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UHPLC-QuadrupoleMS檢測(cè)十字花科植物中的游離氨基酸
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本文由 上海樸貝公司（原 泉島公司） 整理匯編
2018-09-10 11:11 349閱讀次數(shù)
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中文摘要:采用超GX液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-Quadrupole/OrbitrapMS)結(jié)合柱前衍生法建立了可同時(shí)測(cè)定28種游離氨基酸的分析方法，并對(duì)十字花科植物中的游離氨基酸進(jìn)行檢測(cè)和分析。樣品用超純水提取后，經(jīng)6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞胺基甲酸酯(AQC)衍生，采用WatersBEHC18柱作為色譜柱，以pH5.0乙酸銨緩沖溶液和80%乙腈水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。質(zhì)譜檢測(cè)器采用電噴霧離子源，在正離子模式下進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，十字花科植物中含有25種以上游離氨基酸，其中包括人體必需的8種氨基酸。25種氨基酸在線性范圍內(nèi)相關(guān)性良好，平均加標(biāo)回收率為80.5%~104.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%~4.4%。不同氨基酸檢測(cè)靈敏度不同，定量下限為0.01~1.45μmol/L。該方法雜質(zhì)干擾小，分析速度快，靈敏度高，適用于植物樣品中游離氨基酸的同步檢測(cè)。中文關(guān)鍵詞:超GX液相色譜高分辨質(zhì)譜游離氨基酸十字花科植物
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UHPLC-QuadrupoleMS檢測(cè)十字花科植物中的游離氨基酸- 中文摘要:采用超GX液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UHPLC-Quadrupole/OrbitrapMS)結(jié)合柱前衍生法建立了可同時(shí)測(cè)定28種游離氨基酸的分析方法，并對(duì)十字花科植物中的游離氨基酸進(jìn)行檢測(cè)和分析。樣品用超純水提取后，經(jīng)6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞胺基甲酸酯(AQC)衍生，采用WatersBEHC18柱作為色譜柱，以pH5.0乙酸銨緩沖溶液和80%乙腈水溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。質(zhì)譜檢測(cè)器采用電噴霧離子源，在正離子模式下進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，十字花科植物中含有25種以上游離氨基酸，其中包括人體必需的8種氨基酸。25種氨基酸在線性范圍內(nèi)相關(guān)性良好，平均加標(biāo)回收率為80.5%~104.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.6%~4.4%。不同氨基酸檢測(cè)靈敏度不同，定量下限為0.01~1.45μmol/L。該方法雜質(zhì)干擾小，分析速度快，靈敏度高，適用于植物樣品中游離氨基酸的同步檢測(cè)。中文關(guān)鍵詞:超GX液相色譜高分辨質(zhì)譜游離氨基酸十字花科植物[詳細(xì)]
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2018-09-10 11:11
產(chǎn)品樣冊(cè)
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- 植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
- 植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書主要用途植物游離氨基酸含量比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過顯色染料茚三酮與游離氨基酸的氨基發(fā)生反應(yīng)，在熱處理下，產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物，由分光光度儀比色分析，定量檢測(cè)樣品中游離氨基酸含量的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心設(shè)計(jì)、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種植物組織，包括種子（seed）、葉片（leaf）、根（root）等裂解懸液樣品的游離氨基酸含量檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)準(zhǔn)確。技術(shù)背景氨基酸（aminoacid或α-aminoacid）是一種含有胺和羧基功能基團(tuán)的分子，為生物體中Z必須的元素。根據(jù)其側(cè)鏈的不同，分成四類（弱酸、弱堿、極性、非極性）和20種各種不同的氨基酸；根據(jù)其光學(xué)異構(gòu)體（opticalisomers），又分成L型和D型。L-氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)分子。