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2025-01-10 10:49:34氨基酸水解
氨基酸水解是指蛋白質(zhì)在酸、堿或酶的作用下，水解成單個氨基酸的過程。這個過程中，蛋白質(zhì)的長鏈肽鍵被斷裂，逐步分解成較小的氨基酸分子。氨基酸水解是生物化學和營養(yǎng)學中的重要反應(yīng)，有助于人體對蛋白質(zhì)的吸收和利用。水解得到的氨基酸可以用于合成新的蛋白質(zhì)，也可以作為能量來源或參與其他生物化學反應(yīng)。

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2022-07-11 09:57:23抑郁有可能是氨基酸攝入過多了
飲食正是影響腸道微生物群組成的主要因素之一，因此飲食如何通過微生物群來影響大腦健康和精神疾病，也受到了很多研究的關(guān)注。日前，西班牙赫羅納生物醫(yī)學研究所（IDIBGI）的一支研究團隊，在人類以及果蠅、小鼠等多個物種中證明，抑郁的嚴重程度與血液中一種常見氨基酸——脯氨酸（proline）含量升高顯著相關(guān)，而血液中的脯氨酸水平則取決于飲食以及腸道微生物的組成與代謝活性。研究結(jié)果發(fā)表在《細胞》旗下子刊Cell Metabolism上。倫敦國王學院（King’s College London）的代謝專家Sandrine Claus教授評論說：“據(jù)我所知，這是***次有研究團隊真正證明，脯氨酸攝入量與抑郁行為之間存在因果關(guān)系?！毖芯咳藛T從一份調(diào)查食物攝入頻率的問卷中注意到了脯氨酸。這份問卷調(diào)查包含人們?nèi)粘z入的80項食物，涉及各種膳食營養(yǎng)素。研究人員將數(shù)十名參與者的問卷調(diào)查結(jié)果與他們的抑郁癥評估得分進行了比較。結(jié)果顯示，各項膳食營養(yǎng)素中，脯氨酸與抑郁特征的關(guān)聯(lián)***為明顯。在對參與者進行血液檢測后，結(jié)果同樣顯示，血液循環(huán)中的脯氨酸含量與抑郁嚴重程度顯著相關(guān)。那些膳食脯氨酸攝入量高且血液脯氨酸高于中位數(shù)的受試者，抑郁評分***高?！拔覀儼l(fā)現(xiàn)，不僅是在重性抑郁中，在中性抑郁患者中也可以看到脯氨酸循環(huán)含量升高的現(xiàn)象。”研究人員強調(diào)。然而，研究人員敏銳地注意到數(shù)據(jù)中有些不一致的地方。簡單來說，通過飲食攝入脯氨酸同樣多的人，血漿的脯氨酸水平并沒有全都升高。在對這些參與者的血液和糞便樣本進行多組學分析后，研究人員找到了解釋：血漿脯氨酸水平與特定幾種腸道細菌（例如某些乳酸桿菌屬的細菌）的存在及其活性有關(guān)。攝入的脯氨酸量相同，但血液循環(huán)中的脯氨酸含量有差異的個體，腸道菌群的組成不同，而其中脯氨酸較高的人，腸道菌群的組成特征與較嚴重的抑郁癥密切相關(guān)?！撗芯渴疽鈭D脯氨酸與抑郁癥之間的聯(lián)系在后續(xù)的動物實驗中得到了進一步驗證。研究人員給一些小鼠的飲食中額外添加了脯氨酸補充劑，一段時間后，這些小鼠的脯氨酸循環(huán)含量高于普通飲食的小鼠，而它們在承受壓力時，也會比對照組小鼠表現(xiàn)出更多的類似抑郁的行為，例如不再對好喝的糖水感興趣。小鼠實驗還顯示了腸道菌群在其中起到的重要作用。研究人員從20名人類志愿者中獲取了糞便樣本，通過糞便移植將其中的腸道菌群植入無菌小鼠體內(nèi)。這些志愿者中，有一部分人的血漿脯氨酸水平很高，抑郁程度也相對嚴重。結(jié)果他們的腸道菌群進入小鼠腸道后，小鼠的行為也跟著有了變化。研究人員發(fā)現(xiàn)，來自抑郁評分***高的受試者的腸道菌群，誘導小鼠出現(xiàn)了更明顯的抑郁情緒特征。不僅如此，研究人員還通過RNA測序發(fā)現(xiàn)，糞便移植后的小鼠，大腦中一些基因表達發(fā)生了變化。這些小鼠的前額葉皮層（這個腦區(qū)與認知有關(guān)）中，與抑郁行為相關(guān)的基因表達增加，以及一個關(guān)鍵基因——編碼脯氨酸轉(zhuǎn)運蛋白的基因slc6a20a表達增加。而這個脯氨酸轉(zhuǎn)運蛋白的表達量高低，在果蠅實驗中得到證明，會影響動物是否更容易出現(xiàn)抑郁行為。盡管無法在人類身上進行類似的實驗，但綜合這些動物實驗的結(jié)果來看，特殊的腸道菌群通過脯氨酸代謝影響了大腦在發(fā)展抑郁癥狀方面的功能。研究人員指出，后續(xù)他們將進一步在人群中驗證脯氨酸含量不同的飲食對抑郁癥狀與表現(xiàn)的影響，研究結(jié)果有望通過針對腸道菌群和膳食脯氨酸為有效抑郁癥打開新的窗口。生物磁珠對細胞篩選的方法已日漸成熟，原理是將包被一抗的磁珠與細胞表面對應(yīng)的分子特異性結(jié)合，或者將包被二抗的磁珠與已經(jīng)與細胞表面分子特異性結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細胞吸附與分離柱或試管上，實現(xiàn)陽性細胞或陰性細胞的分離。洛陽吉恩特生物自主研發(fā)生產(chǎn)了各類生物磁珠，可以實現(xiàn)穩(wěn)定的實驗結(jié)果。
