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細(xì)胞色素P450酶系總活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
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本文由 上海科學(xué)儀器有限公司 整理匯編
2018-11-18 10:00 987閱讀次數(shù)
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主要用途細(xì)胞色素P450酶系(CYP-ECOD)總活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)中乙氧基香豆素轉(zhuǎn)化為羥基香豆素后熒光峰值的變化,即采用熒光法來測定樣品中酶系活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素P450酶系的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱。其分成五十多個亞酶:CYP1至CYP51。作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation)。乙氧基香豆素脫乙基酶(7-ethoxycoumarinO-deethylase;ECOD)的活性是細(xì)胞色素P450酶系的診斷標(biāo)記,其基于ECOD廣泛性催化細(xì)胞色素P450亞酶的活性。乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)在乙氧基香豆素脫乙基酶的催化下,轉(zhuǎn)化為羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)后熒光峰值的變化(激發(fā)波長368nm,散發(fā)波長456nm),來定量測定細(xì)胞色素P450酶系的活性。乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)為:
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細(xì)胞色素P450酶系總活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 主要用途細(xì)胞色素P450酶系(CYP-ECOD)總活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)中乙氧基香豆素轉(zhuǎn)化為羥基香豆素后熒光峰值的變化,即采用熒光法來測定樣品中酶系活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素P450酶系的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱。其分成五十多個亞酶:CYP1至CYP51。作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation)。乙氧基香豆素脫乙基酶(7-ethoxycoumarinO-deethylase;ECOD)的活性是細(xì)胞色素P450酶系的診斷標(biāo)記,其基于ECOD廣泛性催化細(xì)胞色素P450亞酶的活性。乙氧基香豆素(7-ethoxycoumarin)在乙氧基香豆素脫乙基酶的催化下,轉(zhuǎn)化為羥基香豆素(7-hydroxycoumarin)后熒光峰值的變化(激發(fā)波長368nm,散發(fā)波長456nm),來定量測定細(xì)胞色素P450酶系的活性。乙氧基香豆素脫乙基酶反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450酶系總活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞色素P450酶系總活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-07 00:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑盒說明書
- 細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過甲氧基異酚唑脫甲基酶反應(yīng)系統(tǒng)中甲氧基異酚唑轉(zhuǎn)化為羥基異吩唑酮后熒光峰值的變化,即采用熒光法來測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素P450亞酶1A2的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞色素P450亞酶1A2,簡稱為CYP1A2,是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能氧化酶系統(tǒng)的成員之一,也是芳香族碳?xì)浠衔锛恿u基酶(arylhydrocarbonhydrorylase;AHH)的成員之一。在人體肝臟里占P450酶系15%。與CYP1A1高度同源,特別是在外顯子2、4、5和6。CYP1A2由多個多態(tài)性變體,Z常見的是:1A和1F,與kafeiyin代謝和遲發(fā)性皮膚卟啉癥(porphyriacutaneatarda)相關(guān)。CYP1A2的作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation),以及脂類合成包括膽固醇和類固醇。芳香族碳?xì)浠衔镎T導(dǎo)CYP1A2的表達(dá)。甲氧基異酚唑脫甲基酶(7-methoxyresorufin-O-demethylase;MROD)的活性是細(xì)胞色素P450亞酶1A2的診斷標(biāo)記,其基于MROD選擇性催化細(xì)胞色素P450亞酶1A2的活性。甲氧基異酚唑(7-methoxyresorufin)在甲氧基異酚唑脫甲基酶的催化下,轉(zhuǎn)化為羥基異吩唑酮(resorufin)后熒光峰值的變化(激發(fā)波長530nm,散發(fā)波長590nm),來定量測定細(xì)胞色素P450亞酶1A2的活性。甲氧基異酚唑脫甲基酶反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)毫升反應(yīng)液(ReagentB)毫升底物液(ReagentC)微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,底物液(ReagentC)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)避免光照,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)樣品操作的容器恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)比色皿或酶標(biāo)板:用于反應(yīng)和比色的容器熒光分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于熒光分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。一、測定準(zhǔn)備1.準(zhǔn)備好待測樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液或微粒體樣品等),置于冰槽里2.設(shè)定好熒光分光光度儀(溫度為37℃):激發(fā)波長530nm,散發(fā)波長590nm,并置零3.準(zhǔn)備好5個1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號管4.加入xx微升緩沖液(ReagentA)到1號管5.分別加入xx微升緩沖液(ReagentA)到2至5號管6.移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到1號管,混勻7.