蛋白質(zhì)提取與純化技術(shù)
蛋白質(zhì)的分離純化
蛋白質(zhì)的分離純化方法很多,主要有:
(一)根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離方法
1蛋白質(zhì)的鹽析
中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有顯著影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時,蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析,將大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4和NH4)有很強(qiáng)的水化力,可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層,使之失水,于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出鹽析時若溶液pH在蛋白質(zhì)等電點則效果更好由于各種蛋白質(zhì)分子顆粒大小親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調(diào)節(jié)混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質(zhì)分段沉淀
影響鹽析的因素有:(1)溫度:除對溫度敏感的蛋白質(zhì)在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進(jìn)行一般溫度低蛋白質(zhì)溶介度降低但有的蛋白質(zhì)(如血紅蛋白肌紅蛋白清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時溶解度低,更容易鹽析(2)pH值:大多數(shù)蛋白質(zhì)在等電點時在濃鹽溶液中的溶介度Zdi(3)蛋白質(zhì)濃度:蛋白質(zhì)濃度高時,欲分離的蛋白質(zhì)常常夾雜著其他蛋白質(zhì)地一起沉淀出來(共沉現(xiàn)象)因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋,使蛋白質(zhì)含量在2.5-3.0%
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