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2025-01-21 09:31:07可可脂固體脂: 可可脂固體脂是從可可豆中提取的天然脂肪，具有熔點(diǎn)高、穩(wěn)定性好等獨(dú)特性質(zhì)。它在常溫下呈固體狀態(tài)，能夠賦予巧克力等食品絲滑的口感和光澤的外觀?？煽芍腆w脂還是食品工業(yè)中的重要原料，廣泛應(yīng)用于糖果、糕點(diǎn)等產(chǎn)品的制作中。您是否有其他關(guān)于科學(xué)儀器的問題或需求？

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可可脂固體脂肪含量測試(間接法)

蘇州紐邁分析儀器 495
2022-02-11
可可脂固體脂固體脂肪含量脂肪含量測試

可可脂固體脂產(chǎn)品

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可可脂固體脂問答

2022-02-11 12:03:04可可脂固體脂肪含量測試(間接法): 可可脂固體脂肪含量測試(間接法)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簻y試可可脂樣品在不同溫度下的固體脂肪含量；【本實(shí)驗(yàn)使用間接法測量SFC，也可使用直接法完成測試】實(shí)驗(yàn)材料種可可脂樣品，甘油；實(shí)驗(yàn)儀器PQ001固體脂肪含量測試儀，線圈直徑10mm，磁體溫度為40℃，烘箱，水浴鍋；樣品制備將可可脂放入烘箱內(nèi)融化成液體，再用移液管移取適量可可脂及甘油樣品到樣品管內(nèi)；實(shí)驗(yàn)方法1、可可脂樣品移入烘箱，設(shè)置溫度80oC: 恒溫15分鐘；2、可可脂樣品、標(biāo)準(zhǔn)樣品移入水浴，設(shè)置溫度60oC: 恒溫30分鐘；3、60度恒溫完成后，分別測試70us處液相可可脂樣品的信號為S60；標(biāo)準(zhǔn)樣品的信號為R60；4、可可脂樣品移入水浴，0oC: 恒溫90±2分鐘；5、可可脂樣品移入水浴，26oC: 恒溫40±0.5小時；6、可可脂樣品移入水浴，0oC: 恒溫90±2分鐘；7、測試8個溫度點(diǎn)對應(yīng)的固體脂肪含量，分別對應(yīng)：5℃，恒溫60±1分鐘；10℃，恒溫60±1分鐘；15℃，恒溫60±1分鐘；20℃，恒溫60±1分鐘；25℃，恒溫60±1分鐘；30℃，恒溫60±1分鐘；35℃，恒溫60±1分鐘；40℃，恒溫60±1分鐘；分別測得可可脂樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品對應(yīng)溫度下，70us處的核磁信號，ST、RT；對應(yīng)的固體脂肪含量可通過以下公式計(jì)算得到：SFC(T)=100-(R60×ST×100)/(S60×RT)SFC(T) 為對應(yīng)溫度T下的固體脂肪含量; S60為60度恒溫后，70us處測得液相可可脂樣品的信號；R60為60度恒溫后，70us處測得標(biāo)準(zhǔn)樣品的信號；ST為可可脂樣品在溫度T下70us處的信號；RT為標(biāo)準(zhǔn)樣品在溫度T下70us處的信號；固體脂肪含量測試結(jié)果圖

2023-05-25 16:47:05【ALP-TS-23008A】脂質(zhì)納米粒制備及表征解決方案: 全文共3826字，閱讀大約需要12分鐘脂質(zhì)納米粒簡介脂質(zhì)納米粒(Lipid Nanoparticle，LNP)是一種粒徑介于 10-1000 nm 的新型藥物遞送載體，由多種有機(jī)材料、無機(jī)材料、金屬 - 有機(jī)框架或這些材料組合而成，可作為化學(xué)與生物制劑之間傳遞的媒介，脂質(zhì)納米粒包裹藥物可顯著提高藥物的穩(wěn)定性與生物利用度。[1]目前脂質(zhì)納米粒廣泛應(yīng)用于mRNA疫苗遞送、腫瘤治療、抗炎和抗感染藥物載體、治療神經(jīng)退行性疾病、抗瘧等領(lǐng)域。脂質(zhì)脂質(zhì)納米?？煞譃楣腆w脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒(Solid Lipid Nanoparticles，SLN)和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(Nanostructured Lipid Carriers，NLC)。固體脂質(zhì)脂質(zhì)納米粒（SLN）主要是由固體脂質(zhì)、表面活性劑、有效成分和水制備的膠體顆粒，具有生物相容性好、有機(jī)溶劑使用少、體內(nèi)穩(wěn)定性高、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。