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鈣離子熒光探針Fluo-3,AM說明書
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本文由 上海科學(xué)儀器有限公司 整理匯編
2018-09-20 10:00 1077閱讀次數(shù)
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Fluo-3結(jié)合鈣離子后的吸收波長為506nm,發(fā)射波長為526nm(綠色)。因為常被用488型激光發(fā)生器激發(fā),激發(fā)波的長波長降低了背景熒光的干擾,故是使用Z廣泛的熒光探針之一。Fluo-3與Fura-2和Indo-1不同的是,與Ca2+離子結(jié)合前后,無論是激發(fā)或是發(fā)射的波峰均沒有顯著遷移,這導(dǎo)致使用熒光比率測定法并不適用于Fluo-3。Fluo-3在沒有鈣離子存在時基本是不發(fā)熒光的,但是在結(jié)合鈣離子后熒光強度至少增加了40倍。由于Fluo-3結(jié)合鈣離子的能力遠低于Fluo-2和Indo-1,因此用于檢測瞬時較高的鈣離子濃度更為實用。與其它的脂溶性產(chǎn)品一樣,F(xiàn)luo-3AMester長期暴露在潮濕環(huán)境中相對不穩(wěn)定,因此,biotium提供好幾種Fluo-3AMester的包裝,包括20x50gand10x100g,使儲存和操作都很便利。Biotiumduchuang的純化程序使價格實惠的同時確保其**品質(zhì)(=95%byHPLC)。
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鈣離子熒光探針Fluo-3,AM說明書
- Fluo-3結(jié)合鈣離子后的吸收波長為506nm,發(fā)射波長為526nm(綠色)。因為常被用488型激光發(fā)生器激發(fā),激發(fā)波的長波長降低了背景熒光的干擾,故是使用Z廣泛的熒光探針之一。Fluo-3與Fura-2和Indo-1不同的是,與Ca2+離子結(jié)合前后,無論是激發(fā)或是發(fā)射的波峰均沒有顯著遷移,這導(dǎo)致使用熒光比率測定法并不適用于Fluo-3。Fluo-3在沒有鈣離子存在時基本是不發(fā)熒光的,但是在結(jié)合鈣離子后熒光強度至少增加了40倍。由于Fluo-3結(jié)合鈣離子的能力遠低于Fluo-2和Indo-1,因此用于檢測瞬時較高的鈣離子濃度更為實用。與其它的脂溶性產(chǎn)品一樣,F(xiàn)luo-3AMester長期暴露在潮濕環(huán)境中相對不穩(wěn)定,因此,biotium提供好幾種Fluo-3AMester的包裝,包括20x50gand10x100g,使儲存和操作都很便利。Biotiumduchuang的純化程序使價格實惠的同時確保其**品質(zhì)(=95%byHPLC)。[詳細]
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2018-09-20 10:00
產(chǎn)品樣冊
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鈣離子復(fù)合電極說明書
- 復(fù)合離子電極使用說明書由上海恒磁電子科技有限公司提供,僅供參考地址:上海楊浦區(qū)延吉東路390號聯(lián)系人:郝先生電話:021-35304675手機:1391684770218019187435傳真:021-35300952網(wǎng)址:www.hengci1718.com郵箱:www.hengci17@163.com公司QQ:1976289431[詳細]
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2018-10-02 10:03
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AM 系列磁力攪拌器使用說明書(五)
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豬鈣離子(Ca2+)ELISA試劑盒使用說明書
- 南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠,試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定豬血清,血漿,細胞上清及相關(guān)液體樣本中豬鈣離子(Ca2+)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中豬鈣離子(Ca2+)水平。用純化的豬鈣離子(Ca2+)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入鈣離子(Ca2+),再與HRP標記的鈣離子(Ca2+)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的鈣離子(Ca2+)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中豬鈣離子(Ca2+)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:36umol/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為24umol/ml,16umol/ml,8umol/ml,4umol/ml,2umol/ml)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:0.8umol/ml-30umol/ml保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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組織鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒 說明書(中文版)
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2014-12-29 00:00
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AM系列磁力攪拌器(一)
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2024-09-30 18:26
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2014-12-26 00:00
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植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途植物鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過鈣離子特異性熒光探針Fluo-4,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定植物組織裂解懸液中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種植物組織,包括種子(seed)、葉片(leaf)、根(root)、胚胎葉(cotyledon)、上胚軸(epicotyl)等裂解萃取樣品中總鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求。Fluo-4,一種與鈣離子結(jié)合,其熒光強度迅速增強100倍的熒光探針,可以敏感測定微量游離鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長485nm,散發(fā)波長520nm,來定量測定植物組織細胞的鈣濃度。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)60毫升裂解液(ReagentB)20毫升反應(yīng)液(ReagentC)6毫升飽和液(ReagentD)2毫升陰性液(ReagentE)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;反應(yīng)液(ReagentC)避免光照;有效保證6月[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細]
