流式細(xì)胞術(shù)工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù)，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點，是當(dāng)代Z先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一。下面就讓小編帶你了解一下流式細(xì)胞儀熒光抗體組合的選擇。

用不同顏色的熒光素來標(biāo)記不同類別的單克隆抗體，能夠在一個細(xì)胞中同時分析多個抗原分子，然而不是所有熒光抗體都能夠自由的組合的，在確定組合之前，還需要注意下列因素。

1.流式細(xì)胞儀的類型和熒光光譜

挑選合適的光源作為熒光物質(zhì)的激發(fā)光源，流式細(xì)胞儀的光譜濾光片能夠接受被檢測的熒光物質(zhì)發(fā)出的熒光。

2.了解不同抗體的染色模式和細(xì)胞反應(yīng)譜

依據(jù)不同的實驗?zāi)康倪x擇抗體。

胞膜和胞內(nèi)染色：一般來說，先胞膜染色，固定，然后膜通透和胞內(nèi)染色，Z后DNA染色。

3.抗體結(jié)合熒光素的熒光強度

任何一種熒光素的相對熒光強度都不相同。一個特定的抗體，要區(qū)分陰性和陽性的結(jié)果，就是有很好的S/N比值，由該抗體使用哪一種熒光素標(biāo)記決定。

4.抗原的密度

幾乎所有熒光素標(biāo)記的抗體都能夠檢測高表達(dá)的抗原。但是低表達(dá)的抗原（例如細(xì)胞因子）就需要用高S/N比值的熒光素標(biāo)記的抗體來檢測，從而有效的區(qū)分陽性細(xì)胞群和陰性細(xì)胞群。

5.熒光光譜之間的重疊

在多色分析中，雖然能夠用熒光補償去除熒光光譜重疊對結(jié)果的影響，但是分析中使用的熒光探針的類別越多，補償?shù)膹?fù)雜性就會越大，所以分析時，Z好選擇光譜重疊較少的組合。

6.自發(fā)熒光

所有的細(xì)胞群的自發(fā)熒光的水平都不一樣，在高波長范圍內(nèi)（波長>600nm），自發(fā)熒光會快速降低。所以在檢測自發(fā)熒光水平比較高的細(xì)胞時，如果想要得到好的S/N比值，就要使用發(fā)射光波長比較長的熒光染料。

7.熒光素的溶度，試劑的質(zhì)量都能造成假陰性/陽性結(jié)果

一個抗體組合內(nèi)的抗體可能來自不同的公司，有不同的濃度和亞型，因此，需要自身的同型對照，但現(xiàn)實是非常難的。所以Z好選擇同一家公司的試劑以免干擾。