小心移取xx微升1號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到2號管,混勻8.小心移取xx微升2號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到3號管,混勻9.小心移取xx微升3號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到4號管,混勻10.將1至5號管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號緩沖液(ReagentA)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度1微升微升納摩爾/升2微升微升1號管納摩爾/升3微升微升2號管納摩爾/升4微升微升3號管納摩爾/升5微升00二、標(biāo)準(zhǔn)曲線測定1.移取xx微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿2.加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)3.加入xx微升底物液(ReagentC)4.加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液5.上下傾倒數(shù)次,混勻6.在37℃溫度下孵育10分鐘7.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測獲得相對熒光讀數(shù)8.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7四次9.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為相對熒光單位;橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)三、樣品測定1.移取xx微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿2.加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)3.加入xx微升底物液(ReagentC)4.加入xx微升待測樣品(20微克微粒體蛋白或100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)(注意:樣品須清澈)5.上下傾倒數(shù)次,混勻6.在37℃溫度下孵育10分鐘7.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測:獲得相關(guān)熒光讀數(shù)8.(選擇步驟)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7,測讀新的樣品9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度四、計(jì)算樣品活性[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷10(分鐘)]=皮摩爾/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=皮摩爾/毫克/分鐘五、酶標(biāo)板測定1.在96孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品2.分別移取xx微升緩沖液(ReagentA)到相應(yīng)孔中3.分別加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)4.分別加入xx微升底物液(ReagentC)5.分別加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液或待測樣品(20微克微粒體蛋白或100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)(注意:樣品須清澈)6.輕輕搖動96孔酶標(biāo)板7.在37℃溫度下孵育10分鐘8.即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測:獲得相對熒光讀數(shù)9.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為相對熒光單位;橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)10.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度11.活性計(jì)算:[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷xx(反應(yīng)時間;分鐘)]=皮摩爾/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=皮摩爾/毫克/分鐘注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為25次(比色皿)或85次(酶標(biāo)板)操作,包括標(biāo)準(zhǔn)液2.操作時,須戴手套3.系統(tǒng)操作過程中,標(biāo)準(zhǔn)液測定只需1次4.樣品須澄清,至關(guān)重要(本公司提供細(xì)胞可溶性總蛋白質(zhì)制備試劑盒30002.1)5.孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行熒光測定6.如果酶活性過低,可以增加反應(yīng)時間至30分鐘7.熒光測定后,比色皿須清洗徹底8.建議待測樣本為微粒體,其蛋白濃度為20微克/100微升;待測樣本為細(xì)胞裂解懸液,其蛋白濃度為100至200微克/100微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)9.如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度10.通常人體細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性濃度為:200-600皮摩爾/分鐘/毫克蛋白11.細(xì)胞色素P450亞酶CYP1A2單位活性定義為:在37℃,pH7.5條件下,每分鐘內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化1納摩爾甲氧基異酚唑至羥基異吩唑酮所需的酶量作為一個活性單位12.本公司提供系列毒理學(xué)檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450亞酶1A1活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞色素P450亞酶1A1活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2015-05-04 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過甲氧基異酚唑脫甲基酶反應(yīng)系統(tǒng)中甲氧基異酚唑轉(zhuǎn)化為羥基異吩唑酮后熒光峰值的變化,即采用熒光法來測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素P450亞酶1A2的總活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞色素P450亞酶1A2,簡稱為CYP1A2,是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能氧化酶系統(tǒng)的成員之一,也是芳香族碳?xì)浠衔锛恿u基酶(arylhydrocarbonhydrorylase;AHH)的成員之一。在人體肝臟里占P450酶系15%。