后的檢測結(jié)果,必須選擇合適的標(biāo)記物，蘇黎世輸血服務(wù)ZX實驗室建立了一個由24種特定SNV分析組成的組合，用于尋找在單個樣品分析中篩選供體和受體DNA的合適標(biāo)記。

移植后：在臨床上，嵌合體監(jiān)測至少需要0.5%的等位基因敏感性。Naica? Crystal 數(shù)字PCR僅使用5ng DNA，就達到了所需的0.5%的靈敏度。使用標(biāo)準的20ng DNA進行檢測可以使一個等位基因頻率的可重復(fù)量化精度達到0.25%。(圖2)

總結(jié)

Naica? Crystal數(shù)字PCR在造血干細胞移植后嵌合狀態(tài)檢測方面的優(yōu)勢：

?  可與建立的SNV嵌合體檢測方法完全兼容。

?  使用Naica?系統(tǒng)進行的標(biāo)準測試可使等位基因頻率檢測靈敏度降至0.25%，遠低于0.5%的臨床限值要求。

?  此次研究，使用了Naica?系統(tǒng)中的高通量Opal芯片，一次可檢測48個樣本，每個樣本可進行3熒光通道讀取，僅需較低的DNA輸入量，即可實現(xiàn)更高的樣品通量和譜系特異性嵌合體檢測的能力。

導(dǎo)讀

除了在蛋白質(zhì)翻譯中的作用外，tRNA可以被切割成較短的生物活性片段，稱為tRNA片段（tRFs）。來自精細胞的特定tRFs可以引起第二代小鼠中代謝紊亂。因此，種系細胞中的tRFs是表觀遺傳的一種機制，然而壓力和毒素會導(dǎo)致tRFs模式的改變。華盛頓大學(xué)婦產(chǎn)科臨床研究部的研究人員在MOLECULAR HUMAN REPRODUCTION上發(fā)表題為《Men who inject opioids exhibit altered tRNA-Gly-GCC isoforms in semen》的文章。本研究對注射類藥物（一個重要的壓力源）是否會影響生殖細胞中的tRFs感興趣。研究者對來自注射阿pian類藥物病人(PWID)和非藥物使用對照組精液來源外泌體及精母細胞進行了RNA測序。測序后采用naica^?微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)驗證數(shù)據(jù)，該技術(shù)的應(yīng)用為藥物濫用相關(guān)生育問題的研究提供了新的策略和方法。

阿pian藥物濫用對生殖系統(tǒng)的影響一直備受關(guān)注。近期一項研究揭示了注射阿pian類藥物的男性精液中tRNA-Gly-GCC外泌體的變化。該研究通過數(shù)字PCR技術(shù)檢測tRNA-Gly-GCC外泌體，發(fā)現(xiàn)未注射阿pian類藥物的男性與注射阿pian類藥物的男性精液中tRNA-Gly-GCC外泌體存在顯著差異。

tRNA-Gly-GCC外泌體在精子發(fā)生和成熟過程中扮演關(guān)鍵角色。研究結(jié)果表明，這些差異可能與精子質(zhì)量和生育能力的下降有關(guān)。naica^?微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)在本研究中的應(yīng)用，不僅提供了高靈敏度和高準確性的檢測方法，對揭示阿pian類藥物對生殖系統(tǒng)的影響具有重要意義。

應(yīng)用亮點：

?  naica^?微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)可以在RNA濃度低于檢測下限的樣品中檢測兩種tRFs形式。

? naica^?微滴芯片數(shù)字PCR結(jié)果與RNA測序結(jié)果具有很好的相關(guān)性，但比測序具有更高的靈敏度和準確性，有助于深入了解長期使用阿pian類藥物的生物學(xué)影響。