但在儲藏過程中仍存在載藥量低、易凝膠化和藥物泄漏等問題；為此，研發(fā)人員嘗試在固體脂質(zhì)壁材中加入一定量的液體油脂，打亂了原來單純固體脂質(zhì)壁材的有序的晶體結(jié)構(gòu)，負(fù)載活性成分的量得到了提高，也使得晶體結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，不易發(fā)生泄露等現(xiàn)象。[2-3]圖1 LNP的結(jié)構(gòu)[3]脂質(zhì)納米粒靶向性研究是藥物遞送熱點(diǎn)研究方向之一，考慮到納米藥物自身性質(zhì)的影響，可通過對其自身物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，如粒徑、表面電荷、表面修飾物等，以此來增加脂質(zhì)納米粒藥物的滲透作用。目前還開發(fā)了各種粒徑可調(diào)控的納米遞藥系統(tǒng)，Li 等[4，5]構(gòu)建了一種酸刺激響應(yīng)型脂質(zhì)納米粒，可以在低 pH 條件下將其粒徑從 100 nm 縮減到5 nm。脂質(zhì)納米粒的初始尺寸有利于長時間的血液循環(huán)，當(dāng)?shù)竭_(dá)腫瘤部位后，酸性環(huán)境刺激脂質(zhì)納米粒發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，粒徑縮小，有助于脂質(zhì)納米粒外滲和組織滲透。除 pH 響應(yīng)外，腫瘤組織處特異的酶環(huán)境、腫瘤細(xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境和光、熱、磁等外部刺激都可以用于調(diào)控納米藥物的粒徑和表面電荷。[5]除平均粒徑外，脂質(zhì)納米粒的尾端大顆粒和過小顆粒也會影響納米藥物的效果，尾端大顆粒容易造成脂質(zhì)納米粒聚集，影響藥物的穩(wěn)定性和安全性，小顆粒（＜5nm）會被直接臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。過濾可有效減少脂質(zhì)納米粒藥物中的大顆粒和雜質(zhì)，提高脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。Alpharmaca奧法美嘉平臺提供整套的脂質(zhì)納米粒均一性和穩(wěn)定性的解決方案，可用于快速評估、優(yōu)化脂質(zhì)納米粒的配方和工藝：高壓微射流均質(zhì)機(jī)、微流控技術(shù)對脂質(zhì)納米粒進(jìn)行均質(zhì)乳化分散處理、Nicomp粒度分析儀分析平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器分析大粒子濃度，Lum穩(wěn)定性分析儀快速分析脂質(zhì)納米粒藥物穩(wěn)定性，Entegris-ANOW濾芯過濾雜質(zhì)及大顆粒。脂質(zhì)納米粒的制備技術(shù)傳統(tǒng)的脂質(zhì)納米粒制備技術(shù)，包括乙醇注入法、薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、凍融法等，存在粒徑分布廣和批間重復(fù)性大等問題，對藥物開發(fā)的臨床試驗(yàn)和生產(chǎn)具有很大的影響。為了解決傳統(tǒng)制備方法的弊端，微流控混合技術(shù)、高壓微射流技術(shù)、高壓均質(zhì)等新型制備技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。高壓微射流制備方法：制備水相、油相，經(jīng)過混合、剪切步驟形成初乳，初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，而后除菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。微流控混合技術(shù)制備方法：制備水相、油相，將水相油相經(jīng)過微流控均質(zhì)乳化后，除菌過濾得到脂質(zhì)納米粒。無論是通過何種方法制備脂質(zhì)納米粒藥物，后續(xù)都需要對其平均粒徑、尾端大顆粒、穩(wěn)定性進(jìn)行檢測來篩選配方，PSS的Nicomp粒度分析儀可用于測試平均粒徑、AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器可用于測試大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀可用于快速篩選在不同工藝制備下脂質(zhì)納米粒藥物的穩(wěn)定性。