本文由 上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商 整理匯編

2018-11-16 10:02 1106閱讀次數(shù)

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• 原脫植基葉綠素（PCHLIDE）檢測方法說明

  原脫植基葉綠素（PCHLIDE）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書（本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!）聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產(chǎn)品。本產(chǎn)品適用于體外定量檢測血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中天然和重組原脫植基葉綠素（PCHLIDE）濃度。使用前請仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分！試劑盒組成：中文名稱英文名稱規(guī)格保存條件ELISA酶標(biāo)板（可拆卸）MicroELISAPlate(Dismountable)8×12/8×6*4℃/-20℃#凍干標(biāo)準(zhǔn)品ReferenceStandard2/1支*4℃/-20℃#標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液ReferenceStandard&SampleDiluent1瓶20mL/12mL*4℃濃縮生物素化抗體ConcentratedBiotinylatedDetectionAb1支120μL/70μL*4℃/-20℃#生物素化抗體稀釋液BiotinylatedDetectionAbDiluent1瓶10mL/6mL*4℃濃縮HRP酶結(jié)合物ConcentratedHRPConjugate1支120μL/70μL*4℃(避光)酶結(jié)合物稀釋液HRPConjugateDiluent1瓶10mL/6mL*4℃濃縮洗滌液（25×）ConcentratedWashBuffer(25×)1瓶30mL/16mL*4℃底物溶液（TMB）SubstrateReagent1瓶10mL/6mL*4℃(避光)反應(yīng)終止液StopSolution1瓶10mL/6mL*4℃封板覆膜PlateSealer5/3張*產(chǎn)品說明書ProductDescription1份質(zhì)檢報告CertificateofAnalysis1份特別說明：*:[96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整）#:一周內(nèi)使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.相關(guān)試劑在分裝時會比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些，請?jiān)谑褂脮r量取而非直接倒出！檢測原理:本試劑盒采用競爭ELISA法。用原脫植基葉綠素（PCHLIDE）抗原包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的原脫植基葉綠素（PCHLIDE）與包被的原脫植基葉綠素（PCHLIDE）競爭生物素標(biāo)記的抗原脫植基葉綠素（PCHLIDE）單抗上的結(jié)合位點(diǎn)，游離的成分被洗去。加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，原脫植基葉綠素（PCHLIDE）濃度與OD450值之間呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中原脫植基葉綠素（PCHLIDE）的濃度。樣品收集:1.血清：全血樣品于室溫放置2小時或4℃過ye后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測具體處理方法可參考：6.樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。8.如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品Z高值，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)）。試驗(yàn)所需自備物品:1.酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL,2-20μL,20-200μL,200-1000μL3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水4.吸水紙檢測前準(zhǔn)備工作:1.請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應(yīng)為室溫）。當(dāng)日使用3.標(biāo)準(zhǔn)品:于10000×g離心1分鐘，加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，旋緊管蓋，靜置10分鐘，上下顛倒數(shù)次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為160pg/mL）。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋）。4.生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以50μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。5.酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μL/孔計(jì)），實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。洗滌方法:1.自動洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。操作步驟:實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕?biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液50μL，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品50μL，立即每孔加入配好的生物素化抗體工作液50μL（在使用前15分鐘內(nèi)配制），注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育45分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。3.每孔加酶結(jié)合物工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μL，加上覆膜，37℃溫育30分鐘。4.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。5.每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實(shí)際顯se情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止）。6.每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。7.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。8.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。注意事項(xiàng)：1.保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。2.酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。暫時不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！3.加樣：加樣或加試劑時，**個孔與Z后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時間**控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。4.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。5.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。6.試劑配制：ConcentratedBiotinylatedDetectionAb及ConcentratedHRPConjugate體積較小，運(yùn)輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋，因此使用前1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液請根據(jù)所需用量配制，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請極ng確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取ConcentratedBiotinylatedDetectionAb時，一次不要小于10μL），以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體工作液、酶結(jié)合物工作液。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存。避免反復(fù)凍融。7.顯色時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免顏色過深影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。8.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。9.混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，**使用微量振蕩器(使用Zdi頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。10.安全：試驗(yàn)中請穿著實(shí)驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。11.不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）12.試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果！結(jié)果判斷:1.以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如有設(shè)置復(fù)孔，則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件，如curveexpert1.3或1.4，在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。3.若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計(jì)算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。靈敏度、檢測范圍、特異性和重復(fù)性:●靈敏度：Z小可測2pg/mL?！駲z測范圍：285pg/mL?！裉禺愋裕嚎蓹z測重組或天然的原脫植基葉綠素（PCHLIDE），且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)?！裰貜?fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。聲明1.限于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平，尚不能對所有原料進(jìn)行全面的鑒定分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。2.Z終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準(zhǔn)備充足的待測樣品。3.只有全部使用試劑盒內(nèi)的試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)說明才會得到**的檢測結(jié)果。4.有效期：6個月。5.本操作說明同樣適用于48T試劑盒。[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊

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• 植物原脫植基葉綠素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  植物原脫植基葉綠素酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T2pg/mL-85pg/mL使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中原脫植基葉綠素含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物原脫植基葉綠素水平。用純化的植物原脫植基葉綠素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入植物原脫植基葉綠素，再與HRP標(biāo)記的原脫植基葉綠素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物原脫植基葉綠素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中植物原脫植基葉綠素濃度。植物原脫植基葉綠素酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。植物原脫植基葉綠素酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。植物原脫植基葉綠素酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1．試劑盒保存：2-8℃。2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 原磷酸化酶說明書試劑盒檢測說明

  原磷酸化酶說明書試劑盒檢測說明本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T100pg/ml-3500pg/ml使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中糖原磷酸化酶(GP)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人糖原磷酸化酶(GP)水平。用純化的人糖原磷酸化酶(GP)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入糖原磷酸化酶(GP)，再與HRP標(biāo)記的糖原磷酸化酶(GP)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖原磷酸化酶(GP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人糖原磷酸化酶(GP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（6400pg/ml）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。3200pg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1600pg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150l的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液800pg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150l的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400pg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150l的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200pg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150l的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150l標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.10.終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2024-09-28 07:03

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