用來進(jìn)行蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的測(cè)定的儀器，稱為氨基酸分析儀。必須先蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸，然后再進(jìn)行氨基酸分析。其是以陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定為基準(zhǔn)的離子交換色譜儀。下面就讓小編帶你了解一下氨基酸分析儀的工作原理，操作方法以及指標(biāo)信息。

這些有色產(chǎn)物對(duì)570nm、440nm光的吸收強(qiáng)度與洗脫出來的各氨基酸的濃度（或含量）之間的關(guān)系和比耳定律相符，能夠和標(biāo)準(zhǔn)氨基酸比較作定性和定量測(cè)定。

工作原理

由于氨基酸組分的結(jié)構(gòu)、酸堿性、極性及分子大小存在差異，能夠從陽離子交換柱上分離出它們，通過對(duì)不同pH值離子濃度的緩沖液的利用依次洗脫下各氨基酸組分，再以另yi流路的茚三酮試劑逐個(gè)混合，之后共同往螺旋反應(yīng)管中流入，在一定溫度下（一般是115～120攝氏度）進(jìn)行顯色反應(yīng)，從而使在在570nm有Z大吸收的藍(lán)紫色產(chǎn)物形成。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物，440nm為Z大吸收。

操作方法

樣品處理

對(duì)樣品中各種游離氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定，能夠?qū)⒅倦s質(zhì)除去，直接上柱進(jìn)行分析。

必須先經(jīng)過酸水解才能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)的氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定，上柱分析之前，必須使蛋白質(zhì)完全變成氨基酸。

樣品分析

經(jīng)過處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。按照所用自動(dòng)分析儀的靈敏度來確定上柱的樣品量。通常是每種氨基酸大約0.1μmol（水解樣品干重大約為0.3mg）。必須在pH5～5.5、100攝氏度下進(jìn)行測(cè)定，10～15分鐘為反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間。在570nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行生成的紫色物質(zhì)的比色測(cè)定。在440nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行生成的黃色化合物的比色測(cè)定。一個(gè)氨基酸全分析通常僅要大約一個(gè)小時(shí)，可以同時(shí)往儀器中裝入幾十個(gè)樣品，按照順序自動(dòng)分析，Z后數(shù)據(jù)會(huì)自動(dòng)計(jì)算給出，非常精確。±1～3%為儀器的精度。

結(jié)果計(jì)算

各種氨基酸的定量結(jié)果可以通過帶有數(shù)據(jù)處理機(jī)的儀器自動(dòng)打印出來，不然，能夠用尺子測(cè)量峰高或用峰高乘以半峰寬確定峰面積來將氨基酸的精確含量計(jì)算出來。除此以外，氨基酸的種類能夠根據(jù)峰出現(xiàn)的時(shí)間進(jìn)行確定。

指標(biāo)信息： 

峰面積重現(xiàn)性：RSD≤1% (水解，所有峰)

保留時(shí)間重現(xiàn)性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 

分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98%