圖2 高壓微射流法制備脂質(zhì)納米粒圖3 微流控混合技術(shù)法制備脂質(zhì)納米粒脂質(zhì)納米粒的粒徑控制脂質(zhì)納米粒的粒徑與其靶向性和有效性緊密相關(guān)，粒徑小且分布窄是脂質(zhì)納米粒藥物的理想粒徑。微流控技術(shù)通過微米通道控制流體的流動和混合，具有良好的單分散性、可控性及重現(xiàn)性，可改善脂質(zhì)納米粒的均一性和藥物包封效率，并實(shí)現(xiàn)高通量生產(chǎn)，已成功應(yīng)用于Covid-19 mRNA 疫苗的制備[6]。高壓微射流均質(zhì)技術(shù)使物料在高壓作用下以高速度流經(jīng)腔體，經(jīng)過剪切、碰撞、空穴效應(yīng)等物理作用降低脂質(zhì)納米粒的平均粒徑，可對脂質(zhì)納米粒初乳進(jìn)一步均質(zhì)分散。高壓微射流均質(zhì)機(jī)PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(jī)（小試兼中試型）采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔，通過電液傳動的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道，物料流在此過程中受到高剪切力、高碰撞力、空穴效應(yīng)等物理作用，使得平均粒徑降低、體系均一穩(wěn)定，由此獲得理想的均質(zhì)、分散、去團(tuán)聚的結(jié)果。圖4 PSI高壓微射流均質(zhì)機(jī)最高2069 bar的均質(zhì)壓力，最高處理量20L/h（PSI-20）采用特殊設(shè)計(jì)Y型腔，去除尾端大顆粒效果佳，物料的混合更均一，處理效率高。屏顯界面，數(shù)據(jù)可溯源：支持?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)出設(shè)定壓力及實(shí)時壓力、監(jiān)測點(diǎn)溫度、實(shí)時流量、時間等。配置K型熱電偶：可用于實(shí)施監(jiān)測料液溫度。低噪音：運(yùn)行音量低于70分貝，工作環(huán)境友好型。NanoSpirit 系列微流控藥物制劑遞送平臺微流控制備系統(tǒng)通過制造泵和高壓輸送泵與微流控芯片連接。A相和B相可以按一定比例以恒定速度混合和乳化。在微流控芯片中，設(shè)計(jì)不同的流道結(jié)構(gòu)，控制不同的速度，使樣品在微流控芯片中湍流、層流或霧化，可以滿足預(yù)乳化或再乳化的要求。還可以將制備好的樣品通過高壓泵輸送到高壓微流控芯片中，通過沖擊力和剪切力控制粒徑，達(dá)到達(dá)到所需的包封率、粒徑、粒徑分布均一性等要求。圖5 NanoSpirit 系列高精度流量控制（＜5‰）?？商峁┒囗?xiàng)可調(diào)參數(shù)（反應(yīng)量、流速等）。多型號微流芯片通用，適合多種載體類型。注射器規(guī)格：0.25，1，2.5，5，10 ml。自動充液、反應(yīng)、前后排廢、清洗等工能平均粒徑與Zeta電位檢測脂質(zhì)納米粒徑不同使藥物富集在不同部位可現(xiàn)不同治療效果。應(yīng)用于腫瘤治療領(lǐng)域的脂質(zhì)納米粒，由于腫瘤組織處血管豐富，血管壁間隙較寬且結(jié)構(gòu)完整性差，具有適宜尺寸的脂質(zhì)納米粒（60-200 nm）可通過 EPR 效應(yīng)在腫瘤處積聚，實(shí)現(xiàn)納米藥物的被動靶向。脂質(zhì)納米粒電性一般呈中性或輕微負(fù)電性，在血液循環(huán)中，高正電性的脂質(zhì)納米粒會吸附蛋白質(zhì)，被迅速清除，進(jìn)而影響脂質(zhì)納米粒的藥代動力學(xué)和生物分布。相比之下，中性脂質(zhì)納米粒以及帶有輕微負(fù)電荷的脂質(zhì)納米粒則顯示出延長的半衰期。Zeta電位是衡量藥物穩(wěn)定性指標(biāo)之一，Zeta電位的絕對值越高，體系越穩(wěn)定。Nicomp納米激光粒度儀系列Nicomp系列納米激光粒度儀采用動態(tài)光散射原理檢測分析樣品的粒度分布，基于多普勒電泳光散射原理檢測ZETA電位。圖6 Nicomp 3000系列粒徑檢測范圍0.3nm-10μm，ZETA電位檢測范圍為+/-500mV搭載Nicomp多峰算法，可以實(shí)時切換成多峰分布觀察各部分的粒徑。高分辨率的納米檢測，Nicomp納米激光粒度儀對于小于10nm的粒子仍然顯示較好的分辨率和準(zhǔn)確度。圖7 高斯粒徑分布圖圖8 多峰粒徑分布圖顆粒分布檢測尾端大顆粒的存在會影響藥物本身的穩(wěn)定性，由于表面積增大，使得體系形成熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，容易發(fā)生脂質(zhì)納米粒聚集以降低體系自由能現(xiàn)象。