與CYP1A1高度同源,特別是在外顯子2、4、5和6。CYP1A2由多個多態(tài)性變體,Z常見的是:1A和1F,與kafeiyin代謝和遲發(fā)性皮膚卟啉癥(porphyriacutaneatarda)相關(guān)。CYP1A2的作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation),以及脂類合成包括膽固醇和類固醇。芳香族碳?xì)浠衔镎T導(dǎo)CYP1A2的表達(dá)。甲氧基異酚唑脫甲基酶(7-methoxyresorufin-O-demethylase;MROD)的活性是細(xì)胞色素P450亞酶1A2的診斷標(biāo)記,其基于MROD選擇性催化細(xì)胞色素P450亞酶1A2的活性。甲氧基異酚唑(7-methoxyresorufin)在甲氧基異酚唑脫甲基酶的催化下,轉(zhuǎn)化為羥基異吩唑酮(resorufin)后熒光峰值的變化(激發(fā)波長530nm,散發(fā)波長590nm),來定量測定細(xì)胞色素P450亞酶1A2的活性。甲氧基異酚唑脫甲基酶反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容緩沖液(ReagentA)毫升反應(yīng)液(ReagentB)毫升底物液(ReagentC)微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存在-20℃冰箱里,底物液(ReagentC)和標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)避免光照,有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)樣品操作的容器恒溫水槽:用于孵育反應(yīng)比色皿或酶標(biāo)板:用于反應(yīng)和比色的容器熒光分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于熒光分析實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。一、測定準(zhǔn)備1.準(zhǔn)備好待測樣品(例如細(xì)胞裂解萃取液或微粒體樣品等),置于冰槽里2.設(shè)定好熒光分光光度儀(溫度為37℃):激發(fā)波長530nm,散發(fā)波長590nm,并置零3.準(zhǔn)備好5個1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號管4.加入xx微升緩沖液(ReagentA)到1號管5.分別加入xx微升緩沖液(ReagentA)到2至5號管6.移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到1號管,混勻7.小心移取xx微升1號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到2號管,混勻8.小心移取xx微升2號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到3號管,混勻9.小心移取xx微升3號管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到4號管,混勻10.將1至5號管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號緩沖液(ReagentA)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度1微升微升納摩爾/升2微升微升1號管納摩爾/升3微升微升2號管納摩爾/升4微升微升3號管納摩爾/升5微升00二、標(biāo)準(zhǔn)曲線測定1.移取xx微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿2.加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)3.加入xx微升底物液(ReagentC)4.加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液5.上下傾倒數(shù)次,混勻6.在37℃溫度下孵育10分鐘7.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測獲得相對熒光讀數(shù)8.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7四次9.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為相對熒光單位;橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)三、樣品測定1.移取xx微升緩沖液(ReagentA)到新的比色皿2.加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)3.加入xx微升底物液(ReagentC)4.加入xx微升待測樣品(20微克微粒體蛋白或100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)(注意:樣品須清澈)5.上下傾倒數(shù)次,混勻6.在37℃溫度下孵育10分鐘7.即刻放進(jìn)熒光分光光度儀檢測:獲得相關(guān)熒光讀數(shù)8.(選擇步驟)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至7,測讀新的樣品9.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度四、計(jì)算樣品活性[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷10(分鐘)]=皮摩爾/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=皮摩爾/毫克/分鐘五、酶標(biāo)板測定1.在96孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:標(biāo)準(zhǔn)樣品和待測樣品2.分別移取xx微升緩沖液(ReagentA)到相應(yīng)孔中3.分別加入xx微升反應(yīng)液(ReagentB)4.分別加入xx微升底物液(ReagentC)5.分別加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液或待測樣品(20微克微粒體蛋白或100微克細(xì)胞裂解萃取液蛋白)(注意:樣品須清澈)6.輕輕搖動96孔酶標(biāo)板7.在37℃溫度下孵育10分鐘8.即刻放進(jìn)熒光酶標(biāo)儀檢測:獲得相對熒光讀數(shù)9.構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為相對熒光單位;橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)10.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度11.活性計(jì)算:[根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)羥基異吩唑酮濃度(納摩爾/升)X樣品稀釋倍數(shù)]÷xx(反應(yīng)時間;分鐘)]=皮摩爾/毫升/分鐘÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=皮摩爾/毫克/分鐘注意事項(xiàng)1.本產(chǎn)品為25次(比色皿)或85次(酶標(biāo)板)操作,包括標(biāo)準(zhǔn)液2.操作時,須戴手套3.系統(tǒng)操作過程中,標(biāo)準(zhǔn)液測定只需1次4.樣品須澄清,至關(guān)重要(本公司提供細(xì)胞可溶性總蛋白質(zhì)制備試劑盒30002.1)5.孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行熒光測定6.