本文由 艾本德中國 Eppendorf China 整理匯編

2023-09-15 15:01 1015閱讀次數(shù)

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• Eppendorf 工作站NGS文庫構建方案

  高質量的下一代測序 (NGS) 文庫的制備是一個復雜的過程，需要投入大量時間、經費和專業(yè)知識。珍貴樣品通常要處理多日（取決于所用試劑盒），直至準備好文庫進行測序。完整的方法由多個部分組成，每個都有特有的精度要求和數(shù)百個移液步驟。由于移液精度取決于用戶，因此導致了不穩(wěn)定性，這對重復性產生了負面影響。 Eppendorf epMotion? 自動移液工作站可以用極少的用戶干預和設定時間來簡化這個費力的過程，即使是對于樣本數(shù)量較少的操作也可使用。為了盡可能減少編程并讓您快速啟動和運行，Eppendorf 提供了經過預先優(yōu)化和試劑廠家認可的 NGS 試劑盒方法，這將獲得可重復的優(yōu)質的二代測序文庫。[詳細]

  2023-09-15 15:01

  應用文章

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• NGS Made Easy_讓 epMotion? 自動化液體工作站助您完成 NGS 文庫制備的優(yōu)化

  二代測序樣本的制備是一個費時費力的工作，只有經驗豐富的人員、精確的操作與準確的移液方能獲得高質量的NGS 文庫。借助 Eppendorf epMotion? 自動化液體工作站，這些繁瑣的移液操作被轉化為可自動操作、即時運行的程序，這極大地減少了人工的介入與編程時間，即使少量樣本也無須擔心。為了減少編程時間，加快實驗方法的建立與運行，Eppendorf 提供了預先優(yōu)化并經原廠認證的相應 NGS 建庫試劑盒方案，因此可重復地制備高質量的NGS 文庫。測序的結果顯示，自動化的產物與手工操作相一致，甚至更勝一籌。Eppendorf epMotion 工作站是您可以信賴的合作伙伴，幫您實現(xiàn) NGS 文庫制備的自動化，避免人工加液錯誤的風險，提供高重復結果并增加總體得率。[詳細]

  2024-09-18 18:06

  產品樣冊

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• NGS樣品制備工作站產品樣冊

  [詳細]