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2022-11-29 12:00:18【Application Note】受阻、非標準氨基酸的微波輔助多肽固相合成
摘要?微波增強的多肽固相合成（SPPS）能夠快速有效地進行大體積氨基酸（如Aib和N-Me-A）的常規(guī)困難偶聯(lián)? ?；d體蛋白衍生物VQAibAibIDYINGOH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小時內(nèi)完成，純度分別為95%和86%? GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2的合成在3小時內(nèi)完成，純度為 89%介紹在許多生物學相關(guān)的化合物中都可以找到受阻的非標準氨基酸，例如α-氨基異丁酸(Aib)和N-甲基丙氨酸((N-Me)-A)（圖1）1-3。然而，包括Aib或N-甲基化氨基酸的肽合成已被證明具有挑戰(zhàn)性；第二個甲基引入的空間位阻，無論是在α-碳還是酰胺氮上，都使這些氨基酸衍生物在傳統(tǒng)SPPS中難以偶聯(lián)。圖1 位阻、非標準氨基酸然而，通過使用微波增強的SPPS，與受阻非標準氨基酸相關(guān)的困難已被最小化。在SPPS中使用微波能量可以快速有效地完成大體積氨基酸（如Aib和N-甲基丙氨酸）的常規(guī)困難偶聯(lián)4,5。材料和方法試劑N-α-Fmoc-α-氨基異丁酸獲自AnaSpec(Freemont,CA)。Fmoc-N-Me-Ala-OH獲自Peptides International(Louisville,KY)。所有其他氨基酸均獲自CEM Corporation(Matthews,NC)，并含有以下側(cè)鏈保護基團：Asn(Trt)、Asp(OMpe)、Gln(Trt)、Glu(OtBu)、Lys(Boc)、Ser(OtBu) 和Tyr(tBu) 。Oxyma Pure和Rink Amide ProTideTM LL樹脂購自CEM Corporation(Matthews,NC)。N,N-二異丙基碳二亞胺(DIC)獲自CreoSalus(Louisville,KY)。Fmoc-Gly-Wang Resin LL購自NovaBiochem(St.Louis,MO)。哌啶獲自Alfa Aesar(Ward Hill,MA)。三氟乙酸(TFA)、3,6-dioxa-1,8-octanedithiol(DODT)、三異丙基硅烷(TIS)和乙酸購自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。二氯甲烷(DCM)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和無水乙 醚(Et2O)購自VWR (West Chester,PA)。HPLC級水(H2O)和HPLC級 乙 腈(MeCN) 購 自 Fisher Scientific (Waltham, MA) 。多肽合成：GEQKLGAibAibAibASEESLG-NH2使用CEM Liberty Blue?自動微波肽合成儀在Rink Amide ProTide LL樹脂（離子交換容量：0.18meq/g）上以0.1mmol規(guī)模制備多肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中進行脫保護。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍過量的Fmoc-AA-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)。使用具有TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系統(tǒng)進行切割。裂解后，肽在無水乙 醚中沉淀并凍干過夜。多肽合成：VQAibAibIDYING-OH使用CEM Liberty Blue自動微波肽合成儀在FmocGly-Wang LL 樹脂（離子交換容量：0.33meq/g）上以0.1mmol規(guī)模制備。