尾端大顆粒的存在還會對身體機(jī)能造成影響，較大的顆粒（> 200 nm）容易積聚在肝臟和脾臟中，影響藥物安全性；粒徑極小（< 5 nm）的顆粒則會被腎臟快速地過濾清除，影響藥物的有效性。AccuSizer顆粒計(jì)數(shù)器系列AccuSizer系列在檢測液體中顆粒數(shù)量的同時精確檢測顆粒的粒度及粒度分布，通過搭配不同傳感器、進(jìn)樣器，適配不同的樣本的測試需求，能快速而準(zhǔn)確地測量顆粒粒徑以及顆粒數(shù)量/濃度。圖9 AccuSizer系列檢測范圍為0.5μm-400μm（可將下限拓展至0.15μm）。0.01μm的超高分辨率，AccuSizer系列具有1024個數(shù)據(jù)通道，能反映復(fù)雜樣品的細(xì)微差異，為研發(fā)及品控保駕護(hù)航。靈敏度高達(dá)10PPT級別，即使只有微量的顆粒通過傳感器，也可以精準(zhǔn)檢測出來?？沙鼍叻ㄒ?guī)報告LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器LumiSpoc采用單粒子光散射技術(shù)（SPLS），通過在光學(xué)流通池中進(jìn)行流體動力聚焦，將單個粒子排列成一條直線。通過調(diào)整流動條件來調(diào)整樣品濃度，從而避免濃度峰值的影響。當(dāng)單個納米或者微米顆粒經(jīng)過特殊光束截面的激光束時，記錄其正向和側(cè)向散射的光強(qiáng)。根據(jù)米氏理論，將分類強(qiáng)度轉(zhuǎn)換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計(jì)數(shù)分布、顆粒濃度。在行業(yè)內(nèi)已有使用Lumispoc用于顆粒濃度的監(jiān)測成功案例。圖10 LumiSpoc單粒子顆粒計(jì)數(shù)器顆粒粒徑檢測范圍：50 nm ~ 8 μm（取決于樣品）顆粒濃度檢測范圍：1 × 106 ml-1 ~ 1 × 109 ml-1進(jìn)樣體積：250 μl穩(wěn)定性分析檢測穩(wěn)定性是評價藥物制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是確定藥物制劑使用期限的主要依據(jù)。藥物制劑若發(fā)生分解、變質(zhì)，可導(dǎo)致藥效降低，甚至產(chǎn)生或增加毒副作用，危及患者的身體健康和生命安全，Zeta電位、尾端大顆粒濃度都是衡量藥物穩(wěn)定性的指標(biāo)之一。除此之外，還可以使用穩(wěn)定性分析儀測量樣品的分離、沉降、懸浮或澄清、浮離、聚集、凝聚或產(chǎn)品存放期以及粒徑分布。LUM穩(wěn)定性分析儀Lum穩(wěn)定性分析儀可以直接測量整個樣品的分散體的穩(wěn)定性，檢測和區(qū)分各種不穩(wěn)定現(xiàn)象，如上浮、絮凝、聚集、聚結(jié)、沉降等，通過測量結(jié)果可用來開發(fā)新的配方和優(yōu)化現(xiàn)有的配方及工藝。圖11 LUM穩(wěn)定性分析儀快速、直接測試穩(wěn)定性，無需稀釋，溫度范圍寬廣可同時測8個樣品，測量及辨別不同的不穩(wěn)定現(xiàn)象及不穩(wěn)定性指數(shù)加速離心，最高等效2300倍重力加速度過濾經(jīng)高壓微射流均質(zhì)機(jī)或微流控技術(shù)處理的脂質(zhì)納米粒，還需進(jìn)行適當(dāng)?shù)倪^濾工藝，用于去除脂質(zhì)納米粒藥物中的尾端大顆粒和雜質(zhì)，提高藥物的穩(wěn)定性和安全性。濾膜的材質(zhì)和型號將影響脂質(zhì)納米粒藥物的過濾效率和效果，綜合考慮膜與納米藥物配方的兼容性、成本、效率等多方面因素選擇合適的濾膜。Entegris濾芯Entegris-Anow是一家高分子微孔膜過濾企業(yè)，專業(yè)從事MCE、Nylon、PES、PVDF、PTFE等（膜孔徑為0.03μm~10μm）微孔膜的研發(fā)及生產(chǎn)，具有二十多年服務(wù)與醫(yī)藥客戶經(jīng)驗(yàn)，并為全球生物制藥、醫(yī)療器械、食品飲料、實(shí)驗(yàn)室分析、微電子及工業(yè)等領(lǐng)域的客戶提供過濾、分離和凈化解決方案。

