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ELISA中的試劑-結(jié)合物
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本文由 上海希美化學(xué)有限公司 整理匯編
2024-09-19 03:52 215閱讀次數(shù)
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ELISA中的試劑-結(jié)合物
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ELISA中的試劑-結(jié)合物
- ELISA中的試劑-結(jié)合物[詳細(xì)]
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2024-09-19 03:52
期刊論文
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ELISA中的試劑-免疫吸附劑
- ELISA中的試劑-免疫吸附劑[詳細(xì)]
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2024-09-18 18:10
專(zhuān)利
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ELISA中的試劑-酶的底物
- ELISA中的試劑-酶的底物[詳細(xì)]
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2024-09-14 21:22
產(chǎn)品樣冊(cè)
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AKF-2010V卡氏水分儀測(cè)定視黃醇結(jié)合蛋白試劑中的水分
- 視黃醇結(jié)合蛋白測(cè)定試劑用于體外定量測(cè)定人血清或尿液中視黃醇結(jié)合蛋白的含量。 視黃醇結(jié)合蛋白是反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)的一個(gè)靈敏指標(biāo)。本試驗(yàn)采用AKF-2010V卡爾費(fèi)休水分測(cè)定儀,通過(guò)直接進(jìn)樣測(cè)定視黃醇結(jié)合蛋白測(cè)定試劑中的水分含量。[詳細(xì)]
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2024-09-10 21:55
產(chǎn)品樣冊(cè)
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elisa試劑器材
- Elisa試劑器材:試劑: ?。?) 包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液): Na2CO31.59克 NaHCO3 2.93克 加蒸餾水至1000ml ?。?) 洗滌緩沖液(PH7.4PBS):0.15M KH2PO40.2克 Na2HPO412H2O 2.9克 NaCl 8.0克 KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml更多資料請(qǐng)下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 07:19
產(chǎn)品樣冊(cè)
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小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的試劑詳細(xì)介紹
- 小鼠ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的試劑詳細(xì)介紹在小鼠ELISA試劑盒臨床檢驗(yàn)中大多采用商品試劑盒進(jìn)行測(cè)定。ELISA中必須要有三種試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物。完整的ELISA試劑盒應(yīng)該具備以下幾種試劑:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。下面就對(duì)幾種試劑進(jìn)行詳細(xì)的介紹:1 免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個(gè)月。有些不完整的試盒,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,檢測(cè)人員需自行包被。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程。1.1 固相載體固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,Z常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板Z為常用,專(zhuān)用于EILSA的產(chǎn)品稱(chēng)為ELISA板,國(guó)際上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線(xiàn)照射后,其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。小鼠ELISA試劑盒常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可剪割,價(jià)廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別Zda,這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的Z合適的固相載體。在ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點(diǎn)的暴露面處于**反應(yīng)狀態(tài),因此珠式ELISA的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌徹底,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過(guò)程中滾動(dòng)淋洗,其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。小試管作為固相載體也有較大的吸附表面,而且標(biāo)本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式ELISA的標(biāo)本量一般為100-200ul,而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積,標(biāo)本反應(yīng)量的增加有助于試驗(yàn)敏感性的提高。小試管還可以當(dāng)作比色杯,Z后直接放入分光光度計(jì)中比色。也有小鼠ELISA試劑盒應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的。其優(yōu)點(diǎn)是表面積極大,反應(yīng)在懸液中進(jìn)行,其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離,洗滌方便,試劑盒一般均配以特殊儀器。[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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細(xì)胞培養(yǎng)中的一些試劑
