本文由 上海飛軒生物科技有限公司 整理匯編

2024-09-14 21:22 349閱讀次數(shù)

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• ELISA中的試劑－酶的底物

  ELISA中的試劑－酶的底物[詳細(xì)]

  2024-09-14 21:22

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• ELISA中的試劑－免疫吸附劑

  ELISA中的試劑－免疫吸附劑[詳細(xì)]

  2024-09-18 18:10

  專利

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• 免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物

  免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物（一）辣根過(guò)氧化物酶在免疫酶技術(shù)中，辣根過(guò)氧化物酶（HRP）是Z理想、應(yīng)用Z多的標(biāo)記酶，是從一種稱為辣根的植物根部分離、純化獲得。HRP分子中含有含鐵血紅素基團(tuán)（高鐵血紅素），是HRP的活性基團(tuán)，在溶液中呈棕黃色，HRP中的高鐵血紅素與H202形成一種復(fù)合物，然后脫水，氧原子形成。幾種底物可使HRP氧化，Z常用的有二種，即多酚和硝基鹽。HRP的優(yōu)點(diǎn)有以下幾個(gè)方面。（1）體積小（分子質(zhì)量40kDa），不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位，且穿透力強(qiáng)，易與細(xì)胞內(nèi)抗原結(jié)合。（2）穩(wěn)定且易獲得高純度酶制品。（3）具有較高活性及特異性。（4）不溶性好，終產(chǎn)物不向周邊擴(kuò)散。（5）組織中內(nèi)源性酶較少，YZ方法較多。（6）價(jià)格相對(duì)較便宜。（7）特異性底物是過(guò)氧化氫（H202），可選用不同電子供體（發(fā)色基團(tuán)），使終產(chǎn)物呈不同顏色。例如3，3’二氨基聯(lián)苯胺（DAB）為棕褐色，3氨基9乙基卡巴唑（AEC）為紅色，4氯1苯酚（CN）為藍(lán)色。AEC室溫下較穩(wěn)定，產(chǎn)物不溶于水，但溶于有機(jī)溶劑，所以不能進(jìn)行脫水等處理；又因其需用水溶性封固劑，時(shí)間長(zhǎng)易褪色，限制了其應(yīng)用。DAB是廣泛應(yīng)用的電子供體，產(chǎn)物既不溶于水，又不溶于有機(jī)溶液，可長(zhǎng)期保存。其終產(chǎn)物具有嗜鋨性，經(jīng)鋨酸處理后電子密度增加，適用于電鏡下觀察。但DAB的缺點(diǎn)是具有潛在的致癌性，所以應(yīng)盡量減少吸人和接觸次數(shù)，并嚴(yán)格管理廢液。盡管有人反對(duì)應(yīng)用DAB，但目前還未找到一種比它更好的替代品，所以應(yīng)用依然Z為廣泛。HRP與底物H202呈色反應(yīng)原理見(jiàn)圖4l。HRP的特異底物為H202，在分解Hz02過(guò)程中，與H202形成初級(jí)復(fù)合物，無(wú)電子供體時(shí)，反應(yīng)不再繼續(xù)進(jìn)行，當(dāng)電子供體存在時(shí)，反應(yīng)以一定的速度形成第二種復(fù)合物。HRP催化H202已形成的中間型產(chǎn)物，迅速生成水，酶被還原，電子供體被氧化、聚合，再經(jīng)氧化環(huán)化?Z后形成吲哚胺多聚體，此多聚體進(jìn)一步氧化、環(huán)化，形成苯乙肼聚合體，如供氫體是DAB，產(chǎn)物為棕褐色；如是AEC，產(chǎn)物為紅色。（二）堿性磷酸酶目前商品化的AKP均來(lái)源于牛小腸，稱為牛腸堿性磷酸酶（calfintestinalkalinephosphatase），其分子質(zhì)量為100kDa，故而穿透細(xì)胞組織的能力較弱。某些組織細(xì)胞內(nèi)含有較高的內(nèi)源性堿性和酸性磷酸酶，例如人體和鼠類、狗等動(dòng)物組織的肝、腎、腸，對(duì)IHC染色會(huì)產(chǎn)生一定的干擾，因此限制了它的應(yīng)用。AKP主要用于血涂片或涂片的白細(xì)胞抗原檢測(cè)。但是由于AKP的呈色反應(yīng)的敏感性要比HRP高23倍，顯色時(shí)間可從30min到48h，可與HRP組合進(jìn)行IHC的雙重或多重標(biāo)記。另外，內(nèi)源性堿性磷酸酶可以在底物緩沖液中加入左旋咪唑（1evamisole）和鎂離子（氯化鎂），或提高底物緩沖液的pH值，可以有效地消除內(nèi)源性堿性磷酸酶，使該酶應(yīng)用比例日趨增多。目前該酶已廣泛應(yīng)用于原位雜交檢測(cè)的顯色和雙重酶標(biāo)染色。（三）葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（glucoseoxdase，GOD）以葡萄糖為底物，生成藍(lán)色不溶性沉淀。該終產(chǎn)物較穩(wěn)定，不溶于有機(jī)溶劑，故易保存，但因其分子質(zhì)量為150kDa，不能穿人細(xì)胞，影響了其應(yīng)用。另外，該酶的敏感性較低，主要是酶與底物反應(yīng)敏感性低。目前主要用于IHC的多重標(biāo)記。免疫酶組織化學(xué)技術(shù)的常用酶及其底物[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