研究結(jié)果：

▲圖１.男性長期使用阿pian類藥物導(dǎo)致精子中tRF-Gly亞型比例的變化,使用naica^?微滴芯片數(shù)字PCR技術(shù)定量tRFs。成熟精子細胞通過45-90% Percoll梯度純化，并使用核苷素試劑盒分離小RNA。cDNA使用一種特定的莖環(huán)RT引物與“長”tsRNA亞型（53個核苷酸長）或另一種靶向“短”tsRNA變體（32個核苷酸長）的特定RT引物生成。（A）每微升cDNA中“長”tRF Gly-GCC亞型的濃度。（B）每微升cDNA中“短”tRF Gly-GCC亞型的濃度。（C）“長”與“短”tRF Gly-GCC亞型的比例。（D）每微升cDNA中miR100-5p的濃度?！癈”：對照組（不注射藥品的男性）;“PWID”：阿pian藥物注射組。P值通過單尾曼-惠特尼U檢驗計算。對照組：n=10，PWID組：n=13。

研究發(fā)現(xiàn)，對照組中超過90%的reads到較短的Gly-GCC tRF，而在PWID中只有45%的讀數(shù)。相比之下，對照組中只有4.1%的reads到更長的tRF，而PWID為45.6%。PWID的長/短tRF比顯著高于對照組。同時發(fā)現(xiàn)精液來源的外泌體中小核仁RNA（snoRNA）表達差異。盡管無法確立PWID的發(fā)現(xiàn)與阿pian類藥物使用之間的直接聯(lián)系，但研究表明阿pian類藥物注射和/或相關(guān)多藥使用習(xí)慣和生活方式改變可能會影響表觀遺傳。這為阿pian類藥物使用的可遺傳影響提供了證據(jù)，并為進一步研究其跨代健康影響的機制奠定了基礎(chǔ)。

數(shù)字PCR技術(shù)在研究PWID中差異表達的tRFs方面發(fā)揮了重要作用。由于精液中含有復(fù)雜的細胞混合物，意味著其中含有抑制劑，對于PCR的擴增有很大影響。但數(shù)字PCR有抗抑制劑干擾的特點，所以對于這類復(fù)雜樣本的檢測更為適用。文章中數(shù)字PCR和測序各自發(fā)揮了作用：測序用于發(fā)現(xiàn)長tRF和短tRF，而數(shù)字PCR則準確檢測了tRF片段的表達差異，進而驗證了測序的結(jié)果。這一發(fā)現(xiàn)表明，數(shù)字PCR在研究tRFs和其他非編碼RNA片段方面具有顯著的優(yōu)勢。數(shù)字PCR不僅可以在tRFs和其他類似的研究中提供更為精確的結(jié)果，還可以在諸如癌癥、遺傳學(xué)和傳染病等領(lǐng)域發(fā)揮關(guān)鍵作用。

naica^?六通道數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica^?六通道數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的juedui拷貝數(shù)濃度。

導(dǎo)讀

反芻動物是指具有反芻習(xí)性的一類哺乳動物，如牛、羊、長頸鹿、兔子等。反芻動物采食一般比較匆忙，大部分未經(jīng)充分咀嚼就吞咽進入瘤胃，經(jīng)過瘤胃浸泡和軟化一段時間后，食物經(jīng)逆嘔重新回到口腔，經(jīng)過再咀嚼混入唾液并再吞咽進入瘤胃，這種行為稱為反芻行為。反芻動物的食物種類比其他種類的動物更豐富，結(jié)構(gòu)組成也更復(fù)雜，但草料中的粗纖維含量較高導(dǎo)致其難以消化，反芻動物依賴于胃部微生物群的代謝能力來消化各種物質(zhì)，但其轉(zhuǎn)化效率低也是養(yǎng)殖業(yè)廣泛關(guān)注的問題。

雖然已有研究證明瘤胃中不同微生物的活性可以調(diào)節(jié)宿主利用植物生物能量的能力，但定植于宿主瘤胃中的微生物卻很少受到關(guān)注。奧地利維也納獸醫(yī)大學(xué)的Cameron等人在Research Square在線發(fā)表了題為《Differential partitioning of key carbon substrates at the rumen wall by recently diverged Campylobacteraceae populations》的研究論文。文章采用多重數(shù)字PCR（dPCR）量化同一菌科的兩種菌群，分析反芻動物瘤胃上的定植菌群分布及生物進化動態(tài)，為今后畜牧業(yè)提高動物代謝能力的研究提供了新思路。