  2024-09-16 01:58

  產品樣冊

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• 基因組DNA文庫構建必備實驗技巧

  基因組DNA文庫構建必備實驗技巧基因組DNA文庫用途十分廣泛,如用于人類及動植物基因組學研究,基因表達調控研究,分析、分離特定的基因片段等.通常情況下,基因組文庫構建的基本流程可以歸為四大步驟：分離基因組DNA、對基因組DNA作相關的處理、將基因組DNA片段連接入載體、將重組載體轉入宿主細胞.一、分離基因組DNA（gDNA）毫無疑問,高質量的基因組DNA對于基因組文庫構建是至關重要的.需要通過經驗來選擇合適的基因組DNA分離方法,在分離過程中保證DNA不被過度剪切或降解,同時也要盡量保證DNA的純度.二、處理基因組DNA根據(jù)研究目的,研究者需要選擇合適的載體.不同的載體對基因組DNA的長度有不同的要求,必須選擇合適長度的基因組DNA來構建基因組文庫.比如,對于黏粒載體,合適的片段長度大約為40kb；對于BAC載體,合適的片段長度平均為120kb-300kb.構建黏?；蚪MDNA文庫,需要將基因組DNA用注射器抽打來隨機剪切DNA；接著用末端修復酶修復DNA,可以提高DNA連接入載體的效率；然后通過脈沖場電泳或者普通電泳來找到40kb左右的DNA片段,隨后使用膠回收試劑盒回收DNA.構建BAC基因組DNA文庫,需要將基因組DNA用限制性內切酶（常用EcoRI、BamHI或者HindIII）來消化基因組DNA,然后通過脈沖場電泳找到合適長度的DNA片段（比如100kb-150kb）,隨后透析回收DNA.需要注意：（1）電泳時,要選用合適的DNALadder,以保證電泳后可以準確定位所需分子量的DNA.（2）電泳以后,應盡量縮短用紫外光照射目標DNA的時間,否則會顯著降低克隆效率.（3）回收DNA的時候,應該要避免過度離心,以防止DNA被剪切,降低文庫質量.三、載體的選擇目前,常用的基因組文庫載體有黏粒載體、P1噬菌體載體、PAC載體（P1人工染色體）、BAC載體（細菌人工染色體）和YAC載體（酵母人工染色體）.選用何種載體可以參考如下幾個因素：1、目標區(qū)域的大?。喝绻蚪M的目標區(qū)域很?。ㄐ∮?0kb）,那么可以選擇黏粒載體甚至λ噬菌體載體.利用現(xiàn)有的商品化的黏粒載體、GX率的包裝混合物和合適的大腸桿菌菌株,可以方便的構建黏粒載體文庫.如果基因組的目標區(qū)域比較大,那么P1、PAC或者BAC就比較合適了.P1操作比較困難,PAC相對簡便.BAC載體也是很好的選擇,可以利用現(xiàn)有的成熟產品來構建BAC文庫,比如商業(yè)化的一系列BAC載體及配套試劑盒.如果目標區(qū)域非常大（大于250kb）,那么YAC載體就是了.不過,應用YAC載體來構建基因組文庫,操作非常繁瑣困難.表1各種載體的比較載體容量（kb）宿主導入細胞方式黏粒30-45大腸桿菌轉導P170-100大腸桿菌轉導PAC130-150大腸桿菌電轉BAC120-300大腸桿菌電轉YAC250-400酵母轉化2、篩選文庫的難易程度：黏粒載體一般使用傳統(tǒng)的濾膜影印雜交來篩選,但是這種方法對于構建區(qū)域圖譜及疊連群來說既費力又浪費.大容量載體文庫,如P1、PAC、BAC、YAC,以二維陣列保存,既可以用傳統(tǒng)的單拷貝的探針雜交法篩選,又可以用PCR進行多克隆的群體篩選.而且,使用高容量載體構建文庫,可以減少染色體步查的步驟.3、載體拷貝數(shù)的考慮：當把大片段DNA片段克隆到高拷貝的載體時,克隆DNA會發(fā)生重組,從而影響克隆序列的保真性和穩(wěn)定性；而單拷貝載體的低產量DNA是高通量分析的瓶頸.對這一矛盾的解決方案可采用EPICENTRE公司的CopyControlTM克隆系統(tǒng),CopyControlTM技術整合了單拷貝載體與多拷貝載體的優(yōu)點.單拷貝載體能提高插入片段的穩(wěn)定性,而且能在誘導劑的作用下,即時擴增出高拷貝數(shù)的克隆而獲得高產量的DNA.四、將基因組DNA片段連接入載體使用連接酶把上述大小合適的DNA片段連接入載體.許多商業(yè)化載體已經經過預處理,可以直接使用,無需內切酶消化及脫磷酸化處理.選用連接快、效率高的連接酶,連接反應體系以100μl為宜.注意：BAC載體連接完以后,需要將連接產物做脫鹽處理,除去連接反應緩沖液里的鹽分.五、將重組載體轉入宿主細胞如果構建黏粒文庫,需要用包裝蛋白來包裝上述的連接反應產物,測定包裝好的黏粒克隆的滴度,然后轉染.挑出重組子,鑒定插入片段的大小.如果文庫的大小和質量都令人滿意的話,就可以鋪板進行文庫篩選,或者擴增、保存文庫.如果構建BAC文庫,應選擇電轉法,將上述連接產物轉入受體菌,涂板長出克隆.獲得克隆后需要對BAC克隆的大小進行評估,確定文庫大小是否能夠滿足要求.