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• ELISA中的試劑－結(jié)合物

  ELISA中的試劑－結(jié)合物[詳細(xì)]

  2024-09-19 03:52

  期刊論文

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• 螢火蟲(chóng)熒光素酶的底物 D-Luciferin說(shuō)明書(shū)

  可能生物冷光檢測(cè)使用Z廣泛的酶就是螢火蟲(chóng)熒光素酶（FireflyLuciferase）了，編碼此酶的luc基因是一個(gè)使用廣泛的報(bào)道基因。D-熒光素（D-LuciferinforFireflyLuciferase）被ATP-依賴性的氧化作用后產(chǎn)SF射ZX在560nm左右的熒光，當(dāng)D-熒光素和ATP都過(guò)量時(shí)熒光量與熒光素酶濃度成正比。Biotium提供三種形式的D-熒光素：D-熒光素游離酸、D-熒光素鉀鹽和D-熒光素鈉鹽，鉀鹽鈉鹽的形式是Z通用的，因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是活體動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。盡管D-熒光素產(chǎn)品來(lái)源不同，不同的廠家品質(zhì)相當(dāng)不同，或是同一廠家的不同批次也不同。Biotium使用專有的過(guò)程制造產(chǎn)品，通過(guò)好幾道化學(xué)檢測(cè)和Z終的酶學(xué)檢測(cè)確保產(chǎn)品一致性，使品質(zhì)得到嚴(yán)格控制。除了試劑，我們還提供檢測(cè)報(bào)道基因表達(dá)的螢火蟲(chóng)熒光素酶檢測(cè)試劑盒，和基于熒光素酶系統(tǒng)的ATP檢測(cè)試劑盒。每個(gè)試劑盒都提供有詳細(xì)的操作步驟。[詳細(xì)]

  2018-09-20 10:00

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• 纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物

  活動(dòng)：消費(fèi)積分可換充值卡！中文：纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物英文：AZCL-Xyloglucan(Tamarind)貨號(hào)：I-AZXYG規(guī)格：4g價(jià)格：2336元類別：不溶性顯示底物簡(jiǎn)介：Megazymes的不溶性顯色底物，酶活性，生化酶分析實(shí)驗(yàn)。說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• ELISA試劑盒ABTS液體底物的說(shuō)明書(shū)