應(yīng)用亮點：

?  宏基因組測序發(fā)現(xiàn)瘤胃上皮細胞中彎曲桿菌科兩個種群的基因序列高度相似，利用naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)可以對兩個種群進行精準量化。

? 使用不同培養(yǎng)添加物后，可以利用naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)進行微生物種群分布跟蹤。

研究成果：

作者通過對瘤胃上皮微生物組的16S rRNA擴增子分析發(fā)現(xiàn)了一個優(yōu)勢菌株（OTU）為彎曲桿菌科（Campylobacteraceae），并通過宏基因組測序發(fā)現(xiàn)該OTU兩個主要種群Ca. C. stinkeris與Ca. C. noahi的基因含量高度相似，但pgl（蛋白質(zhì)糖基化）操縱子不同。

為了探究Ca. C. stinkeris與Ca. C. noahi兩個種群空間分布的差異，作者通過naica^?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)比較了這兩個種群在不同動物瘤胃乳突離上皮壁最近和最遠兩個位置的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同動物的兩個種群在這兩個位置的比例接近。

▲圖1 Ca. C. stinkeris 和Ca. C. noahi在動物瘤胃乳突頂端和隱窩的含量比例。A）從乳突切片兩個位置提取DNA使用dPCR進行定量分析。B) Ca. C. stinkeris 和Ca. C. noahi在動物瘤胃乳突兩個位置的含量比例。橫坐標(biāo)為取樣動物的名字。

然后作者使用naica^?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)對兩種菌群進行生長和適應(yīng)性測定，數(shù)據(jù)顯示Ca. C. stinkeris可以在以醋酸鹽為主要碳源時積累的生物量，更好地生長，但被丙酸鹽抑制，而Ca. C. noahiz在任何一種添加物存在的情況下在都沒有檢測到生長優(yōu)勢。因此，作者推斷可能存在一些其他機制來最小化競爭，這種機制通過某些代謝生態(tài)位維度上的分化，防止它們生長動力學(xué)的重疊來支持兩個種群的共存。

▲圖2 醋酸鹽利用和丙酸鹽抗性檢測。A)通過種群特異性dPCR，評估添加5 mM醋酸鹽（acetate）或丙酸鹽（propionate）對生物量積累的影響。分別用單個菌株(左，單一培養(yǎng))和競爭菌株(右，共培養(yǎng))進行了實驗。

通過數(shù)字PCR這種定量技術(shù)，作者發(fā)現(xiàn)在瘤胃乳突的頂端和隱窩都分布有這兩種優(yōu)勢菌群，且與上皮細胞分布數(shù)目無顯著的相關(guān)性。另外，這兩種菌群能夠促進相關(guān)脂肪酸的代謝，進而發(fā)揮促進食物消化的功能。該文章為通過調(diào)節(jié)反芻動物體內(nèi)某些鹽離子濃度來調(diào)節(jié)優(yōu)勢菌群的分布比例進而提升消化能力提供了思路。

從1985年至今的30多年時間里，PCR分析經(jīng)歷了三代技術(shù)的發(fā)展。DY代傳統(tǒng)PCR技術(shù)，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法對PCR產(chǎn)物進行定性分析。第二代熒光定量PCR技術(shù)，通過在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號的積累實時監(jiān)控PCR進程，ZH用Cq值對基因進行定量分析。第三代數(shù)字PCR技術(shù)，通過將PCR反應(yīng)液進行有限稀釋，實現(xiàn)核酸分子的單分子擴增，ZZ采取終點法檢測陽性微滴的熒光信號，有熒光信號的微滴判讀為 1；沒有熒光信號的微滴判讀為 0，因此該技術(shù)被稱為數(shù)字PCR。

PCR技術(shù)在不斷地蛻變卻從未淡出我們的視野，如今已經(jīng)滲透到分子生物學(xué)領(lǐng)域的各種研究層面。尤其在今年大流行疾病中，展現(xiàn)了PCR技術(shù)的強大之處。那在科學(xué)研究中，我們該如何選擇傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR呢？

