雙特異性抗體（bsAbs）又稱為雙功能抗體，作為一種新型單克隆抗體，正在生物ZL領(lǐng)域興起。它可以識(shí)別兩個(gè)不同的抗原表位，這種雙重特異性使其比普通的單克隆抗體具有更好的治LX果。

雙特異性抗體可以將T細(xì)胞重新導(dǎo)向腫瘤細(xì)胞、同時(shí)阻斷兩個(gè)不同的信號(hào)通路、針對(duì)不同疾病介質(zhì)的雙重錨定，并傳遞特定藥物到目標(biāo)位點(diǎn)。目前，有超過(guò)50個(gè)雙特異性抗體產(chǎn)品已進(jìn)入臨床評(píng)估階段。

對(duì)雙特異性抗體進(jìn)行精確表征是確保藥品安全及功效的重要前提。尺寸排阻色譜串聯(lián)質(zhì)譜（SEC/MS）作為一種分析手段，正越來(lái)越多地被應(yīng)用于確定雙特異性抗體等的生物大分子的精確分子量。

本篇應(yīng)用介紹了使用粒徑2 μm 的超GX液相SEC色譜柱 TSKgel UP-SW3000對(duì)一個(gè)雙特異性T細(xì)胞銜接系統(tǒng) (BiTE^?) 進(jìn)行SEC/MS分析。這個(gè)BiTE是由兩個(gè)單鏈抗體 (scFv) 通過(guò)一條非免疫原性5-氨基酸鏈重組連接構(gòu)成。

圖1.雙特異性T細(xì)胞銜接系統(tǒng)（BiTE^?）的結(jié)構(gòu)

分析條件

色譜柱: TSKgel UP-SW3000（2 μm, 4.6 mm ID × 30 cm）

HPLC儀器: Nexera^? XR UHPLC

MS質(zhì)譜儀: Q Exactive? Plus

流動(dòng)相: 20 mmol/L醋酸銨+10 mmol/L碳酸氫銨（pH 7.2）

梯度: 等度

流速: 0.35 mL/min

檢測(cè): UV@280 nm

溫度: 30 oC

進(jìn)樣量: 5.0 μL

樣品: BiTE, 0.3 mg/mL (Creative Biolabs) 、parent mAb shown, 0.5 mg/mL (Creative Biolabs)

電離模式: 電噴霧電離, 正離子模式

MS模式: Scanning, m/z 800-6000

結(jié)果與討論

分別將分子量為~55 kDa 的BiTE和~150 kDa的親本抗體進(jìn)樣到TSKgel UP-SW3000色譜柱中進(jìn)行分析。圖2和圖3分別是BiTE和其中一條親本抗體的(a)總離子色譜圖、(b)質(zhì)譜圖、(c)解卷積質(zhì)譜圖。

分析結(jié)果表明，在質(zhì)譜兼容的流動(dòng)相條件下，通過(guò)SEC/MS分析確定了BiTE的精確分子量為54.1 kDa、親本抗體的分子量為149.3 kDa。

圖2. SEC/MS分析BiTE的精確分子量

圖3. SEC/MS分析親本抗體的精確分子量