2022-12-26 12:55:446種脂溶性維生素的快速檢測方案: 維生素是維持人體生命活動所必需的一類營養(yǎng)物質(zhì)，大多數(shù)由食物供給，屬于人體內(nèi)的一類調(diào)節(jié)物質(zhì)。維生素分為水溶維生素和脂溶維生素，脂溶性維生素是不溶于水而溶于脂類的一類維生素，在人體生長、代謝、發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用，包含維生素A、維生素D、維生素E和維生素K。VD在肝臟可轉(zhuǎn)化為25羥基維生素D(25OH-VD)，其濃度水平與體內(nèi)的VD直接相關(guān)，因此體內(nèi)25OH-VD2、25OH-VD3可作為檢測VD水平的生物標(biāo)志物。VK是激活凝血因子以及蛋白質(zhì)C和S的必須輔助因子，目前已知主要有K1、K2、K3、K4幾種形式，四烯甲萘醌VK2(MK4)既是VK2的家族成員，也是肝外組織中K1的代謝物。當(dāng)這些脂溶性維生素缺乏或過量時均會對人體造成傷害。具體見下表：一次性評估體內(nèi)多種維生素水平，才能全面“查漏補(bǔ)缺”。準(zhǔn)確測定人體中性維生素的含量，可以幫助臨床醫(yī)生準(zhǔn)確評估人體維生素營養(yǎng)狀態(tài)、吸收障礙或毒性水平。解決方案沃特世團(tuán)隊(duì)依托質(zhì)譜平臺ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-S IVD和 TQ-XS IVD開發(fā)了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)技術(shù)在維生素檢測中的應(yīng)用，在5 min內(nèi)即可完成6種脂溶性維生素的同時分析。前處理采用Andrew Alliance機(jī)器人搭配Oasis μElution PRiME HLB的固相萃取板，實(shí)現(xiàn)樣本前處理自動化，并解決LC-MS/MS檢測維生素的各種挑戰(zhàn)和難點(diǎn)。該方法檢出限低、分離效果好、穩(wěn)定性佳，可滿足臨床高通量自動化檢測需求。圖1. Andrew+移液機(jī)器人用于6種脂溶性維生素前處理操作時的工作臺布局，以及ACQUITY UPLC I-Class Xevo TQ-XS IVD檢測平臺。實(shí)驗(yàn)部分前處理樣本預(yù)處理：取100 μL 血清或者BSA稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，加入內(nèi)標(biāo)工作液，渦旋混勻，隨后加入乙腈沉淀蛋白，離心取上清液，做SPE凈化。液相色譜條件液相色譜系統(tǒng)：ACQUITY UPLC I-Class系統(tǒng)色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱, 1.7 μm，2.1 mm x 50 mm進(jìn)樣體積：5 μL結(jié)果與討論高通量，一針進(jìn)樣，同時檢測該方案5 min內(nèi)即可完成6種脂溶性維生素的同時測定，可同時檢測血清中維生素A(VA)、25-羥基維生素D2(25OHVD2)、25-羥基維生素D3(25OHVD3)、維生素E(VE)、維生素K1(VK1)、四烯甲萘醌K2(VK2-MK-4)，真正實(shí)現(xiàn)“一針進(jìn)樣，同時檢測”。圖2. 6種脂溶性維生素的標(biāo)準(zhǔn)品和血清色譜圖。靈敏度高，線性范圍寬，滿足臨床檢測需求正常人體血清中維生素A含量113 - 977 ng/mL；維生素E含量3.8 - 17 μg/mL；維生素D含量20 - 50 ng/mL；維生素K1含量為0.10 - 2.20 ng/mL。由于6種脂溶性維生素在血清中含量差異較大，VK1、MK4和25OH-VD2含量低，同時測定高低濃度物質(zhì)是串聯(lián)質(zhì)譜測定的難點(diǎn)，常存在低濃度、靈敏度差及高濃度過飽和現(xiàn)象。而Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD優(yōu)異的靈敏度及超寬線性范圍，可實(shí)現(xiàn)同時準(zhǔn)確定量這幾種維生素。自動化前處理，滿足高通量檢測需求Andrew+機(jī)器人可在無人值守狀態(tài)下自動完成移液、震蕩、混勻和96孔板SPE前處理過程。不僅大幅節(jié)省了樣品處理的時間，提高了通量，還可以簡化樣品制備過程、減少實(shí)驗(yàn)失誤，從而確保分析結(jié)果的穩(wěn)定重現(xiàn)。手動前處理96個樣本的時間大概是2 - 3 h。如果用Andrew+做自動化前處理，只需要提前把溶劑和樣本放到設(shè)置好的Domino blocks里中就可以完成自動化前處理和SPE流程。過程僅需不到1 h就可以完成。結(jié)論本方案使用Waters UPLC I-Class超高效液相色譜系統(tǒng)搭載UPLC色譜柱進(jìn)行分離，再用Xevo TQ-S IVD和TQ-XS IVD串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀對血清樣品中6種脂溶性維生素定量檢測。96個樣本的前處理不到1 h，每個樣本的液相分析時間僅5 min，每天可以檢測至少200例樣本。6個脂溶性維生素的加標(biāo)回收率85% - 115%之間，精密度RSD