氨基酸是多肽、蛋白質(zhì)和輔酶等的組成單位，具有各種代謝作用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值?；谟坞x氨基酸的游離氨基與茚三酮（ninhydrin）反應(yīng)，產(chǎn)生中間產(chǎn)物酮酸（ketoacid）和氨分子，進(jìn)而在熱處理下，進(jìn)行脫羧基過程（僅發(fā)生于游離氨基酸），同時(shí)產(chǎn)生藍(lán)色復(fù)合物，在分光光度儀（570nm波長(zhǎng)）下，呈現(xiàn)吸光峰值的變化，來定量分析游離氨基酸的總含量。其反應(yīng)系統(tǒng)如下：產(chǎn)品內(nèi)容清理液（ReagentA）毫升萃取液（ReagentB）毫升緩沖液（ReagentC）毫升反應(yīng)液（ReagentD）毫升標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）微升產(chǎn)品說明書1份保存方式保存萃取液（ReagentB）和標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；反應(yīng)液（ReagentD）具有揮發(fā)性，嚴(yán)格密閉瓶蓋，避免光照；有效保證6月用戶自備1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)液配制和樣品操作的容器15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器干式恒溫儀：用于反應(yīng)孵育DOUNCE勻漿器：用于裂解組織微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作比色皿：用于比色分析的容器分光光度儀：用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟一、樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1克組織重量（選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管（選擇步驟）加入xx毫升清理液（ReagentA）清洗1次即刻用刀片切碎組織放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管加入預(yù)冷的xx毫升萃取液（ReagentB）渦旋震蕩5秒，充分混勻即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）將所有組織勻漿物移入1.5毫升離心管，放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個(gè)新的預(yù)冷的1.5毫升離心管（選擇步驟）如果上清液含有肉眼可見的殘?jiān)?，重?fù)離心5分鐘一次，速度為5000g（或7500RPM，例如eppendorf5415）移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)（注意：建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）放進(jìn)－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用二、標(biāo)準(zhǔn)樣品配制準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管分別加入xx微升緩沖液（ReagentC）到1至5號(hào)管移取xx微升標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）到1號(hào)管，混勻小心移取xx微升1號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）到2號(hào)管，混勻小心移取xx微升2號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）到3號(hào)管，混勻小心移取xx微升3號(hào)管稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）到4號(hào)管，混勻?qū)?至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)緩沖液（ReagentC）標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度1xx微升xx微升xx微摩爾/升2xx微升xx微升1號(hào)管xx微摩爾/升3xx微升xx微升2號(hào)管xx微摩爾/升4xx微升xx微升3號(hào)管xx微摩爾/升5xx微升00微摩爾/升標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定加入xx微升緩沖液（ReagentC）到1.5毫升離心管加入xx微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液（ReagentE）加入xx微升反應(yīng)液（ReagentD）渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘，避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)（波長(zhǎng)570nm）：獲得吸光讀數(shù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至8四次構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光讀數(shù)；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)氨基酸濃度（微摩爾/升）樣品測(cè)定加入xx微升緩沖液（ReagentC）到1.5毫升離心管加入500微升待測(cè)樣品加入xx微升反應(yīng)液（ReagentD）渦旋震蕩15秒放進(jìn)90℃干式恒溫儀孵育5分鐘，避免光照放進(jìn)冰槽里1分鐘轉(zhuǎn)移到比色皿即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè)（波長(zhǎng)570nm）：獲得吸光讀數(shù)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)氨基酸濃度（微摩爾/升）濃度計(jì)算根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)氨基酸濃度（微摩爾/升）X稀釋倍數(shù)=（微摩爾/升）注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為25次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)樣品避免使用Tris緩沖液、尿素等胺類物質(zhì)處理樣品操作時(shí)，須戴手套系統(tǒng)操作時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需1次反應(yīng)液（ReagentD）具有揮發(fā)性，嚴(yán)格密閉瓶蓋，避免光照孵育時(shí)，避免光照本公司提供系列氨基酸檢測(cè)試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感[詳細(xì)]
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2024-09-30 10:02
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粉塵中游離二氧化硅的檢測(cè)方法- 粉塵的測(cè)定知識(shí)點(diǎn)游離二氧化硅（一）紅外分光光度法 1．原理α-石英在紅外光譜的12.5、12.8和14.4μm處有特征吸收帶，在一定條件下，吸光度與曠石英的質(zhì)量成線性關(guān)系，進(jìn)行定量測(cè)定?！ ?．儀器（1）測(cè)塵濾膜?！ 。?）分析天平，感量0.01mg。（3）紅外分光光度計(jì)FC-200D?！ ?．分析步驟 ?。?）用測(cè)塵濾膜采集粉塵樣品，稱量、灰化后，制成錠片。 ?。?）在12.5或14.4μm處測(cè)定吸光度；然后，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量?！ ?．說明 （1）此法測(cè)定的游離二氧化硅為α-石英，檢出限為10μg?！ 。?）吸光度與粉塵粒徑有關(guān)，粒徑＞5μm的粉塵應(yīng)＜5％，要求標(biāo)準(zhǔn)粉塵的粒徑與樣品一致?！ 。ǘ┙沽姿豳|(zhì)量法 1．原理硅酸鹽溶于加熱的焦磷酸中被除去，而二氧化硅幾乎不溶，以稱量法測(cè)定。 2．儀器分析天平等。 3．試劑 ?。?）焦磷酸：將磷酸加熱到沸騰，至250℃不冒泡為止。 ?。?）氫氟酸。（3）0.1mol／L鹽酸溶液?！ ?．操作步驟 ?。?）將采集的粉塵樣品放在（105±3）℃的烘箱內(nèi)干燥2小時(shí)。如果粉塵粒子較大，用瑪瑙研缽研磨。 ?。?）準(zhǔn)確稱取0.1～0.2g粉塵樣品于50ml錐形瓶中。若樣品中含有煤、其他碳素及有機(jī)物時(shí)，先于800～900℃灰化30分鐘以上。用焦磷酸洗入錐形瓶中。若含有硫化礦物，應(yīng)加數(shù)毫克結(jié)晶于錐形瓶中?！ 。?）加入15ml焦磷酸，迅速加熱到245～250℃，保持15分鐘，不斷攪拌。放冷至100～150℃：，用冷水冷卻至40～50℃。冷卻時(shí)，加50～80℃的蒸餾水到40～45ml，邊加邊攪拌均勻。將錐形瓶中內(nèi)容物小心轉(zhuǎn)移入燒杯中。加蒸餾水至150～200ml，用玻璃棒攪勻。煮沸后，趁熱過濾。用0.1mol／L鹽酸溶液洗滌燒杯，并將濾紙上的沉渣沖洗3～5次，再用熱蒸餾水洗至無(wú)酸性反應(yīng)為止。以上操作應(yīng)在當(dāng)天完成?！ 。?）將有沉渣的濾紙折疊數(shù)次，放入恒量的瓷坩堝中，在80℃干燥，低溫碳化，800～900℃灰化30分鐘；冷卻后，稱量至恒重?！ ?．計(jì)算 按公式計(jì)算粉塵中游離二氧化硅的百分濃度： 式中：m2和m1分別為坩堝加沉渣質(zhì)量和坩堝質(zhì)量，g；G為粉塵樣品質(zhì)量，g?！ ?．說明 ?。?）當(dāng)樣品中含有焦磷酸難溶的物質(zhì)時(shí)，需用氫氟酸在鉑坩堝中處理?！ 。?）在過濾后，如用鉑坩堝，要洗至無(wú)磷酸根反應(yīng)后再洗3次?！ 。ㄈ﹛線衍射測(cè)定法 1．原理當(dāng)晶體物質(zhì)照射X射線時(shí)，將產(chǎn)生X衍射；在一定的條件下，衍射線的強(qiáng)度與晶體物質(zhì)的質(zhì)量成正比；測(cè)量衍射線強(qiáng)度而定量?！ ?．儀器（1）測(cè)塵濾膜。（2）分析天平，感量0.01mg。（3）X線衍射儀。 3．分析步驟 ?。?）用測(cè)塵濾膜采集粉塵樣品，按儀器要求制備待測(cè)樣品?！ 。?）先進(jìn)行定性測(cè)定，確定是否存在α-石英；然后，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量?！ ?．說明 （1）此法測(cè)定的游離二氧化硅為α-石英。 ?。?）衍射線的強(qiáng)度與粉塵粒徑有關(guān)，粒徑＞10μm，強(qiáng)度下降。要求標(biāo)準(zhǔn)粉塵的粒徑與樣品一致?！ 。?）濾膜采塵量應(yīng)控制在2～5mg。[詳細(xì)]
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2018-09-21 10:01
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