- 細(xì)胞培養(yǎng)中的一些試劑[詳細(xì)]
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2024-09-14 16:59
應(yīng)用文章
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ELISA試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)
- ELISA試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)[詳細(xì)]
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2010-03-26 00:00
其它
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ELISA試劑的選用和質(zhì)檢
- 蛋白酶YZ劑,9087-70-1Aprotininfrombovinelung別名:抑肽酶;Trypsininhibitor(basic)分子式:C284H432N84O79S7分子量:6511.44CAS#:9087-70-1外觀:白色粉末特性:活性(KIU/mg):>4500純度(HPLC):PASSR:42/43S:36/37/39儲(chǔ)存條件:2-8℃使用說(shuō)明:用0.01mol/LHepes溶解,儲(chǔ)存液濃度1mg/ml工作濃度:0.6-2ug/ml蛋白酶YZ劑,9087-70-1XY8260Aprotinin蛋白酶YZ劑2mg瓶蛋白酶YZ劑,9087-70-1XY8260Aprotinin蛋白酶YZ劑5mg瓶[詳細(xì)]
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2019-01-02 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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ELISA的技術(shù)要點(diǎn)--試劑的制備
- ELISA的技術(shù)要點(diǎn)--試劑的制備試劑的制備 ELISA的主要試劑有固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。以下分別介紹這些試劑的原料和制備方法?! 。ㄒ唬┕滔噍d體 檢測(cè)中可作ELISA中載體的物質(zhì)很多,Z常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。在ELISA測(cè)定過(guò)程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)。重要的是聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后依然保留原來(lái)的免疫活性。加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用?! LISA載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點(diǎn)是兼作反應(yīng)的容器,Z后放入分光光度計(jì)中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過(guò)程中使圓珠滾動(dòng)淋洗,效果更好。Z常用的載體為微量反應(yīng)板,專(zhuān)用于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱(chēng)為ELISA試劑盒,國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA試劑盒的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化有重要意義?! ×己玫腅LISA試劑盒應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%?! ∨c聚苯乙烯類(lèi)似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可切割,價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時(shí)也略高?! 楸容^不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,可用以下方法加以檢驗(yàn):用其它免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別Zda,這種載體就是這一ELISA測(cè)定的Z合適的固相載體?! 〕芰现破吠?,固相酶免疫測(cè)定的載體還有兩種材料:一是微孔濾膜,如硝酸纖維素膜、尼龍膜等。另一種載體是以含鐵的磁性微粒制作的,反應(yīng)時(shí)固相微粒懸浮在溶液中,具有液相反應(yīng)的速率,反應(yīng)結(jié)束后用磁鐵吸引作為分離的手段,洗滌也十分方便,但需配備特殊的儀器?! 。ǘ┛乖涂贵w 在ELISA實(shí)施過(guò)程中,抗原和抗體的質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高,抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。 ELISA所用抗原有三個(gè)來(lái)源:天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等,一般含有多種抗原成分,需經(jīng)純化,提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用,因此也稱(chēng)提純抗原(purifiedantigen)。重組抗原(recombinantantigen)和多肽抗原(peptideantigen)均為人工合成品,使用安全,而且純度高,干擾物質(zhì)少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術(shù)難度且要求較為昂貴的儀器設(shè)備和試劑,其應(yīng)用仍十分普遍,特別是對(duì)那些天然抗原不易得到的試驗(yàn),更顯出其獨(dú)到之處?! ∮糜贓LISA的抗體有多克隆的和單克隆的??寡宄煞謴?fù)雜,應(yīng)從中提取IgG才可用于包被固相或酶標(biāo)記。含單克隆抗體的小鼠腹水中的特異性抗體含量較高,有時(shí)可適當(dāng)稀釋后直接進(jìn)行包被。