2023-02-17 13:16:01核酸脂質(zhì)納米?？破铡猂NA-LNP包封率測定: 自新冠mRNA疫苗成功上市以來，脂質(zhì)納米粒（Lipid nanoparticle，LNP）已成為mRNA、siRNA、pDNA等核酸的優(yōu)先遞送載體，廣泛用于mRNA疫苗及治愈。微流控技術(shù)是目前制備核酸脂質(zhì)納米粒常用的技術(shù)，包封率則是評價其制備效果的重要指標(biāo)之一，下面就為大家介紹使用RiboGreen測定RNA-LNP包封率的方法。1 RiboGreen檢測RNA-LNP包封率的原理1.1RNA-LNP包封率（Encapsulationefficiency，EE）：包裹在脂質(zhì)納米粒內(nèi)部的RNA占RNA-LNP溶液中全部RNA的比例。1.2 RiboGreen檢測RNA原理：RiboGreen是一種用于定量檢測溶液中RNA含量的超敏感熒光核酸染料，當(dāng)RiboGreen熒光染料處于溶液狀態(tài)時，幾乎沒有熒光活性，與RNA結(jié)合時，其熒光活性將增加1000倍。RiboGreen-RNA復(fù)合物的熒光激發(fā)波長約500nm，發(fā)射波長約525nm，通過酶標(biāo)儀，建立已知濃度RNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得到樣品RNA濃度。1.3 RiboGreen檢測包封率原理：分別測定LNP-RNA溶液中游離RNA濃度，以及用Triton-100破壞LNP結(jié)構(gòu)后，溶液中全部的RNA濃度，兩者的差值就是包封在LNP內(nèi)部的RNA濃度。通過以下公式即可計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖1核酸脂質(zhì)納米顆粒的示意圖2操作要點(diǎn)2.1制備Buffer1X TE Buffer：使用試劑盒中20X TE Buffer稀釋。2% Triton-TE buffer：使用Triton-100與1X TE buffer以體積比1：50配制。2.2添加RNA-LNP樣品至全黑96孔板根據(jù)制備時RNA的量，可以大致計(jì)算需要稀釋的倍數(shù)。例如，已知 mRNA的原始質(zhì)量或濃度，使用銘汰MicroFlow S進(jìn)行RNA-LNP合成，根據(jù)稀釋、超濾等處理后的最終體積，即可估算大致總RNA濃度。同時，假設(shè)90%的包封率，即可估算游離RNA濃度。然后根據(jù)標(biāo)曲的濃度計(jì)算需要稀釋的大致倍數(shù)。這樣我們就可以使用1X TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測LNP外游離RNA濃度，使用2% Triton-TE buffer將RNA-LNP稀釋適合倍數(shù)以檢測總RNA濃度，建議每項(xiàng)檢測至少兩個不同稀釋倍數(shù)。然后，分別移取100 μL稀釋后的樣本，添加到全黑96孔板。2.3標(biāo)樣添加一般直接使用試劑盒中100 μg/mL的RNA標(biāo)樣，也可以使用與待測樣本類似的RNA標(biāo)樣來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。可以先用1X TE buffer將原始標(biāo)樣稀釋到工作濃度4 μg/mL，然后參考表1的體積比，配制為一定濃度梯度的標(biāo)樣。分別移取各濃度的標(biāo)樣100 μL，添加到全黑96孔板中。注：*最終RNA濃度考慮了步驟2.4添加RiboGreen染料后的濃度當(dāng)RNA-LNP樣品及特定濃度的標(biāo)樣添加到96孔板后，需要在37℃下避光孵育10 min，以使RNA-LNP在Triton buffer中充分裂解。2.4 RiboGreen染料添加把試劑盒中RiboGreen試劑，使用1X TE Buffer按照1：100的比例稀釋，例如需要2000 μL RiboGreen染料，可將20 μL的RiboGreen試劑添加到1980 μL的1X TE Buffer中。然后各取100 μL加入到已經(jīng)加有樣品的96孔板中，37℃下避光孵育5min。圖2 樣品添加2.5酶標(biāo)儀檢測打開酶標(biāo)儀，選擇熒光模式，激發(fā)光485nm，發(fā)射光528nm，讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)。 2.6數(shù)據(jù)處理及分析將每個樣本測得的熒光值減去空白熒光值，即可得到實(shí)際熒光值。