首先我們要清楚，三代PCR技術(shù)所有的基礎(chǔ)源于PCR反應(yīng)的基本原理和PCR反應(yīng)的3個重要階段，分別是指數(shù)期、線性期和平臺期。

指數(shù)期

指數(shù)期內(nèi)，每個循環(huán)PCR產(chǎn)物量大約增加1倍（假定 100%反應(yīng)效率），該階段的擴增反應(yīng)具有高度特異性和精確度。

線性期（高變異性）

隨著PCR反應(yīng)體系成分的消耗，其中的一個或者多種成分限制反應(yīng)，導(dǎo)致反應(yīng)開始減緩，并且每個循環(huán)的PCR 產(chǎn)物不再加倍。

平臺期

反應(yīng)停止，不再產(chǎn)生更多的產(chǎn)物。因為每個樣品具有不同的反應(yīng)動力學(xué)，所以每個反應(yīng)將在不同的時間點進入平臺期，平臺期內(nèi)可以看到這些差異。

傳統(tǒng) PCR

傳統(tǒng)PCR通過瓊脂糖凝膠電泳對PCR終產(chǎn)物進行分析（圖2），它的局限性就在于只能做定性分析。在圖3中，3個反應(yīng)孔含有相同量的 DNA模板，但到達平臺期后產(chǎn)生的熒光信號卻不同，說明擴增產(chǎn)物的量存在不同（反應(yīng)動力學(xué)變化所致）。這也表明了傳統(tǒng)PCR平臺期測量時結(jié)果存在變異，產(chǎn)出的DNA量不一定能反映最初情況，所以無法進行定量。

熒光定量 PCR

同樣在圖3中，發(fā)現(xiàn)在指數(shù)期內(nèi)，3個反應(yīng)孔的擴增曲線完全重合，說明指數(shù)期內(nèi)進行檢測將更加精確，可實現(xiàn)更加準確的定量。閾值線是擴增產(chǎn)物熒光強度超過背景時的一個熒光強度值，樣品達到此熒光強度值所經(jīng)過的循環(huán)數(shù)稱為Cq值。通過比較未知濃度的樣品與一系列標(biāo)準品的Cq值，可以精確測定未知反應(yīng)中的模板 DNA數(shù)量。

數(shù)字 PCR

數(shù)字 PCR 是通過將樣本DNA隨機分布至獨立的反應(yīng)單元中，每個反應(yīng)單元中包含或者不包含1個或多個拷貝的目標(biāo)分子，所有獨立的反應(yīng)單元進行平行擴增后，對每個反應(yīng)單元的陰性或者陽性熒光信號進行檢測并進行統(tǒng)計學(xué)分析，就可以計算出原始樣本的拷貝數(shù)，無需參考標(biāo)準品或內(nèi)源性對照品，也不需要標(biāo)準曲線。

傳統(tǒng)PCR 、熒光定量 PCR與數(shù)字 PCR的選擇

深藍云生物科技為您提供美國Azure Cielo 3/6通道熒光定量PCR系統(tǒng)和

        法國Stilla Naica全自動3色/6色微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)。

Azure  Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)

來自于美國Azure Biosystems公司，為您提供Azure Cielo-3通道和Azure Cielo-6通道，可根據(jù)實驗需求靈活配置。這款產(chǎn)品采用了高能LED作為光源系統(tǒng)，可保證光源強度高，光源一致性好；高品質(zhì)的帕爾貼溫度模塊作為溫控系統(tǒng)，升降溫速率快，可設(shè)置12列跨度30°C的溫度梯度；ZY的CMOS拍照+光纖信號傳輸作為檢測系統(tǒng)，CMOS檢測靈敏度高，光纖傳輸速度快，無光損失和干擾。Azure Cielo?實時熒光定量PCR系統(tǒng)可為您的科學(xué)研究提供高JZ度、高靈敏度和高可靠性的實驗結(jié)果。

