国产三级在线看完整版-内射白嫩大屁股在线播放91-欧美精品国产精品综合-国产精品视频网站一区-一二三四在线观看视频韩国-国产不卡国产不卡国产精品不卡-日本岛国一区二区三区四区-成年人免费在线看片网站-熟女少妇一区二区三区四区

儀器網(wǎng)(yiqi.com)歡迎您!

| 注冊(cè)2 登錄
網(wǎng)站首頁(yè)-資訊-話(huà)題-產(chǎn)品-評(píng)測(cè)-品牌庫(kù)-供應(yīng)商-展會(huì)-招標(biāo)-采購(gòu)-知識(shí)-技術(shù)-社區(qū)-資料-方案-產(chǎn)品庫(kù)-視頻

資料庫(kù)

儀器網(wǎng)> 資料庫(kù)>miRNA定量及均一化cDNA文庫(kù)技術(shù)

miRNA定量及均一化cDNA文庫(kù)技術(shù)

本文由 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

2024-09-29 02:39 1390閱讀次數(shù)

掃    碼    分   享
文檔僅可預(yù)覽首頁(yè)內(nèi)容,請(qǐng)下載后查看全文信息!
立即下載
進(jìn)行一次逆轉(zhuǎn)錄即可實(shí)現(xiàn)所有目標(biāo)miRNA的測(cè)定?沒(méi)錯(cuò),采用加尾法,一次逆轉(zhuǎn)錄就可以得到全部miRNA對(duì)應(yīng)的cDNA。我們知道,真核生物mRNA都是有poly-A尾巴的,這樣Oligo-dT(逆轉(zhuǎn)錄引物)就很容易結(jié)合到mRNA上來(lái)合成cDNA了。miRNA就缺了poly-A尾巴,怎么辦呢?在逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中加入poly-A聚合酶,先給它們加上一串poly-A尾巴,然后用帶有一段通用序列的Oligo-dT和逆轉(zhuǎn)錄酶來(lái)合成cDNA。這樣一來(lái),一次逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)就合成了所有miRNA以及其他snRNA、mRNA對(duì)應(yīng)的cDNA,接下來(lái)想用來(lái)檢測(cè)什么都可以!您只需要提供1μg合格的totalRNA,就可以對(duì)所有感興趣的miRNA進(jìn)行檢測(cè)。這既可避免莖環(huán)法(各目標(biāo)miRNA單獨(dú)逆轉(zhuǎn)錄)帶來(lái)的逆轉(zhuǎn)錄效率、加樣誤差等方面的影響,還可節(jié)約多條特異逆轉(zhuǎn)錄引物和多次逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的花費(fèi),可謂一舉兩得,何樂(lè)而不為?均一化cDNA文庫(kù)基因轉(zhuǎn)錄水平上的巨大差異常常給文庫(kù)篩選和分析帶來(lái)障礙,采用均一化文庫(kù)技術(shù)可有效克服這一問(wèn)題。 均一化cDNA文庫(kù)具有以下4方面的優(yōu)點(diǎn):**,在經(jīng)濟(jì)上具有廣泛的應(yīng)用空間,可以節(jié)約大量試驗(yàn)成本。第二,增加克隆低豐度mRNA的機(jī)會(huì),適用于分析各種發(fā)育階段或各種組織的基因表達(dá)及突變檢測(cè)。第三,與原始豐度的mRNA拷貝數(shù)相對(duì)應(yīng)的cDNA探針與均一化的cDNA文庫(kù)作雜交,可以估計(jì)出大多數(shù)基因的表達(dá)水平及發(fā)現(xiàn)一些組織特異的基因。而以往的文庫(kù)構(gòu)建,忽略了mRNA豐度的影響。第四,可以用于遺傳圖譜的制作和進(jìn)行大規(guī)模的原位雜交,作為優(yōu)化的文庫(kù)系統(tǒng)還可以用于大規(guī)模的測(cè)序?,F(xiàn)在,在構(gòu)建均一化的cDNA文庫(kù)中至少有2種主要的觀點(diǎn):一種是基于復(fù)性動(dòng)力學(xué)的原理,高豐度的cDNA在退火條件下復(fù)性的速度快,而低豐度的cDNA復(fù)性要很長(zhǎng)時(shí)間,從而可以通過(guò)控制復(fù)性時(shí)間來(lái)降低豐度;另一種是基于基因組DNA在拷貝數(shù)上具有相對(duì)均一化的性質(zhì),通過(guò)cDNA與基因組DNA飽和雜交而降低在文庫(kù)中高拷貝存在的cDNA的豐度。**種方法的掌握對(duì)技術(shù)的要求比較高,對(duì)多數(shù)人而言需要多次摸索才能找到Z適條件;而后一種方法易于掌握,但有研究者根據(jù)復(fù)性動(dòng)力學(xué)的原理也提出了其不利因素,即采用基因組DNA飽和雜交的方法會(huì)因?yàn)榈涂截惖谋磉_(dá)基因拷貝數(shù)少而無(wú)法被雜交上。DSN(duplexspecificenzyme)是Z近發(fā)現(xiàn)的一種熱穩(wěn)定核酸酶(Shagin.,2002)。該酶能夠選擇性降解雙鏈DNA和DNARNA雜交體中的DNA,對(duì)單鏈核酸分子幾乎沒(méi)有作用。同目前常用的均一化技術(shù)相比,基于DSN的均一化技術(shù)操作步驟簡(jiǎn)單,所需要的起始材料也比較少,具有較好的應(yīng)用前景。上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司開(kāi)展miRNA定量檢測(cè)服務(wù)已經(jīng)近三年時(shí)間,服務(wù)項(xiàng)目幾百個(gè)。擁有自己的miRNA引物庫(kù)(人類(lèi)),對(duì)其他物種可以自行設(shè)計(jì)引物,檢測(cè)樣品范圍廣,包括:細(xì)胞、組織、血液、血漿、血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,操作規(guī)范,時(shí)間可控,為廣大研究工作者提供了良好的便利。同時(shí),其作為國(guó)內(nèi)cDNA文庫(kù)構(gòu)建的主流服務(wù)供應(yīng)商,在長(zhǎng)期穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)服務(wù)過(guò)程中積累了豐富的經(jīng)驗(yàn),已經(jīng)成功構(gòu)建包括動(dòng)物、植物、細(xì)菌等幾十個(gè)物種的cDNA文庫(kù)。他們基于雙鏈特異性核酸酶(Duplex-SpecificNuclease,DSN)的先進(jìn)cDNA文庫(kù)均一化技術(shù),能減低高豐度表達(dá)基因100倍以上,有效富集低豐度表達(dá)基因,從而降低冗余率。

參與評(píng)論

全部評(píng)論(0條)

更多資料

該會(huì)員其他資料
大鼠(Rat)超氧化物歧化酶(SOD) ELISA 檢測(cè)試劑盒Elisa試劑盒說(shuō)明書(shū)
miRNA定量及均一化cDNA文庫(kù)技術(shù)
多聚螯合物酶法--通用免疫酶復(fù)合物 (UIP)法
苯乙醇胺A被農(nóng)業(yè)部列為飼料中違禁添加物
生物技術(shù)將成為解決人類(lèi)重大問(wèn)題的突破點(diǎn)
使用抗Argonaute抗體進(jìn)行microRNA研究的方法介紹
牛甘膽酸(CG)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
ELISA試劑盒 人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒
人內(nèi)皮脂肪酶(EL)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
兔(Rabbit)腫瘤壞死因子a(TNF-a)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)

在線(xiàn)留言

換一張?
取消