  ELISA試劑盒生化試劑ABTS液體底物按生物體組織中所含有的或是在代謝過(guò)程中所產(chǎn)生的物質(zhì)可分為氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸、酶、輔酶、糖類、酯類、激素等；按生物學(xué)研究的需要可分為電泳試劑、色譜試劑、免疫試劑、標(biāo)記試劑、組織化學(xué)試劑等。A40415左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品30mg18910-70-8A40416左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品20mg18910-68-4A40417沙丁胺醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品AlbuterolRelatedCompoundA25mg18910-68-4A40418異氟烷相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品0．1ml1885-48-9A40419外消旋阿巴卡韋標(biāo)準(zhǔn)品ABTS液體底物AbacavirSulfateRacemic20mg188062-50-2A40420雙-乙基乙氧苯酚甲氧苯基三嗪標(biāo)準(zhǔn)品Bemotrizinol200mg187393-00-6A40421七甲基三硅氧烷標(biāo)準(zhǔn)品HeptamethylTrisiloxane150mg1873-88-7A40422鹽酸莫西沙星標(biāo)準(zhǔn)品MoxifloxacinHydrochloride200mg186826-86-8A40423美索比妥標(biāo)準(zhǔn)品MethohexitalCIV500mg18652-93-2A40424黃肉楠堿標(biāo)準(zhǔn)品Actein20mg18642-44-9A40425甘油山酸酯標(biāo)準(zhǔn)品GlycerylBehenate200mg18641-57-1A40426沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品Albuterol200mg18559-94-9A40427苯丙二醇標(biāo)準(zhǔn)品Phenylpropanediol100mg1855-09-0A40428癸氧喹酯標(biāo)準(zhǔn)品Decoquinate200mg18507-89-6A40429富馬酸福莫特羅標(biāo)準(zhǔn)品FormoterolFumarate100mg183814-30-4ELISA試劑盒A40430普卡霉素標(biāo)準(zhǔn)品Plicamycin50mg18378-89-7A40431卡維地洛相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品15mg1836-62-0A40432左沙丁胺醇鹽酸鹽相關(guān)物質(zhì)G標(biāo)準(zhǔn)品20mg182676-90-0A40433伏立康唑雜質(zhì)A10mg182230-43-9A40434標(biāo)準(zhǔn)品BromazepamCIV（AS）100mg1812-30-2A40435溴馬秦標(biāo)準(zhǔn)品200mg1808-12-4[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 現(xiàn)貨人組蛋白去乙?；窫LISA 檢測(cè)試劑盒試劑的準(zhǔn)備

  人組蛋白去乙?；窫LISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本：血清或血漿上海信然實(shí)業(yè)有限公司專業(yè)供應(yīng)葡聚糖凝膠HL-20,白介素elisa試劑盒,腫瘤壞死因子elisa試劑盒,人類白介抗原B27,細(xì)胞生長(zhǎng)因子試劑盒，提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí)性。我公司對(duì)試劑盒質(zhì)量1**%保證，若存在質(zhì)量問(wèn)題，我們無(wú)條件包退換試驗(yàn)原理：　　　　HDAC試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知HDAC濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將HDAC和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中HDAC的濃度呈比例關(guān)系。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。人組蛋白去乙?；窫LISA檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。人組蛋白去乙?；窫LISA檢測(cè)試劑盒操作步驟使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。人組蛋白去乙酰化酶ELISA檢測(cè)試劑盒結(jié)果判斷與分析1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的HDAC標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的HDAC含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍：0-400pmol/L4、敏感度：1.0pmol/LGoatanti-humanIgG/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗人IgG0.1mlGoatanti-humanIgG/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗人IgG0.5mlPDGF-B血小板源性生長(zhǎng)因子-B抗體0.2mlPDGF-BB（plateletderivedgrowthfactor-BB）血小板源性生長(zhǎng)因子-BB抗體0.1mlPDGF-BB（plateletderivedgrowthfactor-BB）血小板源性生長(zhǎng)因子-BB抗體0.2mlPDGF-R-A血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A抗體0.1mlPDGF-R-A血小板源性生長(zhǎng)因子受體-A抗體0.2mlPDGF-R-B血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體0.1mlBSA/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記牛血清白蛋白0.5mlGoatanti-bovineIgG/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗牛IgG0.1mlGoatanti-bovineIgG/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗牛IgG0.5mlGoatanti-bovIgM/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗牛IgM0.1mlGoatanti-chiIgG/Cy3熒光素Cy3標(biāo)記羊抗雞IgG0.1mlPDGF-R-B血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體0.2mlPDI（ProteinDisulfidelsomerase）蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體0.2mlPdk4（pyruvatedehydrogenasekinaseisozyme4）丙酮酸脫氫酶激酶4抗體0.1mlPdk4（pyruvatedehydrogenasekinaseisozyme4）丙酮酸脫氫酶激酶4抗體0.2mlPDX1（pancreaticandduodenalhomeobox1）胰十二指腸同源異型盒基因抗體0.2mlPEA3（polymomavirusenhancer3）多瘤促活化因子抗體0.2ml若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息，請(qǐng)來(lái)電咨詢：聯(lián)系人：張經(jīng)理電話：021-60514052，021-60514051，61845661傳真：021-61845661手機(jī)：18939846276，13482524164[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• ELISA的技術(shù)要點(diǎn)--試劑的制備

