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核酸純化技術(shù)及蛋白質(zhì)的去除

更新時間:2025-10-21 22:37:27 類型: 閱讀量:3464
導(dǎo)讀:核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制中心、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。

核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來使得樣本核酸提取工作自動完成的儀器。其在、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、疾病控制ZX、臨床疾病診斷、生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域得到廣泛地應(yīng)用。


核酸純化技術(shù)

密度梯度離心法:

核酸的分離和分析也可以使用密度梯度離心法。雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA和蛋白質(zhì)具有的密度不一樣,所以能夠通過密度梯度離心形式來使不同密度的純樣品區(qū)帶形成。此方法對于制備大量核酸樣本尤為適用。其中,若想要純化大量質(zhì)粒DNA,則shou選氯化銫2溴化乙錠梯度平衡離心法。核酸密度梯度離心的標(biāo)準(zhǔn)介質(zhì)為氯化銫。梯度液中的溴化乙錠與核酸結(jié)合,離心后形成的核酸區(qū)帶經(jīng)紫外燈照射,產(chǎn)生熒光而被檢測,用注射針頭穿刺回收后,通過或乙醇沉淀或透析將氯化銫除去,從而使純化的核酸獲得。


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使用吸附介質(zhì)的純化技術(shù):

將裂解液過柱,吸附介質(zhì)選擇性吸附核酸,將殘留的雜質(zhì)洗滌去除以后,用水或者合適的低鹽緩沖液從介質(zhì)上洗脫下從介質(zhì)上洗脫下,就能夠直接在后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用了。


使用離子交換介質(zhì)的純化技術(shù):

將裂解液過柱,在離子交換介質(zhì)上聯(lián)接核酸,將殘留的雜質(zhì)洗滌去除以后,使用高鹽緩沖液從介質(zhì)上洗脫下核酸。再經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)的乙醇/異丙醇沉淀、乙醇洗滌、干燥等操作,使純的核酸獲取到,Z后將其在合適的緩沖液中溶解。


蛋白質(zhì)的除去

因?yàn)樵诩?xì)胞內(nèi)核酸通過核蛋白體形式存,核酸的提取無論采用哪種方法,在體系中,蛋白質(zhì)均會有不同程度的存在,所以對于核酸分離純化,除去蛋白質(zhì)的步驟不可避免,有以下幾種常用的方法:

1.苯酚水溶液抽提,在對氨基水楊酸等陰離子化合物存在下,DNA或RNA均能夠進(jìn)入水相,蛋白質(zhì)則在酚層沉淀,之后取水相將乙醇或2-乙氧基乙醇加入使得NA或DNA沉淀,可以使用葡聚糖凝膠G-10或G-25將殘余的酚除去。


2.搖蕩抽提氯仿-戊醇或辛醇對提取液,在氯仿-水界面,蛋白質(zhì)有凝膠形成,離心后除去,在水溶液留有核酸,在分離純化中也常反復(fù)使用該方法。


3.將去污劑如硫酸十二脂鈉加入,此方法能夠在從提取到分離純化各階段反復(fù)使用。將去污劑與氯仿法或苯酚法結(jié)合使用,會得到更加理想的效果。


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