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2024-09-28 00:46
安裝說明
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超微型光譜儀--UM & AM系列
- ★UM1280/UM2280 規(guī)格書☆
UM1280/UM2280 光譜模塊擁有精簡架構(gòu)及優(yōu)化之光譜分析核心,并且內(nèi)建線型CCD傳感器加上8 pin外接電子接口。在光譜量測上,其光學(xué)架構(gòu)能提供提供十分堅固及穩(wěn)定的量測性能。微小化模塊設(shè)計更是提供了各種系統(tǒng)整合之彈性。
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[詳細]
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2024-09-15 03:23
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AM 5200快速水分容重測定儀
- AM 5200快速水分容重測定儀[詳細]
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2024-09-15 17:28
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細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細]
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2016-03-15 00:00
選購指南
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細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
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2015-03-30 00:00
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組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)主要用途組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣離子濃度熒光檢測試劑是一種旨在通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子特異性熒光探針Mag-Fluo--AM,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織(動物、人體等)內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。在細胞內(nèi),鈣離子主要儲存在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器中。其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子儲存在控制細胞活化、調(diào)控信號通路、蛋白分子轉(zhuǎn)錄后修飾,維持細胞內(nèi)環(huán)境鈣離子平衡方面起著重要作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求,以及需要內(nèi)質(zhì)網(wǎng)純化。Mag-Fluo--AM染料是一種鈣離子低親和性的熒光標記染料,特異性地由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)捕獲,可以檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)的游離鈣離子濃度的變化。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長490nm,散發(fā)波長525nm,來定量測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的鈣濃度。[詳細]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過線粒體鈣離子特異性熒光探針Rhod-2-AM,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定細胞線粒體中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種活體細胞(動物、人體等)內(nèi)線粒體鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。在細胞內(nèi),鈣離子主要儲存在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器中。其中線粒體鈣離子在調(diào)節(jié)線粒體代謝、保持線粒體的ATP產(chǎn)量達到細胞需求,維持細胞內(nèi)環(huán)境鈣離子平衡方面起著重要作用。線粒體鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求,以及需要線粒體純化。Rhod-2-AM,羅丹明123(rhodamine123)的衍生產(chǎn)物,一種與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生熒光,Rhod-2-AM,進入細胞受到酯酶解離,同時其正電荷特性,特異性地聚集在線粒體里,由此用于測定線粒體內(nèi)鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm,來定量測定線粒體的鈣濃度。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)10毫升染色液(ReagentB)30微升介導(dǎo)液(ReagentC)600微升飽和液(ReagentD)2毫升陰性液(ReagentE)2毫升裂解液(ReagentF)200微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存染色液(ReagentB)和介導(dǎo)液(ReagentC)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里;有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器細胞培養(yǎng)箱:用于染色孵育黑色96孔板:用于樣品操作的容器熒光酶標儀:用于熒光分析實驗步驟測定準備設(shè)定好熒光酶標儀(22℃):激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm測定開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(ReagentB)室溫下融化,然后分別移出30微升介導(dǎo)液(ReagentC)和1.5微升染色液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管,標記為染色工作液,并放在暗室里備用。