如果文庫大小合適,就可以進行后續(xù)操作了.六、文庫克隆數(shù)的確定基因組DNA文庫需要包含足夠多的克隆,來保證文庫的代表性.一般使用如下的經驗公式來確定：N=ln（1-P）/ln（1-f）P是希望得到的覆蓋率,f是插入片段大小與基因組DNA大小的比值,N是所需的克隆數(shù).舉例來說,用BAC載體構建人類基因組文庫,人類基因組大小為3x109bp,插入片段大小為100kb,希望覆蓋率99%,那么所需要的BAC克隆數(shù)為N=ln（1-0.99）/ln（1-[106bp/3x109bp]）=138,298技術支持資料：材料緩沖液和溶液-堿裂解液I,4°C50mM葡萄糖25mMTris-Cl（pH8.0）10mMEDTA（pH8.0）配制堿裂解液I約100ml,滅菌,保存在四度.-堿裂解液II,新鮮配置,室溫保存0.2NNaOH（從10N的NaOH新鮮制備）1%（w/v）SDS堿裂解液II應該新鮮配制,室溫保存.-堿裂解液III,4°C5M醋酸鉀,60ml冰醋酸,11.5mlSDW,28.5ml-酒精-70%酒精-異丙醇-酚：氯仿（1：1,v/v）-醋酸鈉（3M,pH5.2）-STE,4°C10mMTris-Cl（pH8.0）0.1MNaCl1mMEDTA（pH8.0）-TE（pH8.0）10mMTris-Cl（pH8.0）10mMEDTA（pH8.0）載體與菌株BAC轉化的大腸桿菌培養(yǎng)基和抗生素含12.5μg/ml氯霉素的LB平板和液體培養(yǎng)基酶和緩沖液溶菌酶RNaseA,不含DNase限制性內切酶和相應緩沖液核苷酸/寡核苷酸用于脈沖場凝膠電泳（pulsed-fieldgelelectrophoresis）的DNA標準參照物凝膠/點樣緩沖液脈沖場凝膠電泳（Pulsed-fieldgels,或者0.5%瓊脂糖凝膠）離心機/轉頭/離心管其他37攝氏度搖床1.BACDNA大量提取方案（參考文獻：Molecularcloning:ALaboratoryManualThirdEdition）此方案適合從500ml的菌液中提取BACDNA,一般可以產生20-25μg純化的DNA.方法1.將50μlBAC轉化菌的過夜培養(yǎng)物接種到500ml含12.5μg/ml氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中,37℃震蕩（280rpm）培養(yǎng)12到16小時.2.2500g,4℃,離心15min,收集菌體.3.用100ml冰預冷的STE重新懸浮細菌沉淀.按步驟2方法離心收集細菌.4.用24ml含RNase（100μg/ml）的堿性裂解液I溶解細菌.加溶菌酶至終濃度為1mg/ml.5.加入24ml新鮮配置的堿性裂解液II.蓋緊離心瓶蓋,輕輕翻轉瓶子數(shù)次,使內容物完全混勻,冰裕5min.6.加入24ml冰預冷的堿性裂解液III,蓋緊瓶蓋,輕輕翻轉瓶子數(shù)次,使內容物完全混勻,置冰上5min.7.15000g,4℃,離心10min,將上清轉移到另一離心瓶中,棄沉淀.8.加等體積的酚：氯仿.輕輕翻轉離心瓶數(shù)次,混勻.3000g,室溫離心15min.9.將水相移至另一離心瓶中,加入等體積的異丙醇,翻轉離心瓶數(shù)次,混勻.10.15,000g,室溫離心15分鐘,回收核酸沉淀.11.棄上清,用20ml70%乙醇漂洗沉淀.12.棄乙醇,風干使乙醇揮發(fā)殆盡.13.小心將BACDNA沉淀溶于0.2mlTE（pH8.0）中.2.BACDNA的小量提?。▍⒖嘉墨I：Molecularcloning:ALaboratoryManualThirdEdition）此方案適合從5ml菌液中提取BACDNA,一般可以產生0.1-0.4μg的BACDNA.方法：1.挑取單菌落接種至5ml含12.5μg/ml氯霉素的LB培養(yǎng)基中,37℃劇烈震搖過夜.2.2000g,4℃,離心5min,收集菌體.3.在每個離心管中加5ml預冷的STE,用移液器吹懸細菌沉淀.按步驟2離心收集細菌.4.將菌體重懸于200ul冰冷的堿性裂解液I中.將菌體轉移至預冷的微量離心管中,置于冰上.5.向管中加入400μl新鮮配置的堿性裂解液II.輕輕翻轉數(shù)次,將離心管置于冰上.6.向管中加入300μl冰冷的堿性裂解液III,輕輕翻轉數(shù)次.將離心管置于冰上5min.7.在微量離心機上以Zda速度4℃離心5min,除去細胞碎片沉淀.將上清移入一新的微量離心管中.室溫下加入900μl異丙醇,輕輕翻轉數(shù)次離心管,混勻.8.立即在微量離心機上室溫下Zda速離心5min,使核酸沉淀.棄去上清,用1ml70%乙醇小心漂洗.室溫下離心2min,吸去乙醇.室溫干燥沉淀5-10min后,將沉淀溶于50μlTE（pH8.0）中.[詳細]

