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2天變2h：新型的腺病毒Ad5純化技術(shù)

來源：艾本德中國 Eppendorf China 更新時(shí)間：2024-07-04 14:15:09 閱讀量：540
導(dǎo)讀：將密度梯度超離和 TFF 超離相結(jié)合，快速提升腺病毒純化時(shí)間。



腺病毒（Adenoviruses，Ads）是一種無包膜病毒，作為高效且穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因載體，常用于外源基因在活細(xì)胞中的高水平表達(dá)。腺病毒可以感染多種類型的細(xì)胞，在臨床前的基因功能研究和基因治療領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。



在腺病毒的生產(chǎn)過程中，會(huì)含有宿主細(xì)胞蛋白、游離DNA、血清蛋白等雜質(zhì)，這些雜質(zhì)不僅會(huì)影響感染性重組腺病毒(rAds)的質(zhì)量及外源基因的表達(dá)，也有細(xì)胞毒性和免疫反應(yīng)。因此，對(duì)粗制的腺病毒載體進(jìn)行純化是必要的，但是目前開發(fā)一種簡單、快速的方法純化穩(wěn)定的 rAds 仍然是一個(gè)挑戰(zhàn)。


來自日本筑波研究所和中國科學(xué)院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所的研究人員分享了一種快速純化用于體內(nèi)和體外基因功能研究的 5 型感染性腺病毒（Ad5）的方法：使用氯化銫密度梯度超速離心法，4°C， 604,000 xg，離心 15 分鐘，然后進(jìn)行切向流過濾。


其中，密度梯度超速離心使用的是 Himac 微型超速離心機(jī)老古董 CS120GX（1990 年問世，是 CS150NX 的前身）。


純化方法及操作流程圖如下：

▲ 純化流程圖



通過分析收集到的各組分 Ad5 腺病毒滴度、純化倍數(shù)及回收率等條件，可以看出，通過密度梯度超速離心和 TFF 超濾相結(jié)合的方法可以得到高質(zhì)量的 Ad5 腺病毒，病毒感染滴度幾乎不受影響，且回收率超過 60%。

▲ 各組分腺病毒樣品結(jié)果分析


一般說來，使用傳統(tǒng)方法純化腺病毒需要耗時(shí) 2~3 天的時(shí)間，本文中的方法使用密度梯度超離和 TFF 超離相結(jié)合的方法，在不影響病毒活性的同時(shí)，可以在 2h 內(nèi)完成感染性腺病毒的高質(zhì)量純化。此方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)室腺病毒純化及基因治療藥物的臨床前研究都很有幫助。

▲ 點(diǎn)擊了解古董超速離心機(jī)的優(yōu)化版



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