Naica?微滴芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies Naica數(shù)字PCR平臺是實現(xiàn)高靈敏DNA/RNAJD定量的技術(shù)工具，只需一步移液操作，即可自動生成單層平鋪的微滴，同一反應(yīng)液進行多基因的單分子模板擴增，通過三色或六色熒光通道檢測，自動QC質(zhì)控，識別多色熒光中有效的陰陽性微滴，從而達到目的DNA/RNA的高JZjuedui定量。同時提供原始數(shù)據(jù)、單微滴追溯等功能，確保數(shù)據(jù)真實可靠。

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5. Whale AS, Huggett JF, Cowen S, et al. Comparison of microfluidic digital PCR and conventional quantitative PCR for measuring copy number variation. Nucleic Acids Res. 2012;40(11):e82.

導(dǎo)讀

在過去的幾十年中，糖尿病的發(fā)病率在顯著增長。除了不健康的生活方式外，環(huán)境污染物被認為是糖尿病發(fā)生的危險因素。多環(huán)芳烴 (PAH)是一類含有2-7個芳環(huán)的有機化合物，由自然和人類活動產(chǎn)生并廣泛存在的污染物。流行病學(xué)研究表明，PAHs水平與成人和兒童的肥胖和二型糖尿病相關(guān)。

廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院細胞應(yīng)激生物學(xué)國家重點實驗室的研究人員在Ecotoxicology and Environmental Safety上發(fā)表了題為《Prenatal exposure to a mixture of PAHs causes the dysfunction of islet cells in adult male mice: Association with type 1 diabetes mellitus》的文章。文中應(yīng)用naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)對胰島素編碼基因DNA甲基化水平進行量化，揭示了產(chǎn)前暴露于多環(huán)芳烴混合物對成年雄性小鼠胰島細胞功能的不良影響。

應(yīng)用亮點：

?  使用naica?微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)對胰島素編碼基因啟動子甲基化水平進行量化。

? 在產(chǎn)前暴露于500μg/kg PAHs的小鼠中，胰島素編碼基因啟動子的甲基化水平顯著升高。

? 產(chǎn)前暴露于PAHs可能促進I型糖尿病的發(fā)病。

作者使用8種PAHs的混合物進行了實驗，以研究產(chǎn)前PAHs對成年期胰島細胞功能和質(zhì)量的影響，同時試圖闡明 I型糖尿病發(fā)病的環(huán)境原因。他們分離了成年雄性小鼠的胰島，對胰島素編碼基因的啟動子DNA甲基化水平進行分析。

研究成果：

▲圖1. 產(chǎn)前暴露于多環(huán)芳烴對成年雄性小鼠胰島素編碼基因甲基化水平的影響。(A) 數(shù)字PCR結(jié)果代表性一維圖。(B)胰島素編碼基因啟動子甲基化水平。(每個處理三只母鼠, 每只母鼠取一個雄性后代) 。

在本研究中，子宮內(nèi)暴露于500μg/kg PAHs的小鼠胰島中胰島素編碼基因啟動子中的DNA甲基化水平顯著增加，同時胰島素編碼基因轉(zhuǎn)錄顯著下調(diào)。

▲圖2. 不同PAHs濃度對胰島素編碼基因轉(zhuǎn)錄水平的影響

期刊介紹：

Ecotoxicology and Environmental Safety 1977創(chuàng)刊，隸屬于愛思唯爾出版集團。是一份多學(xué)科交叉期刊，主要研究環(huán)境污染對包括人類健康在內(nèi)的生物體的暴露和影響。最新影響因子為7.129。

naica?六通道數(shù)字PCR系統(tǒng)

法國Stilla Technologies公司naica?六通道數(shù)字PCR系統(tǒng)，源于Crystal微滴芯片式數(shù)字PCR技術(shù)，自動化微滴生成和擴增，每個樣本孔可實現(xiàn)6熒光通道的檢測，智能化識別微滴并進行質(zhì)控，3小時內(nèi)即可獲得至少6個靶標(biāo)基因的絕對拷貝數(shù)濃度。