  2018-11-16 10:02

  產品樣冊

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• 新一代測序儀（NGS）在文庫質量控制（QC）中的應用

  新一代測序儀（NGS）在文庫質量控制（QC）中的應用[詳細]

  2024-09-28 01:25

  安裝說明

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• Eppendorf 病原微生物檢測方案

  病原微生物是指可以侵犯人體、引起感染甚至傳染病的微生物，或稱病原體。病原體中，以細菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒體、寄生蟲（原蟲、蠕蟲、醫(yī)學昆蟲）、真菌、細菌、螺旋體、支原體、立克次體、衣原體、病毒。 病原微生物檢測除了傳統(tǒng)的培養(yǎng)、酶免、血清學等方法以外，目前主要涉及到定量 PCR 和二代測序（宏基因組測序，mNGS），檢測機構主要為疾控、醫(yī)院和第三方醫(yī)學檢驗所。[詳細]

  2024-09-11 18:51

  產品樣冊

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• 動物細胞培養(yǎng)實驗室構建方案

  動物細胞培養(yǎng)實驗室構建方案[詳細]

  2024-09-28 01:01

  標準

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• VERSA Gene 1100高通量測序文庫制備工作站產品樣冊

  VERSA Gene 1100高通量測序文庫制備工作站產品樣冊[詳細]

  2016-10-19 17:06

  期刊論文

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• Eppendorf 細胞與基因治療應用方案

  Eppendorf 聚焦細胞治療、基因治療、外泌體三大技術平臺，構建覆蓋基因改造、細胞功能研究、病毒載體研究、外泌體純化以及檢測方法建立的研究實驗室。整合領先設備與國產供應鏈，滿足從基礎研究到臨床前研[詳細]

  2026-03-20 15:08

  產品樣冊

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• Eppendorf 水稻及其制品轉基因成分檢測方案

  Eppendorf在轉基因檢測領域有著豐富的經驗，針對水稻及其制品轉基因成分的檢測，提供從DNA提取、DNA質量評估到定性PCR檢測的整套解決方案。[詳細]

  2016-05-03 15:02

  應用文章

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• 質粒構建

  質粒構建[詳細]