根據(jù)標(biāo)樣的熒光值和濃度梯度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程。把樣品熒光值代入回歸方程，乘以稀釋倍數(shù)，即可得到樣本的RNA濃度。根據(jù)1.3中包封率公式計(jì)算得到包封率結(jié)果。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線3 小結(jié)準(zhǔn)確的包封率測定對于評價RNA-LNP的包封效果至關(guān)重要，影響著后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動物實(shí)驗(yàn)的開展。RNA-LNP包封率測定一般使用商業(yè)化的試劑盒，雖然操作環(huán)節(jié)較多，但只要細(xì)心規(guī)范，操作起來也并不難，相信大家可以得到準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。納米藥物制備系統(tǒng)應(yīng)用范圍：

2022-11-21 12:04:41【PSS-TN-22027A】USP 729 脂質(zhì)注射乳劑中的整體粒徑分布: 全文共2173字，閱讀大約需要7分鐘摘要：用于靜脈注射的脂質(zhì)注射乳劑是大豆油制的無菌水包油乳劑，檢測脂質(zhì)體注射乳劑的平均粒徑大小以及尾端大顆粒分布對于人體健康顯得十分關(guān)鍵。USP 729著重介紹了采用光散法及光阻法來檢測脂質(zhì)注射乳劑平均粒徑以及尾端大顆粒分布的兩種方法。奧法美嘉公司旗下的Nicomp Z3000以及Accusizer A7000 APS兩款儀器很好的滿足了USP 729的要求，為客戶的檢測提供了完整的解決方案。關(guān)鍵詞：脂質(zhì)注射乳劑、平均粒徑、尾端大顆粒、Nicomp Z3000、Accusizer A7000 APS乳狀注射液又稱脂肪乳注射液，是水包油的分散體系, 外觀呈半透明或不透明的乳狀液體, 為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。其制備工藝一般采用高壓均質(zhì)法或微射流法, 無論采用哪種制備方法, 脂肪乳的粒徑都無法得到完全均一的值, 存在一定粒徑分布范圍。通常, 在脂肪乳中,當(dāng)油脂的密度低于周圍水媒介密度約10%時, 乳析現(xiàn)象就會產(chǎn)生。乳析的乳劑只要輕輕攪拌, 乳滴仍能重新分布。但當(dāng)脂滴合并成直徑超過1μm的大脂滴時, 脂滴的合并便是不可逆的過程, 脂滴會逐漸聚集, 1μm脂滴可“生長”成 5μm甚至更大的脂滴顆粒, 直至自由脂滴從乳劑中析出，成為不穩(wěn)定脂肪乳。1、工作原理USP 729中著重介紹了檢測平均粒徑大小的動態(tài)光散射法與檢測尾端大顆粒的光阻法。檢測平均粒徑大小動態(tài)光散射（DLS）動態(tài)光散射（DLS），同樣理解為與光子相關(guān)的光譜法（PCS）。DLS或者說PCS技術(shù)的基礎(chǔ)是分析由于懸浮在液體中的任何粒子（包括乳粒）的隨機(jī)布朗運(yùn)動或擴(kuò)散而引起的散射光強(qiáng)隨時間的波動。光強(qiáng)由合適的檢測器（例如光電倍增管）以給定的入射角度（通常為90度）測量，該檢測器可以測量由懸浮顆粒運(yùn)動導(dǎo)致的快速隨機(jī)的散射光強(qiáng)度，測量得到的光強(qiáng)數(shù)據(jù)用來計(jì)算光強(qiáng)自相關(guān)管函數(shù)，利用斯托克-愛因斯坦方程計(jì)算樣品粒徑大小。經(jīng)典光散射經(jīng)典光散射，基于米氏散射理論。測量散射光角度來反映散射光強(qiáng)的變化，通常在大范圍的檢測角。檢測尾端大顆粒光阻法單個粒子通過狹窄的光感區(qū)時阻擋了一部分入射光，引起到達(dá)檢測器的入射光強(qiáng)度瞬間降低，強(qiáng)度信號的衰減幅度理論上與粒子橫截面（假設(shè)橫截面積小于光感區(qū)的寬度），即粒子直徑的平方成比例。用系列標(biāo)準(zhǔn)粒子建立粒徑與強(qiáng)度信號大小的校正曲線。儀器測得樣品中乳粒通過光感區(qū)產(chǎn)生的信號，根據(jù)校正曲線計(jì)算出乳粒的粒徑及加權(quán)體積。使用單粒子光學(xué)傳感技術(shù)傳感器時，需知道重合限與最佳流速。2、相關(guān)儀器及標(biāo)準(zhǔn)在儀器標(biāo)準(zhǔn)化測試過程中規(guī)定了樣品體積精度、樣品流速、粒度響應(yīng)曲線直徑校準(zhǔn)、傳感器分辨率的各項(xiàng)要求。