如果酶活性過低,可以增加反應(yīng)時間至30分鐘7.熒光測定后,比色皿須清洗徹底8.建議待測樣本為微粒體,其蛋白濃度為20微克/100微升;待測樣本為細(xì)胞裂解懸液,其蛋白濃度為100至200微克/100微升(本公司提供Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒30030.1)9.如果待測樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度通常人體細(xì)胞微粒體細(xì)胞色素P450亞酶1A2活性濃度為:200-600皮摩爾/分鐘/毫克蛋白11.細(xì)胞色素P450亞酶CYP1A2單位活性定義為:在37℃,pH7.5條件下,每分鐘內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化1納摩爾甲氧基異酚唑至羥基異吩唑酮所需的酶量作為一個活性單位12.本公司提供系列毒理學(xué)檢測試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450亞酶1A1活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞色素P450亞酶1A1活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-07 00:00
課件
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細(xì)胞色素P450亞酶CYP2D6(AMMC)活性熒光定量檢測
- 主要用途細(xì)胞色素P450亞酶CYP2D6(AMMC)活性熒光定量檢測試劑是一種旨在通過AMMC去甲基化酶反應(yīng)系統(tǒng)中AMMC轉(zhuǎn)化為AMHC后熒光峰值的變化,即采用熒光法來測定樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞或組織裂解萃取液樣品(動物、人體)或純化微粒體樣品細(xì)胞色素P450亞酶2D6的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景細(xì)胞色素P450酶是肝細(xì)胞微粒體復(fù)合功能單加氧化酶系統(tǒng)的總稱。其分成五十多個亞酶:CYP1至CYP51。作用在于體內(nèi)外源化合物(xenobiotics),包括藥物、致癌劑、化學(xué)污染物的氧化代謝,即單加氧化作用(monooxygenation)和羥化作用(hydroxylation)。AMMC羥基化酶(AMMC7-hydroxylase)的活性是細(xì)胞色素P450亞酶2D6的診斷標(biāo)記,其基于AMMC羥基化酶選擇性催化細(xì)胞色素P450亞酶2D6的活性。人體細(xì)胞色素P450亞酶2D6(CYP2D6;EC1.14.14.1),主要表達(dá)在肝、腎、胎盤、腦、乳腺、肺、和腸道組織中,是肝組織細(xì)胞色素P450酶總量的4%。CYP2D6是多態(tài)性酶,在80多個等位基因上,出現(xiàn)變異,具有個體和種族差異,與肺癌、肝癌、黑色素瘤、巴金森氏癥等疾病發(fā)生,以及藥物代謝敏感性差異存在相關(guān)性。CYP2D6主要代謝三分之一的臨床藥物,尤其含有堿性氮原子(basicnitrogenatom)的藥物,包括異喹胍(debrisoquine)的4-羥基化、鷹爪豆堿(sparteine)的氧化、抗抑郁癥藥物、神經(jīng)松弛藥(neuroleptic),以及內(nèi)源性5-羥色胺(hydroxytryptamine)、神經(jīng)類固醇(neurosteroid)等。同時會產(chǎn)生肝毒性的乙酰苯醌亞胺(N-acetyl-p-benzyquinoneimine)?;谶x擇性底物AMMC(3(2(N,N-diethyl-N-methylammonium)-ethyl)7-methoxy-4-methylcoumarin)在CYP2D6的去甲基化(o-demethylation)作用下,轉(zhuǎn)化為AMHC羥基香豆素(3(2(N,N-diethyl-N-methylammonium)-ethyl)7-hydroxy-4-methylcoumarin)后熒光峰值的變化(激發(fā)波長405nm,散發(fā)波長460nm),來定量測定細(xì)胞色素P450酶2D6的活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠細(xì)胞色素P450亞酶2B2活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 大鼠細(xì)胞色素P450亞酶2B2活性熒光定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-05-07 00:00
期刊論文
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細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶活性熒光定量檢測試劑盒 產(chǎn)品說明書
- 細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄酶活性熒光定量檢測試劑盒 產(chǎn)品說明書[詳細(xì)]
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2024-09-16 01:24
操作手冊
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小鼠細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450)ELISA試劑盒說明書
- 小鼠細(xì)胞色素P450(CytochromeP450)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗小鼠CytochromeP450單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeP450與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠CytochromeP450,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CytochromeP450濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeP450濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):10ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清測定前用標(biāo)本稀釋液至少作1:5稀釋(取40ul,加標(biāo)本稀釋液160ul,稀釋5倍)。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeP450含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeP450檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的小鼠CytochromeP450。不與小鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450亞酶1A1酶聯(lián)免疫分析使用說明書