  2024-09-20 13:38

  標準

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• 電化學工作站/化學工作站/工作站

  電化學工作站/化學工作站/工作站型號：WHS-CS350WHS-CS350電化學工作站（電化學測試系統(tǒng)）是集電化學分析方法和電化學測試方法于一體的電化學通用儀器，能完成循環(huán)伏安、階梯伏安、脈沖伏安、溶出伏安等電化學分析方法；還可以完成恒電流（位）極化、動電位（流）掃描、任意恒電流（位）方波，多恒電流（位）階躍、電化學噪聲（電偶電流）、電化學阻抗（EIS）等電化學測試等功能，還可以進行線性掃描循環(huán)伏安（CV）、階梯波循環(huán)伏安（SCV）、方波循環(huán)伏安（SWV）、差分脈沖伏安（DPV）和常規(guī)脈沖伏安（NPV）以及差分常規(guī)脈沖伏安（DNPV）等電分析方法。測試系統(tǒng)控制與數(shù)據(jù)處理軟件是基于Windows98/2000/XP操作系統(tǒng)的，用戶界面遵守Windows軟件的設計規(guī)則，容易安裝和使用。系統(tǒng)軟件為方便使用者提供了強大的功能，包括文件管理、全面的實驗控制、靈活的圖形顯示、方便的圖形放大和還原、多種數(shù)據(jù)處理功能、數(shù)據(jù)的存貯與打印等。系統(tǒng)軟件具有良好的用戶界面，命令行參數(shù)所用的電化學理論和方法都盡可能采用Z為通用的電化學方面的術語，全中文菜單和界面，更方便地為教學和科研服務。WHS-CS350可用于較大電流和較高槽壓的電化學測量和應用，例如電池、電分析、腐蝕、電解、電鍍等。儀器由數(shù)字信號發(fā)生器（DDS）和直接數(shù)據(jù)存儲器（DMA）和恒電位儀/恒電流儀組成，電流/電位同步數(shù)據(jù)采集。儀器的電流輸出范圍為±2A，槽壓為±21V。電壓控制范圍：±10V；電流控制范圍：±2.0A；電流測量下限低于10pA。WHS-CS350電化學工作站采用恒電流階躍直接測量高阻體系介質電阻（如混凝土或涂層等介質電阻），可對溶液電阻進行實時或軟件補償；可對測試曲線進行數(shù)字平滑，能對極化曲線進行電化學參數(shù)解析，可計算極化電阻Rp值，Tafel斜率ba，bc值，交換電流密度icorr，腐蝕速率,還可計算統(tǒng)計噪聲電阻Rn，并可將圖形以矢量方式拷貝到MicrosoftWord97/2000文檔中。CorrTestTM電化學工作站采用USB或RS232串行口與計算機通訊，設備安裝簡單，即插即用。外形尺寸：36.5cm（寬）30.5cm（深）16cm（高）儀器重量：6.5KgWHS-CS350電化學工作站技術指標1、硬件參數(shù)指標恒電位儀電位控制范圍：±10V電流控制范圍：±2.0A電位控制精度：0.1%×滿量程讀數(shù)±1mV電流控制精度：0.1%×滿量程讀數(shù)電位分辨率：10uV（>100Hz）,2uV（<10Hz）電流分辨率：10pA電位上升時間：<1uS（<10mA）,<10uS（<2A）輔助數(shù)據(jù)采集24位@10KHz參比電極輸入阻抗：1012歐姆||10F電流量程：2A～200nA,共8檔槽壓：21VCV和LSV掃描速度：0.01～20000mV/sCA和CC脈沖寬度：0.0001～1000s電位掃描時電位增量：0.1mV@1V/mSSWV頻率：1～100KHzDPV和NPV脈沖寬度：0.0001～1000sAD數(shù)據(jù)采集：16位@1MHz,24bit@100HzCV的Z小電位增量：0.01mV電位和電流測量低通濾波器電流與電位量程：自動和手動設置2、電化學阻抗測量指標信號發(fā)生器頻率響應：10uHz~100kHz信號幅值：0mV~10V直流偏差：-10~+10V輸出阻抗：50歐姆波形：正弦波，三角波，方波正弦波失真：<1%掃描方式：對數(shù)/線性，增加/下降Zda負載電容：1nF；Zda負載電感：10uH信號分析器積分時間：Z小值：10mS或者一個循環(huán)的Z長時間Zda值：106個循環(huán)或者105S測量時間延遲：0~105秒直流偏置補償電位自動補償范圍：-10V~+10V電流補償范圍：-1A~+1A帶寬調整（Bandwidth）：自動或手動設置，共8級可調WHS-CS350測量與控制軟件主要功能開路電位-時間曲線（OCPT）恒電位法（計時電流法,CA）恒電流法（計時電位法,CP）多電位階躍（VSTEP）多電流階躍（ISTEP）動電位掃描（極化曲線）線性極化（LPR）鈍化回掃曲線（按擊穿電流回掃）動電流掃描任意恒電位方波任意恒電流方波恒電流儀循環(huán)伏安法（CV）階梯伏安法（SCV）差分脈沖伏安法（DPV）常規(guī)脈沖伏安法（NPV）方波伏安法（SWV）交流伏安法（ACV）溶出伏安法常規(guī)差分脈沖伏安法（DNPV）電化學阻抗電化學噪聲測量電偶腐蝕測量氫滲透監(jiān)測腐蝕速率計算應用領域1）研究電化學機理；物質的定性定量分析；2）常規(guī)電化學測試，包括電合成、電鍍和電池性能評價。3）功能材料和能源材料的機理和制備研究；4）緩蝕劑、水質穩(wěn)定劑、涂層以及陰極保護效率快速評價以及氫滲測試等；5）金屬材料在導電性介質（包括水/混凝土等環(huán)境）中的腐蝕電化學測試。系統(tǒng)配置每套工作站包括：1）儀器主機一臺；2）白金電極、參比電極、工作電極及專用電解池各一支（套）；3）模擬電解池一個；4）USB數(shù)據(jù)線一條；5）噪聲測量專用電纜線一條；6）WHS-CS350測試與分析軟件CD一張。網(wǎng)址；www.51658042.com北京恒奧德儀器儀表有限公司聯(lián)系方式：010-51658042/51760331/51717696手機：15010245973/15313176001/15313175998聯(lián)系人:李經理地址:北京市海淀區(qū)阜城路42號院中裕商務花園6C-211傳真：010-51717696郵箱：hadgs2009@163.com網(wǎng)址：http://www.51658042.com。http://www.had200911.cn:http://had200911.b2b.hc360.com。54pc.com/netshow/20100104193745/QQ:1968156761116912188023626135142661074941[詳細]