然后進行下列操作。二、熒光酶標儀檢測準備1個黑色96孔板,標記為:細胞樣品孔、空白對照孔(不含細胞)、Zda對照孔(含細胞)小心抽去細胞樣品孔的培養(yǎng)液加入100微升清理液(ReagentA)到細胞樣品孔里加入100微升飽和液(ReagentD)到Zda對照孔里加入100微升陰性液(ReagentE)到空白對照孔里分別加入10微升染色工作液到所有孔里輕輕搖動黑色96孔板,混勻放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育30分鐘,避免光照小心抽去細胞樣品孔里的上清液小心加入100微升清理液(ReagentA)到細胞樣品孔里重復(fù)實驗步驟9和10一次放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育30分鐘加入5微升裂解液(ReagentF)到Zda對照孔里放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育15分鐘即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relativefluorescenceunit;RFU)計算樣品線粒體鈣離子濃度【(樣品RFU-空白對照孔RFU)÷(Zda對照孔RFU-樣品RFU)】X570(納摩爾;解離常數(shù))注意事項本產(chǎn)品為20次操作操作時,須戴手套避免使用EDTA等處理樣品孵育反應(yīng)完成后即刻進行熒光測定如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度檢測敏感度可達納摩爾級鈣濃度范圍可以使用熒光分光光度儀檢測本公司提供系列鈣生化檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標準本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
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組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途組織線粒體內(nèi)鈣離子濃度熒光定量檢測試劑是一種旨在通過線粒體鈣離子特異性熒光探針Rhod-2,與鈣離子結(jié)合后,其熒光強度顯著增強,在熒光分光光度儀下觀察相對熒光峰值的變化,來測定組織線粒體中總鈣離子濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織(動物、人體等)內(nèi)線粒體鈣離子的濃度檢測。產(chǎn)品嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定,檢測敏感。技術(shù)背景鈣是人體中的一種重要電介質(zhì)和礦物質(zhì),占1150克。其中99%的鈣以氟磷灰石鈣(calciumfluorophosphateapatite)形式存在于骨組織中。非骨組織鈣成分主要存在于細胞內(nèi)。鈣具有兩種主要形式:一種是非彌散型蛋白結(jié)合鈣,其構(gòu)成約40%至50%的血清中的總鈣含量;另一種為彌散型游離鈣,其進一步分成具有活性的復(fù)合鈣(complexedcalcium)和離子鈣(ionizedcalcium)。鈣對神經(jīng)肌肉興奮性(neuromuscularexcitability)、血液凝固、酶的激活、離子跨膜運輸、釋放神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)、信使傳導(dǎo)等方面起著重要作用。在細胞內(nèi),鈣離子主要儲存在線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器中。其中線粒體鈣離子在調(diào)節(jié)線粒體代謝、保持線粒體的ATP產(chǎn)量達到細胞需求,維持細胞內(nèi)環(huán)境鈣離子平衡方面起著重要作用。線粒體鈣的檢測包括沉淀法、EDTA鰲合滴定法、火焰光度法(flamephotometry)、原子吸收分光光度法等技術(shù),但容易受到鈉、鉀、磷酸鹽、硫酸鹽的干擾,或者受限于儀器的特殊的要求,以及需要線粒體純化。Rhod-2,羅丹明123(rhodamine123)的衍生產(chǎn)物,一種與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生熒光,同時其正電荷特性,特異性地聚集在線粒體里,由此用于測定線粒體內(nèi)鈣離子水平。在熒光分光光度儀下,激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm,來定量測定線粒體的鈣濃度。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)40毫升染色液(ReagentB)30微升介導(dǎo)液(ReagentC)600微升飽和液(ReagentD)2毫升陰性液(ReagentE)2毫升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存染色液(ReagentB)和介導(dǎo)液(ReagentC)在-20℃冰箱里,避免光照;其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于工作液配制的容器細胞培養(yǎng)箱:用于染色孵育黑色96孔板:用于樣品操作的容器熒光酶標儀:用于熒光分析實驗步驟測定準備設(shè)定好熒光酶標儀(22℃):激發(fā)波長550nm,散發(fā)波長590nm準備好純化的線粒體樣品,置于冰槽里融化測定開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的染色液(ReagentB)室溫下融化,然后分別移出30微升介導(dǎo)液(ReagentC)和1.5微升染色液(ReagentB)到新的1.5毫升離心管,標記為染色工作液,并放在暗室里備用。然后進行下列操作。二、熒光酶標儀檢測準備1個黑色96孔板,標記為:線粒體樣品孔、空白對照孔(不含線粒體)、Zda對照孔(不含線粒體)移取100微升純化線粒體樣品(100微克)到線粒體樣品孔里加入100微升飽和液(ReagentD)到Zda對照孔里加入100微升陰性液(ReagentE)到空白對照孔里分別加入10微升染色工作液到所有孔里輕輕搖動黑色96孔板,混勻室溫下(22℃),孵育30分鐘,避免光照放進37℃細胞培養(yǎng)箱里孵育30分鐘,避免光照即刻放進熒光酶標儀測讀:獲得相對熒光單位(relativefluorescenceunit;RFU)計算樣品線粒體鈣離子濃度【(樣品RFU-空白對照孔RFU)÷(Zda對照孔RFU-樣品RFU)】X570(納摩爾;解離常數(shù))=納摩爾/100微克線粒體注意事項本產(chǎn)品為20次操作操作時,須戴手套避免使用EDTA等處理樣品孵育反應(yīng)完成后即刻進行熒光測定如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度檢測敏感度可達納摩爾級鈣濃度范圍可以使用熒光分光光度儀檢測本公司提供系列鈣生化檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標準本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細]
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2018-11-19 10:00
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