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中進行脫保護。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍過量的Fmoc-AA-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系統(tǒng)進行切割。裂解后，肽在無水乙 醚中沉淀并凍干過夜。多肽合成：VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH使用CEM Liberty Blue自動微波肽合成儀在FmocGly-Wang LL 樹脂（離子交換容量：0.19meq/g）上以0.1mmol規(guī)模制備肽。用哌啶和Oxyma Pure在DMF中進行脫保護。使用DMF中的DIC、DMF中的Oxyma Pure和5倍過量的Fmoc-AA-OH進行偶聯(lián)反應(yīng)。使用具有 TFA/H2O/TIS/DODT的CEM Razor高通量肽切割系統(tǒng)進行切割。裂解后，肽在無水乙 醚中沉淀并凍干過夜。多肽分析在配備有PDA檢測器的Waters Acquity UPLC系統(tǒng)上分析肽，該檢測器配備Acquity UPLC BEH C8柱（1.7mm和2.1x100mm）。UPLC系統(tǒng)連接到Waters 3100 Single Quad MS用于結(jié)構(gòu)測定。在Waters MassLynx軟件上進行峰分析。使用(i)H2O和(ii)MeCN中的0.1%TFA梯度洗脫進行分離。結(jié)果在Liberty Blue自動微波肽合成儀上GEQKLGAibAibAibAibASEEDLG-NH2的微波增強SPPS產(chǎn)生了89%純度的目標肽（圖2）。圖2.GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2的HPLC色譜圖在Liberty Blue自動微波肽合成儀上的VQAibAibIDYING-OH的微波增強SPPS產(chǎn)生了純度為95% 的目標肽（圖3）。圖 3：VQAibAibIDYING-OH的HPLC色譜圖在Liberty Blue自動微波肽合成儀上的VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的微波增強SPPS產(chǎn)生了純度為86%的目標肽（圖4）。圖 4：VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的HPLC色譜圖結(jié)論微波增強的SPPS能夠快速有效的進行大體積氨基酸（如Aib和N-Me-A）的常規(guī)困難偶聯(lián)。常規(guī)合成GEQKLGAibAibAibASEEDLG-NH2需要40小時且純度< 10%，但微波增強SPPS在3小時內(nèi)產(chǎn)生目標肽且純度為89%。此外，?；d體蛋白衍生物VQAibAibIDYING-OH和VQ(N-Me-A)(N-Me-A)IDYING-OH的合成在2小時內(nèi)完成，純度分別為95% 和86%。微波增強的SPPS已被證明是一種有效的工具，可以最 大限度地減少SPPS中受阻的非標準氨基酸相關(guān)的困難。參考文獻Mueller, P.; Rudin, D. O. Nature. 1968, 217, 713–719.Rebuffat, S.; Goulard, C.; Hlimi, S.; Bodo, B. J. Pept. Sci. 2000, 6, 519–533.Ahmed, G.; Elger, W.; Meece, F.; Nair, H. B.; Schneider, B.; Wyrwa, R.; Nickisch, K. Bioorg. Med. Chem. 2017, 25, 5569–5575. Collins, J. M. Microwave-Enhanced Synthesis of Peptides, Proteins, and Peptidomimetics. In Microwaves in Organic Synthesis, Third Edition; de la Hoz, A.; Loupy, A.; Wiley-VCH: Weinheim, 2012; 897–959.Ben Haj Salah, K.; Inguimbert, N. Org. Lett. 2014, 16 (6), 1783–1785.