  ELISA的技術(shù)要點(diǎn)--試劑的制備試劑的制備　　ELISA的主要試劑有固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。以下分別介紹這些試劑的原料和制備方法?！　。ㄒ唬┕滔噍d體　檢測(cè)中可作ELISA中載體的物質(zhì)很多，Z常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。在ELISA測(cè)定過(guò)程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)。重要的是聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后依然保留原來(lái)的免疫活性。加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用?！　LISA載體的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是兼作反應(yīng)的容器，Z后放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗，效果更好。Z常用的載體為微量反應(yīng)板，專用于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱為ELISA試劑盒，國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA試劑盒的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化有重要意義?！　×己玫腅LISA試劑盒應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔后，每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件，使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10％?！　∨c聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可切割，價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時(shí)也略高。　　為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可用以下方法加以檢驗(yàn)：用其它免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別Zda，這種載體就是這一ELISA測(cè)定的Z合適的固相載體?！　〕芰现破吠猓滔嗝该庖邷y(cè)定的載體還有兩種材料：一是微孔濾膜，如硝酸纖維素膜、尼龍膜等。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的，反應(yīng)時(shí)固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應(yīng)的速率，反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀器?！　。ǘ┛乖涂贵w　　在ELISA實(shí)施過(guò)程中，抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。　　ELISA所用抗原有三個(gè)來(lái)源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化，提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用，因此也稱提純抗原（purifiedantigen）。重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質(zhì)少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術(shù)難度且要求較為昂貴的儀器設(shè)備和試劑，其應(yīng)用仍十分普遍，特別是對(duì)那些天然抗原不易得到的試驗(yàn)，更顯出其獨(dú)到之處。　　用于ELISA的抗體有多克隆的和單克隆的。抗血清成分復(fù)雜，應(yīng)從中提取IgG才可用于包被固相或酶標(biāo)記。含單克隆抗體的小鼠腹水中的特異性抗體含量較高，有時(shí)可適當(dāng)稀釋后直接進(jìn)行包被。制備酶結(jié)合物用的抗體的質(zhì)量往往要求有較高的純度。經(jīng)硫酸銨鹽析純化的IgG可進(jìn)一步用各種分子篩層析提純。也可用親和層析法提純特異性IgG，如用酶消化IgG后提取的Fab片段，則效果更好?！　。ㄈ┟庖呶絼　」滔嗟目乖蚩贵w稱為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（Z常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低，固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，Z后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用1％～5％牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過(guò)程稱為封閉（blocking）。包被好的ELISA試劑盒在低溫可放置一段時(shí)間而不失去其免疫活性?！　。ㄋ模┟负偷孜铩　LISA中所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來(lái)源豐富、價(jià)格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。**在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測(cè)定，光吸收高。ELISA中Z常用的酶為辣根過(guò)氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶（AP）。HRP在蔬菜作物辣根中含量很高，純化方法也不復(fù)雜。它是一種糖蛋白，含糖量約18％；分子量為44kD；是一種復(fù)合酶，由主酶（酶蛋白）和輔基（亞鐵血紅素）結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為無(wú)色糖蛋白，在275nm波長(zhǎng)處有Z高吸收峰；輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán).[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• 細(xì)胞培養(yǎng)中的一些試劑

  細(xì)胞培養(yǎng)中的一些試劑[詳細(xì)]

  2024-09-14 16:59

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• 極限糊精酶[普魯蘭酶]檢測(cè)底物 使用說(shuō)明

  活動(dòng)：消費(fèi)積分可換充值卡！中文：極限糊精酶[普魯蘭酶]檢測(cè)底物英文：AZCL-Pullulan貨號(hào)：I-AZPUL規(guī)格：3g價(jià)格：2144元類別：不溶性顯示底物簡(jiǎn)介：Megazymes的不溶性顯色底物，酶活性，生化酶分析實(shí)驗(yàn)。說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的試劑詳細(xì)介紹

