在本應(yīng)用示例中，我們展示了如何從μ-Slide VI 0.4通道載玻片中洗脫培養(yǎng)后的貼壁細(xì)胞。該方法適用于不同規(guī)格的通道載玻片。

　　1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明將您的細(xì)胞培養(yǎng)到所需的匯合度。

裝有細(xì)胞和培養(yǎng)基的μ-Slide VI 0.4

　　2.從μ-Slide VI 0.4通道載玻片的通道口中取出培養(yǎng)基，不要吸干整個(gè)通道。

　　3.用PBS或任何其他適當(dāng)?shù)木彌_液清洗兩次，然后從另一端吸出。每個(gè)通道使用體積為100μl。我們建議同時(shí)使用細(xì)胞培養(yǎng)吸引器和移液器。如圖所示，使用吸引器的尖端和移液器。

μ-Slide VI 0.4的一個(gè)通道的橫截面顯示了PBS洗滌步驟

　　4.使用細(xì)胞培養(yǎng)吸液器從通道中吸出全部PBS

在這個(gè)步驟中，緩沖液從容器口和通道中完全去除

　　5.立即用30μl分離溶液（例如胰蛋白酶/EDTA或Accutase）重新填充通道。如圖所示，將移液器吸頭直接放在通道的入口上。

將30μl分離溶液填充到空通道中

　　6.再將您的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中。由于生長(zhǎng)面積和體積的縱橫比不同，分離過(guò)程可能需要比平時(shí)更長(zhǎng)的時(shí)間（2-3分鐘）。用相差顯微鏡觀察細(xì)胞脫離。如果沒(méi)有發(fā)生分離，請(qǐng)?jiān)黾臃蛛x溶液的濃度或使用更長(zhǎng)的孵育時(shí)間。

細(xì)胞會(huì)在幾分鐘后分離

　　7.細(xì)胞成圓形并分離后，用100μl新鮮培養(yǎng)基或終止溶液沖洗每個(gè)通道

分離的細(xì)胞被100μl新鮮培養(yǎng)基沖出通道

　　8.從通道的另一端取出細(xì)胞懸液。如果還剩一些細(xì)胞，請(qǐng)重復(fù)沖洗步驟。

　　9.收集懸浮細(xì)胞并去除或稀釋分離溶液

在細(xì)胞懸浮后，可以通過(guò)從通道中吸出溶液來(lái)收集

　　此次實(shí)驗(yàn)主要是為膝關(guān)節(jié)滑液組織制備單細(xì)胞，讓我們一起來(lái)看看凈信單細(xì)胞制備儀是如何制備膝關(guān)節(jié)滑液組織單細(xì)胞懸液，對(duì)其樣品前處理效果和懸液效果如何？

　　實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：上海**大學(xué)醫(yī)學(xué)院東區(qū)單細(xì)胞中心

　　實(shí)驗(yàn)儀器：單細(xì)胞懸液制備儀（溫控型）JX-CKSM-6WK

　　樣品前處理制備實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、打開(kāi)儀器電源開(kāi)關(guān)，將儀器界面中的加熱點(diǎn)開(kāi)預(yù)熱一段時(shí)間持恒溫。

　　2、將組織稍微剪切成小塊，放入凈信2ml研磨管中。

　　3、加入凈信消化酶旋上蓋子，上下微微晃動(dòng)將其組織和消化酶均勻混合。

　　4、將混合好的研磨管放入加熱模塊中，再將研磨管放入熱板中，蓋上蓋子。

　　5、啟動(dòng)設(shè)備，待設(shè)備停止運(yùn)行后打開(kāi)儀器蓋子，取出樣品管

　　6、將樣品管中的液體和剩下的組織一起倒入過(guò)濾管中，再加入終止液后得到渾濁的液體，即單細(xì)胞懸液。

　　樣品處理前后效果圖：

　　顯微鏡下的細(xì)胞呈現(xiàn)：

　　實(shí)驗(yàn)樣品組織制備注意事項(xiàng)：

　　1、消化酶和終止液均需要在冷凍環(huán)境下保存

　　2、消化酶解凍時(shí)需在常溫條件下解凍，不可以放入水浴或者其他加熱儀器中解凍，溫度升高對(duì)酶的活性會(huì)有很大的影響。

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/b>制備小鼠大腦的單細(xì)胞懸液

實(shí)驗(yàn)儀器：單細(xì)胞懸液制備儀，研磨套裝管，濾管，移液槍，培養(yǎng)皿，鑷子，手術(shù)刀

實(shí)驗(yàn)試劑：PBS液，凈信消化酶，終止液

操作步驟：

1、開(kāi)機(jī)預(yù)熱，打開(kāi)加熱模塊1，加熱模塊2

2、取活體組織后，放入PBS液中去紅，然后取20-50mg（約小米粒大?。?，再分成若干等分

3、把消化酶用移液器加入研磨套裝管中，將加滿消化酶的離心管放入預(yù)熱模塊中預(yù)熱幾分鐘

4、將處理好的組織用鑷子轉(zhuǎn)移到加滿消化酶的離心管中

5、將裝滿消化酶和組織的離心管放置到加熱板中，選擇25分鐘程序，開(kāi)始運(yùn)行

6、程序結(jié)束取出離心管，將消化好的組織液轉(zhuǎn)移到過(guò)濾管中，即得到一管單細(xì)胞懸液

儀器介紹：

上海凈信單細(xì)胞制備儀JX-CKSM-6WK（6通道加熱型）是一種集成金屬浴消化與溫和剪切組織的新一代細(xì)胞懸液制備設(shè)備，應(yīng)用于流式細(xì)胞術(shù)/單細(xì)胞測(cè)序/原代細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)，具有起始組織量小，時(shí)間短，細(xì)胞得率高，細(xì)胞活性高的特點(diǎn)。采用國(guó)際DIN方法設(shè)計(jì)，低噪音，使用方便，性能穩(wěn)定。

應(yīng)用領(lǐng)域：腫瘤研究 心血管研究 干細(xì)胞研究 免疫研究 神經(jīng)科學(xué)研究

產(chǎn)品應(yīng)用：

單細(xì)胞測(cè)序（Single-Cell RNASeq)

多色流式分析（Multicolor Flow Cytometry)

質(zhì)譜流式細(xì)胞計(jì)數(shù)（Mass Cytometry)

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)（Primary Cell Isolation And Culture)

細(xì)胞ZLCAR-T