- 細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.2U/L-16U/L細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)酶聯(lián)免疫分析使用目的:本試劑盒用于測定微生物樣本中細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)的活性。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)水平。用純化的細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1),再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)活性濃度。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)酶聯(lián)免疫分析操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。細(xì)胞色素P450亞酶1A1(CYP4501A1)酶聯(lián)免疫分析保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒
- 大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-14 01:22
應(yīng)用文章
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大鼠細(xì)胞色素CP450(Cytochrome C P450)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠細(xì)胞色素CP450(CytochromeCP450)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠CytochromeCP450單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeCP450與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠CytochromeCP450,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,CytochromeCP450濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeCP450濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeCP450含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeCP450檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠CytochromeCP450。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人細(xì)胞色素CP450(Cytochrome C P450)ELISA試劑盒說明書
- 人細(xì)胞色素CP450(CytochromeCP450)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人CytochromeCP450單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CytochromeCP450與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人CytochromeCP450,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,CytochromeCP450濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中CytochromeCP450濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CytochromeCP450含量即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的CytochromeCP450檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人CytochromeCP450。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊
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大鼠細(xì)胞色素P450 3A2(Cyp3a2)ELISA試劑盒使用說明書
- 南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠,試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)水平。用純化的大鼠細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2),再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠細(xì)胞色素P4503A2(Cyp3a2)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:72pmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為48pmol/L,32pmol/L,16pmol/L,8pmol/L,4pmol/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:1.8pmol/L65pmol/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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人細(xì)胞色素P450(CYP450)酶聯(lián)免疫檢測ELISA
- 人試劑盒,人細(xì)胞色素P450(CYP450)酶聯(lián)免疫檢測ELISA試劑盒使用說明書國內(nèi)權(quán)威的科研試劑供應(yīng)商,喬羽生物專業(yè)經(jīng)營進(jìn)口分裝和原裝、國產(chǎn)的Elisa試劑盒,品質(zhì)保證,技術(shù)嚴(yán)格,無效果退款退貨。Elisakit規(guī)格:48孔配置/96孔配置酶標(biāo)試劑:3ml×1瓶(48)/6ml×1瓶(96)本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿上海喬羽生物專業(yè)供應(yīng):使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本細(xì)胞色素P450(CYP450)含量。試驗(yàn)原理:CYP450試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知CYP450濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將CYP450和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CYP450的濃度呈比例關(guān)系。[詳細(xì)]
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2018-11-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)說明書