  2018-09-24 10:02

  產品樣冊

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• PCR 工作站

  PCR 工作站[詳細]

  2014-09-16 00:00

  其它

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• GaossUnion工作站

  GaossUnion工作站[詳細]

  2024-09-29 07:59

  操作手冊

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• Freedom EVO自動化工作站方案加速德國Kiel大學植物育種

  Freedom EVO自動化工作站方案加速德國Kiel大學植物育種[詳細]

  2024-09-29 20:52

  操作手冊

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• eppendorf 離心機5804R5810R 操作手冊

  eppendorf離心機58045804R58105810R操作手冊[詳細]

  2018-11-11 10:00

  產品樣冊

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• Eppendorf 離心機產品分冊

  Eppendorf 離心機產品分冊 2024版[詳細]

  2022-07-06 15:06

  產品樣冊

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• Eppendorf 搖床產品分冊

  Eppendorf 搖床產品分冊 2023版[詳細]

  2024-09-21 19:01

  產品樣冊

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• Eppendorf 離心管產品分冊

  Eppendorf 離心管產品分冊 2023版[詳細]

  2024-09-16 02:29

  產品樣冊

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• Eppendorf 移液器分冊2023

  作為微升體系的發(fā)明者，Eppendorf 在精準手動和自動化移取、分裝，以及轉移小體積液體上擁有 60 年的經驗。Eppendorf 的適配性提供了多種選擇，以滿足不同的實驗室要求和應用需求。[詳細]

  2021-06-24 13:56

  產品樣冊

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