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  開(kāi)機(jī)6154645 2017-03-09 00:00:00

  一、貼壁細(xì)胞的消化 : 常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中Z常用的是酶消化法。 1、 酶消化法 貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1）、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；2）、加入胰酶后，鏡下觀(guān)察待干細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí)，棄去胰酶，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落。 常用的消化酶有: 1）、胰酶 這是用得Z多的。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類(lèi)、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。 2）、膠原酶 這種方法比較少，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對(duì)干細(xì)胞損傷較小，但是，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。 胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時(shí)候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過(guò)頭的情況下，如果干細(xì)胞下來(lái)的比較多了，這時(shí)可以連同CMF或PBS加上營(yíng)養(yǎng)液一起傳。營(yíng)養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。 對(duì)于容易消化的干細(xì)胞，加入PBS緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴(lài)殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。

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