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2020-01-19 16:08:46Biochrom30+氨基酸分析儀檢測海鱸魚中水解氨基酸
摘要：       以海鱸魚為原料，使用Biochrom30+全自動氨基酸自動分析儀對其肌肉的氨基酸組成進行分析。結(jié)果表明海鱸魚肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為20610.288mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.49%，鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.63%。一、樣品前處理       1、所用試劑       1.1  濃鹽酸，濃度≥36%,優(yōu)級純       1.2 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。       1.3  水：去離子水       1.4   苯酚：須重蒸       1.5  17種氨基酸標準品       2、前處理設(shè)備       1)分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g       2)水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL       3)勻漿機       4)無油真空泵       5)干浴水解濃縮儀       6)移液管       7)0.22um濾膜       3、樣品制備（參考國標GB 5009.124-2016）       原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內(nèi)臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保存，分析時取出解凍后使用。二、分析方法描述（Biochrom 30+）       氨基酸分析儀分析方法參數(shù)：       1)色譜柱：Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱，4.6x20cm       2)分離程序：       附、圖譜及做樣結(jié)果
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2022-06-15 14:36:04氨基酸衍生法數(shù)據(jù)大PK：OPA or 茚三酮，原來選它
氨基酸是構(gòu)建生物機體的眾多生物活性大分子之一，是構(gòu)建細胞、修復組織的基礎(chǔ)材料。它被人體用于制造抗體蛋白、血紅蛋白、酶和激素以維持和調(diào)節(jié)新陳代謝，是一切生命之源。由于氨基酸的重要性，合適可靠的檢測方案將成為評估食品、飼料、藥物及生理樣品中氨基酸指標的重要選擇。HPLC—柱后衍生法，50多年來作為氨基酸領(lǐng)域的重要檢測手段，因為其高效的測試準確性和重現(xiàn)性，深受廣大用戶的信賴。氨基酸檢測在藥物、食品、飼料中的主要應(yīng)用有：●   通過分析氨基酸組鑒定多膚和蛋白質(zhì)；●   原料藥和中間體中的雜質(zhì)和有關(guān)物質(zhì)的測定；●   藥物中單個或總氨基酸的定量， 包括復雜基質(zhì)中標記物的測定；●   重組蛋白生產(chǎn)過程的控制；●   確定氨基酸組成也是保證食品和飼料營養(yǎng)價值的必要條件；●   用于產(chǎn)品質(zhì)量及過程監(jiān)測。 衍生方法介紹Pickering Laboratories根據(jù)上述應(yīng)用的檢測對象的不同，將衍生方法分為OPA衍生法和茚三酮衍生法，兩種方法都可以與任何氨基酸陽離子交換柱和洗脫液組合使用。其中我們稱為Trione ?的專利茚三酮試劑，也廣泛應(yīng)用于氨基酸分析儀中。 OPA法與茚三酮法區(qū)別見下表：                                                                          氨基酸衍生法 Trione?試劑（專利）分析法OPA試劑分析法衍生試劑TlOO－預混試劑 ；自生產(chǎn)日期起計算， 4個月保質(zhì)期（950 ml/瓶） TlOOC －預混試劑；自生產(chǎn)日期起計算， 4個月保質(zhì)期（950 mL/瓶） T200 - 2部分試劑，混合后使用，從生產(chǎn)之日起12個月保質(zhì)期；4組／箱(900mL／瓶）OD104－氨基酸分析用OPA稀釋液； O120-OPA試劑（5g／瓶） 3700-2000 －疏基化合物。（10g／瓶） 這三種產(chǎn)品都是用于氨基酸OPA分析法適用樣品一級和二級氨基酸一級氨基酸 在與OPA反應(yīng)之前需要檢測二級氨基酸氧化步驟。使用氧化步驟時，一級氨基酸的檢測靈敏度會有所降低。檢測器UV/VISFLD儀器靈敏度10 pmole （在色譜柱上）2 pmole （在色譜柱上）色譜柱&洗脫液適用于任何陽離子交換柱氨基酸分析法與任何用于氨基酸分析的陽離子交換柱配合使用配置單泵Ony×PCXI vector PCX+ 0.5 m L反應(yīng)器單泵Ony×PCX/ vector PCX+ 0.15 ml反應(yīng)器。 ＊需要帶有0.5 mL和0.1 mL反應(yīng)器的雙泵OnyxPCX來檢測二級氨基酸。 在此模式下， 初級氨基酸的靈敏度會降低。 