  小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的試劑詳細(xì)介紹在小鼠ELISA試劑盒臨床檢驗(yàn)中大多采用商品試劑盒進(jìn)行測(cè)定。ELISA中必須要有三種試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。完整的ELISA試劑盒應(yīng)該具備以下幾種試劑：（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；（5）結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應(yīng)終止液。下面就對(duì)幾種試劑進(jìn)行詳細(xì)的介紹：1　免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。1.1　固相載體固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺鱁LISA中載體的材料很多，Z常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料，可制成各種形式。ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板Z為常用，專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板，國(guó)際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。小鼠ELISA試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸光度?？刂品磻?yīng)條件，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄，可剪割，價(jià)廉，但光潔度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別Zda，這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的Z合適的固相載體。在ELISA中，用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2，小珠均為1000mm2，將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于**反應(yīng)狀態(tài)，因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌徹底，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過(guò)程中滾動(dòng)淋洗，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大，小珠的均一性較差。小試管作為固相載體也有較大的吸附表面，而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul，而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積，標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯，Z后直接放入分光光度計(jì)中比色。也有小鼠ELISA試劑盒應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極大，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行，其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌方便，試劑盒一般均配以特殊儀器。[詳細(xì)]

  2018-09-14 10:01

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• 半乳聚糖酶特殊檢測(cè)底物（馬鈴薯） 使用說(shuō)明

  中文：半乳聚糖酶特殊檢測(cè)底物(馬鈴薯)英文：Azo-Galactan(Potato)貨號(hào)：S-AGALP規(guī)格：4g價(jià)格：2720元類別：可溶性顯色底物簡(jiǎn)介：Megazyme可溶性顯色底物用于分析檢測(cè)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 葡萄糖苷酸酶檢測(cè)底物使用說(shuō)明

  中文：葡萄糖苷酸酶檢測(cè)底物英文：AldouronicAcidsMixture(NaBH4Reduced)貨號(hào)：O-AMXR規(guī)格：100mg價(jià)格：2320元類別：酶底物簡(jiǎn)介：Megazyme碳水化合物；低聚糖；AldouronicAcids說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 葡萄糖苷酸酶檢測(cè)底物 使用說(shuō)明

  中文：葡萄糖苷酸酶檢測(cè)底物英文：AldouronicAcidsMixture貨號(hào)：O-AMX規(guī)格：200mg價(jià)格：2320元類別：酶底物簡(jiǎn)介：Megazyme碳水化合物；低聚糖；AldouronicAcids說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物 使用說(shuō)明

  活動(dòng)：消費(fèi)積分可換充值卡！中文：纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物英文：AZCL-HE-Cellulose貨號(hào)：I-AZCEL規(guī)格：3g價(jià)格：2288元類別：不溶性顯示底物簡(jiǎn)介：Megazymes的不溶性顯色底物，酶活性，生化酶分析實(shí)驗(yàn)。說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物 說(shuō)明

  活動(dòng)：消費(fèi)積分可換充值卡！中文：纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物英文：Azo-α-Cellulose貨號(hào)：I-ACELL規(guī)格：10g價(jià)格：2144元類別：不溶性顯示底物簡(jiǎn)介：Megazymes的不溶性顯色底物，酶活性，生化酶分析實(shí)驗(yàn)。說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• 纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物 使用說(shuō)明

  活動(dòng)：消費(fèi)積分可換充值卡！中文：纖維素內(nèi)切酶檢測(cè)底物英文：Azo-Avicel貨號(hào)：I-AAVIC規(guī)格：10g價(jià)格：2144元類別：不溶性顯示底物簡(jiǎn)介：Megazymes的不溶性顯色底物，酶活性，生化酶分析實(shí)驗(yàn)。說(shuō)明書(shū)：點(diǎn)擊上面“”[詳細(xì)]

  2018-09-30 10:00

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• ELISA試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)

  ELISA試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)[詳細(xì)]

  2010-03-26 00:00

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• ELISA試劑的選用和質(zhì)檢

  蛋白酶YZ劑,9087-70-1Aprotininfrombovinelung別名：抑肽酶；Trypsininhibitor（basic）分子式：C284H432N84O79S7分子量：6511.44CAS＃：9087-70-1外觀：白色粉末特性：活性（KIU/mg）：>4500純度（HPLC）：PASSR：42/43S：36/37/39儲(chǔ)存條件：2-8℃使用說(shuō)明：用0.01mol/LHepes溶解，儲(chǔ)存液濃度1mg/ml工作濃度：0.6-2ug/ml蛋白酶YZ劑,9087-70-1XY8260Aprotinin蛋白酶YZ劑2mg瓶蛋白酶YZ劑,9087-70-1XY8260Aprotinin蛋白酶YZ劑5mg瓶[詳細(xì)]

  2019-01-02 10:00

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