- 細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)ELISA試劑盒說明書本試劑僅供研究使用標(biāo)本:體液細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)ELISA試劑盒試驗(yàn)原理:BFGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知BFGF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將BFGF和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。人堿性成纖維細(xì)胞生長因子ELISA檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中BFGF的濃度呈比例關(guān)系。細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)ELISA試劑盒自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。細(xì)胞色素P450家族成員26A1(CYP26A1)ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的BFGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的BFGF含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-800pg/ml4、敏感度:1.0pg/mlANNA-1/Hu人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體規(guī)格:48T/96TNB-Ab人抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤抗體規(guī)格:48T/96TGM1人抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體規(guī)格:48T/96TBPI-Ab人抗殺菌通透性蛋白抗體規(guī)格:48T/96Tanti-parotidductAb人抗腮腺管抗體規(guī)格:48T/96Tanti-parotidductAb人抗腮腺管抗體規(guī)格:48T/96Tanti-cartilage-Ab人抗軟骨抗體規(guī)格:48T/96Tanti-cartilage-Ab人抗軟骨抗體規(guī)格:48T/96TAhCGAb人抗人絨毛膜促性腺激素抗體規(guī)格:48T/96T[詳細(xì)]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細(xì)]
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2015-01-15 00:00
其它
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體液尿激酶(UROKINASE)活性熒光定量檢測試劑盒說明書
- 主要用途是一種旨在通過三肽化合物底物p-ERG-pNA受到尿激酶的水解,釋放黃色對硝基苯胺,產(chǎn)生吸光峰值的變化,即采用比色法來測定細(xì)胞裂解萃取樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解萃取液樣品(動物、人體等)尿激酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景尿激酶(urokinase;UK;EC3.4.21.73),又稱為尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活劑(urokinase-typePlasminogenActivator;uPA),屬于絲氨酸蛋白酶,存在于血液、細(xì)胞外基質(zhì)和尿液中。尿激酶由411氨基酸構(gòu)成,分子量為54KD,有3個結(jié)構(gòu)域:絲氨酸蛋白酶結(jié)構(gòu)域、kringle結(jié)構(gòu)域和生長因子結(jié)構(gòu)域。其主要的生理性底物為纖維蛋白溶酶原(Plasminogen),即纖維蛋白溶酶(plasmin)的酶原形式(zymogen),切離部位為Cys-Pro-Gly-Arg⊥Val-Val-Gly-Gly-Cys。一旦切離后激活,纖維蛋白溶酶參與細(xì)胞蛋白水解過程,包括血栓溶解(thrombolysis)和細(xì)胞外基質(zhì)降解等。尿激酶與組織重構(gòu)、修復(fù)、血管形成(angiogenesis)性疾病和腫瘤擴(kuò)散有關(guān)。尿激酶的YZ劑是絲氨酸蛋白酶YZ劑(serpins),即纖維蛋白溶酶原激活劑YZ劑(PlasminogenActivatorInhibitor;PAI)?;谌斯ず铣傻娜幕衔锏孜飌-EGR-pNA(pyro-Glu-Gly-Arg-p-Nithoaniline;焦谷氨酸酰甘氨酰精氨酰對硝基苯胺)受到尿激酶的水解,釋放有色對硝基苯胺,在分光光度儀(405nm波長)下,測定吸光峰值的變化,來定量測定尿激酶的活性。尿激酶反應(yīng)系統(tǒng)為:產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升裂解液(ReagentB)毫升緩沖液(ReagentC)毫升陰性液(ReagentD)毫升底物液(ReagentE)微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存清理液(ReagentA)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里;底物液(ReagentE)避免光照和反復(fù)凍融;有效保證6月用戶自備15[詳細(xì)]
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2018-11-08 10:00
產(chǎn)品樣冊
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細(xì)胞谷氨酰胺酶活性光度法定量檢測試劑盒
- 主要用途細(xì)胞谷氨酰胺酶(glutaminase)活性光度法定量檢測試劑是一種旨在通過谷氨酰胺酶和谷氨酸脫氫酶的酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)還原后吸光峰值的,即采用光度法來測定細(xì)胞裂解樣品中酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞裂解懸液樣品(動物、人體、昆蟲等)谷氨酰胺酶的活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景谷氨酰胺酶(glutaminase;EC3.5.1.2)是一種氨基酸水解酶(amidohydrolase),將谷氨酰胺脫氨基(deaminating)轉(zhuǎn)化為谷氨酸。其同工酶具有組織特異性:其功能在肝細(xì)胞中產(chǎn)生的氨,用于合成尿素;在腎小管上皮細(xì)胞中產(chǎn)生的氨通過氨離子分泌,調(diào)節(jié)腎的酸堿平衡;同時在膠質(zhì)細(xì)胞(glialcell)和腸細(xì)胞中也有表達(dá)。谷氨酰胺酶在藥物和食品工業(yè)方面應(yīng)用廣泛,例如調(diào)味品的生產(chǎn)和白血病ZL的藥物等。基于底物谷氨酰胺在谷氨酰胺酶酶的作用下,轉(zhuǎn)化為谷氨酸和氨氣,進(jìn)而在谷氨酸脫氫酶的催化下,伴隨著氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidizednicotinamideadeninedinucleotide;NAD+)轉(zhuǎn)化為還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reducednicotinamideadeninedinucleotide;NADH),產(chǎn)生的吸光峰值的變化(340nm波長),來定量分析谷氨酰胺酶的活性。其酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)為:[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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