2025年版《中國(guó)藥典》修訂內(nèi)容

修訂了烏頭雙酯型生物堿對(duì)照提取物的檢查項(xiàng)，將對(duì)照品修訂為對(duì)照提取物。

2020年版《中國(guó)藥典》對(duì)照品中烏頭堿為劇毒成分，按公安部要求已不再發(fā)放對(duì)照品，標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行困難。2025年版《中國(guó)藥典》使用烏頭雙酯型生物堿對(duì)照提取物替代烏頭堿對(duì)照品，降低安全性風(fēng)險(xiǎn)。

儀器配置

K2025高效液相色譜儀：K2025 P2二元高壓輸液泵、K2025 AS自動(dòng)進(jìn)樣器、K2025 CO柱溫箱、K2025 UVD紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器、Wookinglab色譜工作站。

色譜條件

色譜柱：C₁₈，4.6×250 mm，5 μm或者相當(dāng)?shù)纳V柱；

流動(dòng)相：以乙腈-四氫呋喃混合溶液為流動(dòng)相A，磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相B；按下表進(jìn)行梯度洗脫：

注：按照此梯度洗脫表運(yùn)行存在系統(tǒng)壓力無(wú)法平衡，基線不穩(wěn)的情況，故設(shè)置每次進(jìn)樣前平衡10min。

流速：1.0 mL/min；

進(jìn)樣量：10 μL；

洗針液：90 %甲醇水溶液；

柱溫：25 ℃；

檢測(cè)器及檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)器為紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為232 nm。

測(cè)定結(jié)果

按照色譜條件進(jìn)行采集，對(duì)照提取物溶液的色譜圖如圖1所示，積分結(jié)果如表1所示。

圖1  對(duì)照提取物溶液的色譜圖

表1  對(duì)照提取物溶液色譜圖積分結(jié)果

由表1中數(shù)據(jù)可知，烏頭堿峰的理論塔板數(shù)為70282，滿足2025年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定的理論塔板數(shù)按烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于60000的要求；3種化合物的分離度≥5.16，均可以達(dá)到基線分離；拖尾因子均為1.11，均具有良好的峰形。

將對(duì)照提取物溶液連續(xù)進(jìn)樣7針進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試，疊加的色譜圖如圖2所示，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖2  對(duì)照提取物溶液連續(xù)進(jìn)樣7針疊加的色譜圖

表2  對(duì)照提取物溶液連續(xù)進(jìn)樣7針重復(fù)性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

由表2中數(shù)據(jù)可知，對(duì)照提取物溶液連續(xù)進(jìn)樣7針進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試，其中新烏頭堿保留時(shí)間的RSD為0.12 %，峰面積的RSD為0.18 %；次烏頭堿保留時(shí)間的RSD為0.11 %，峰面積的RSD為0.24 %；烏頭堿保留時(shí)間的RSD為0.12 %，峰面積的RSD為0.28 %，均具有良好的定性定量重復(fù)性。

按照色譜條件，對(duì)空白溶液和供試品溶液進(jìn)行采集，色譜圖如圖3~圖4所示，積分結(jié)果見(jiàn)表3。

圖3  空白溶液的色譜圖

圖4  供試品溶液的色譜圖

表3  供試品溶液色譜圖積分結(jié)果表

從表3中數(shù)據(jù)可知，附桂骨痛片供試品溶液中新烏頭堿、烏頭堿的峰面積之和為11.171mAU.s，滿足2025年版《中國(guó)藥典》中，與對(duì)照提取物3個(gè)色譜峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)的色譜峰的峰面積之和不得大于對(duì)照提取物色譜圖中烏頭堿色譜峰的峰面積（240.884mAU.s）的要求。

結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：

烏頭堿峰的理論塔板數(shù)為70282，滿足2025年版《中國(guó)藥典》中規(guī)定的理論塔板數(shù)按烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于60000的要求；3種化合物的分離度≥5.16，均可以達(dá)到基線分離；拖尾因子均為1.11，均具有良好的峰形；對(duì)照提取物溶液連續(xù)進(jìn)樣7針進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試，其中3種化合物保留時(shí)間的RSD范圍為0.11 %~0.12 %，峰面積的RSD范圍為0.18 %~0.28 %，均具有良好的定性定量重復(fù)性；附桂骨痛片供試品溶液中新烏頭堿、烏頭堿的峰面積之和為11.171 mAU.s，滿足2025年版《中國(guó)藥典》中，與對(duì)照提取物3個(gè)色譜峰保留時(shí)間相對(duì)應(yīng)的色譜峰的峰面積之和不得大于對(duì)照提取物色譜中烏頭堿色譜峰的峰面積（240.884 mAU.s）的要求。

因此，使用悟空K2025高效液相色譜儀進(jìn)行附桂骨痛片中烏頭雙酯型生物堿的檢查，完全滿足2025年版《中國(guó)藥典》中的要求。