平均粒徑（1）儀器：采用動態(tài)光散射法的設(shè)備（可帶自動稀釋）如Nicomp Z3000（2）水：將蒸餾水透過一個0.2μm的濾膜過濾，通過超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無菌水。（3）標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。100nm，250nm和400nm三種不同尺寸標(biāo)準(zhǔn)的粒子4）樣品稀釋濃度：采用什么樣的最佳稀釋方案以達(dá)到適當(dāng)?shù)纳⑸鋸?qiáng)度為基礎(chǔ)來分析是由儀器的規(guī)格決定的。因此，最終樣品中乳膠的濃度必須根據(jù)所使用的動態(tài)光散射設(shè)備決定。（5）系統(tǒng)適應(yīng)性通過標(biāo)準(zhǔn)：按照標(biāo)準(zhǔn)操作測量，得到樣品光強(qiáng)徑平均粒徑以及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)偏差。該系統(tǒng)適用于當(dāng)樣品達(dá)到穩(wěn)定溫度后，結(jié)果穩(wěn)定，并且平均三次測量平均粒徑的結(jié)果。變異系數(shù)不能超過NIST-可追溯平均粒徑的10%。尾端大顆粒（1）儀器：采用合適的具有或沒有自動稀釋的并且由計(jì)算機(jī)控制操作的光阻法儀器進(jìn)行測量。如Accusizer A7000 APS（2）水：將蒸餾水透過一個0.2μm的濾膜過濾，通過超聲去除里面的氣泡，或者用保存在玻璃容器中注射用的無菌水。（3）標(biāo)準(zhǔn)粒子：可溯源的苯乙烯乳液標(biāo)準(zhǔn)粒子或其他合適的納米球。光阻法儀器的粒徑測量與計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性要通過兩個不同的標(biāo)準(zhǔn)混合粒子5和10μm混標(biāo)獲得。（4）樣品稀釋濃度：不帶有自動稀釋的儀器需手動進(jìn)行稀釋。配備了自動稀釋系統(tǒng)，濃縮的樣品可以通過注射器或者特氟隆樣品線直接進(jìn)入儀器進(jìn)行分析，然后自動稀釋，優(yōu)化液滴濃度進(jìn)行分析。（5）系統(tǒng)適應(yīng)性通過標(biāo)準(zhǔn)：設(shè)置儀器的閾值為1.8μm，上限延申至50μm. 重復(fù)三次測量標(biāo)準(zhǔn)粒子的粒徑與每毫升數(shù)量。相關(guān)結(jié)果的平均粒徑應(yīng)該符合標(biāo)粒的期望值，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以內(nèi)，粒徑準(zhǔn)確度在90%到110%以內(nèi)。另外，粒子每毫升顆粒數(shù)應(yīng)該與標(biāo)準(zhǔn)粒子濃度偏差在10%以內(nèi)。（6）樣品通過標(biāo)準(zhǔn)：將儀器的閾值設(shè)定為1.8μm，上限延申至50μm。在任何情況下，只要測量5μm粒徑以上的粒子數(shù)足夠多，它就代表了樣品中由足夠多的球狀粒子，這些粒子在統(tǒng)計(jì)學(xué)上代表了原生乳液中的尾端大粒子。大于5μm的乳粒加權(quán)總體積占油相體積的百分比，其結(jié)果不得超過0.05%。3、Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS奧法美嘉旗下的Nicomp Z3000 & Accusizer A7000 APS型號設(shè)備是典型的動態(tài)光散射法和光阻法原理的設(shè)備，采用Nicomp 、SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過對樣品的準(zhǔn)確分析，集檢測、數(shù)據(jù)處理及自動沖洗等功能一體，操作便捷、高效。Nicomp Z3000相比于其他廠家的DLS設(shè)備，在常用的高斯分布下，又用自己獨(dú)特的Nicomp算法，可準(zhǔn)確分辨出樣品是否屬于多峰，給客戶提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，滿足客戶的需求。Nicomp Z3000可以檢測0.3nm-10μm的準(zhǔn)確粒徑分布。Accusizer A7000 APS采用SPOS單顆粒光學(xué)傳感技術(shù)，通過對樣品進(jìn)行自動稀釋，有效避免了人工操作導(dǎo)致的檢測誤差，集檢測、數(shù)據(jù)處理及自動沖洗等功能一體，操作便捷、高效。使用Accusizer APS光學(xué)粒度分析儀測試5μm和10μm的混合標(biāo)粒（批號：UH13A），結(jié)果如下圖所示：參考資料USP 729脂質(zhì)注射乳劑中球狀大小分布