色譜柱的選擇                                 圖1：鈉柱氨基酸分析選擇                               圖2：鋰柱氨基酸分析選擇                                      圖3：氨基酸標品                                            圖4：豆粕樣品                                     圖5：水解單克隆樣品  Pickering產(chǎn)品  完整解決方案歐洲藥典8.0對于氨基酸的柱后衍生茚三酮法做了詳細的要求，藥典對于包括化學、 動物、 人或草藥來源的活性物質(zhì)、賦形劑和制劑，順勢療法制劑，抗生素，制劑和容器等都有所要求。Pickering Laboratories 將歐洲藥典作為測試依據(jù)，為客戶提供完整的氨基酸分析解決方案。                    Pickering 柱后衍生儀 解決方案包括Onyx PCX/Vector PCX 柱后衍生儀器、分析柱、保護柱、緩沖液和Trione ?茚三酮試劑。并且對方法進行了優(yōu)化， 在符合藥典各項體系適宜性要求的同時，提高了分析的靈敏度及分析效率。                                Pickering全套試劑包                           圖6：依據(jù)歐洲藥典8.0法測試氨基酸   關(guān)于Pickering Laboratories 美國Pickering Laboratories公司是僅有的專業(yè)提供人工測試體液和柱后衍生化學試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機構(gòu)，其不斷創(chuàng)新及良好的信譽被眾多的美國政府機構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的廠商所認可。
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2022-01-18 15:16:31如何使用EDGE從需要進行酸水解的食品樣品中提取脂肪
簡介食品制造商需要提取脂肪。 通常，必須使用酸對食品樣品進行預水解，以便在提取過程中回收其總脂肪。 例如，在低于正常脂肪提取溫度的情況下，發(fā)生化學變化的食物（如雞蛋）需要此步驟。使用這個操作程序從需要預水解的食 品中，用酸水解的方式提取脂肪，對于用戶而言，在他們的實驗室中這個步驟是必須的。 樣品類型 含有結(jié)合脂肪的食物或用戶想要水解的任何食物。 但是請不要使用這種方法從肉類中提取脂肪。 樣品準備 1. 研磨或均質(zhì)食品樣品。 注意：食物含水多嗎？研磨前，請在 100 °C 的烘箱中預干燥樣品 1 小時。 2.稱取 3 g 或更少的食物樣品放入玻璃燒杯中。記錄重量。 注意：對于堅果醬等脂肪較多的食物，請使用較小的樣本量（2 克或更少）。 3. 向樣品中加入 45 mL 沸水。然后，向樣品中添加 55 mL 的 8 M HCl。 4. 用玻璃攪拌棒攪拌混合物，用表面皿蓋住混合物，并使用加熱板或加熱塊使樣品沸騰 1 小時?；旌衔飼?nbsp;成黑色的變體。 5. 將混合物從火上移開，讓它摸起來冷卻。 6. 使用 Whatman 1 過濾器組裝過濾裝置。 注意：過濾裝置可以是放置在帶有真空的過濾瓶中的布氏漏斗中的過濾器，也可以是放置在帶有燒瓶下方的 漏斗中的過濾器，允許樣品通過重力滴入。 7. 將樣品轉(zhuǎn)移到過濾組件中，讓過濾器收集黑色水解產(chǎn)物。用 100 mL 水沖洗原始樣品燒杯，以轉(zhuǎn)移可能留 在燒杯中的任何水解產(chǎn)物 8. 從過濾裝置中取出過濾器。在 100 °C 下烘箱干燥過濾器 1 小時。 9. 通過將 G0 Q-Disc 插入 Q-Cup 的底部，然后在頂部放置 Q-Support 來準備 Q-Cup。 注意：EDGE方法編程時請選擇G0作為EDGE方法中的Q-Disc 10. 將干燥的過濾器插入 Q-Cup 的頂部。 注意：過濾器可能會被撕裂或穿孔，而不會降低脂肪回收率。如果使用的過濾器很大，可以將它們撕開以 更好地安裝在 Q-Cup 內(nèi)。 11. 在折疊過濾器的頂部放置一個 Q-Screen，然后使用 Q-Screen 工具將過濾器壓縮到 Q-Cup 中。 12. 將 Q-Cup 放在 EDGE 架上。將預先稱重的小瓶與架子上記錄的重量放在一起。 EDGE萃取 13. 通過用石油醚或所需溶劑灌注溶劑管線并在下面的 EDGE 方法中編程來準備 EDGE。 14. 使用下面的 EDGE 方法提取樣品。 注意：此方法需要兩個 40 mL 或 60 mL 小瓶。萃取的后續(xù)工作 15. 從架子上取下萃取瓶。 注意：如果樣品的脂肪含量較高，則所得提取物可能呈黃色。 16. 將樣品瓶置于 60 °C 的蒸發(fā)器中，讓所有溶劑蒸發(fā)。 注意：脂肪將作為油性粘稠層保留在小瓶底部。 17. 將樣品瓶放入 100 °C 的烘箱中 1 小時，以去除任何殘留的水分或溶劑。 18. 讓小瓶冷卻并稱重。  其中小瓶之后是蒸發(fā)后小瓶的重量，小瓶之前是提取前小瓶的重量。方法開發(fā)技巧以下方法是適用于大多數(shù)樣品類型的保守方法。請注意，可能有針對特定樣品的更優(yōu)化方法。請聯(lián)系 Molecular Support以獲取更多信息。文獻中有許多可用的酸水解方法。任何方法都可以，只要將黑色水解產(chǎn)物過濾，用水徹底沖洗，并用可干燥 和提取的過濾器捕獲即可。 其他提取溶劑，如乙酉迷和己烷，可用于提取脂肪。 如果此方法的回收率低于預期，則將每個循環(huán)的保持時間增加 1 分鐘。此外，如果可能，請考慮增加總提 取量或減少樣本量。
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氨基酸水解