制備酶結(jié)合物用的抗體的質(zhì)量往往要求有較高的純度。經(jīng)硫酸銨鹽析純化的IgG可進(jìn)一步用各種分子篩層析提純。也可用親和層析法提純特異性IgG,如用酶消化IgG后提取的Fab片段,則效果更好。 ?。ㄈ┟庖呶絼 」滔嗟目乖蚩贵w稱(chēng)為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱(chēng)為包被(coating)。由于載體的不同,包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體,通常將抗原或抗體溶于緩沖液(Z常用的為pH9.6的碳酸緩沖液)中,加于ELISA板孔中在4℃,經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低,固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋,其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面,Z后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。在這種情況下,如在包被后再用1%~5%牛血清白蛋白包被一次,可以消除這種干擾。這一過(guò)程稱(chēng)為封閉(blocking)。包被好的ELISA試劑盒在低溫可放置一段時(shí)間而不失去其免疫活性。 ?。ㄋ模┟负偷孜铩 LISA中所用的酶要求純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專(zhuān)一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來(lái)源豐富、價(jià)格不貴、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定,繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。**在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。另外它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存,價(jià)格低廉,有色產(chǎn)物易于測(cè)定,光吸收高。ELISA中Z常用的酶為辣根過(guò)氧化酶(HRP)和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶(AP)。HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,純化方法也不復(fù)雜。它是一種糖蛋白,含糖量約18%;分子量為44kD;是一種復(fù)合酶,由主酶(酶蛋白)和輔基(亞鐵血紅素)結(jié)合而成的一種卟啉蛋白質(zhì)。主酶為無(wú)色糖蛋白,在275nm波長(zhǎng)處有Z高吸收峰;輔基是深棕色的含鐵卟啉環(huán).[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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生物樣品預(yù)處理-樣品冷凍干燥及結(jié)合物水解
- 生物樣品預(yù)處理-樣品冷凍干燥及結(jié)合物水解[詳細(xì)]
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2024-09-21 00:30
其它
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食品中摻假物的分析
- 食品中摻假物的分析[詳細(xì)]
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2024-09-20 13:28
其它
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石化行業(yè) 試劑甲醛中含水量的測(cè)試
- 石化行業(yè) 試劑甲醛中含水量的測(cè)試[詳細(xì)]
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2019-01-25 09:17
應(yīng)用文章
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石化行業(yè) 試劑甲醇中含水量的測(cè)定
- 石化行業(yè) 試劑甲醇中含水量的測(cè)定[詳細(xì)]
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2019-01-25 09:17
應(yīng)用文章
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中藥注射劑中絮狀物的檢測(cè)
- 中藥注射劑中絮狀物的檢測(cè)[詳細(xì)]
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2016-01-22 00:00
應(yīng)用文章
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飲用酒中芳香物的研究
- 生產(chǎn)威士忌需要將其置于木桶中陳化,以使其Z終產(chǎn)品的品質(zhì)得以全面完善。木桶中細(xì)微的條件差別可產(chǎn)生不同的風(fēng)味和香味,這就需要熟練的混合技巧,以使產(chǎn)品的品質(zhì)一致。PerkinElmerTurboMatrix頂空捕集系統(tǒng)與ClarusSQ8GC/MS和SNFR聞香儀聯(lián)合使用,可有效地鑒別飲用酒中低濃度的揮發(fā)性有機(jī)化合物(VOCs)。頂空進(jìn)樣器具有捕獲上層空間物質(zhì)的能力,以近似模擬消費(fèi)者享用少量威士忌的情況。經(jīng)氣相色譜分離后,質(zhì)譜可以鑒定那些消費(fèi)者嗅覺(jué)能夠體驗(yàn)的化合物,從而可以直接對(duì)消費(fèi)者的體驗(yàn)進(jìn)行詳細(xì)分析。頂空進(jìn)樣與人類(lèi)反應(yīng)相比,獨(dú)特的挑戰(zhàn)是測(cè)定樣品體積。由于化合物種類(lèi)多及其氣味閾值差距大,將頂空測(cè)定結(jié)果與人的鼻子直接從玻璃杯中聞到的揮發(fā)性有機(jī)物相比較時(shí),大體積蒸氣進(jìn)樣是比較合適的。為了達(dá)到該目的,利用TurboMatrix頂空捕集阱系統(tǒng)將頂空的氣體收集在吸附捕集阱中。在本應(yīng)用文獻(xiàn)中,研究了一種麥芽威士忌中的VOCs。樣品制備簡(jiǎn)單,包括移取一定體積的威士忌于樣品瓶中,蓋緊。樣品瓶中上層空間的樣品進(jìn)入氣相色譜,經(jīng)過(guò)分離,質(zhì)譜和嗅覺(jué)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)[詳細(xì)]
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2018-08-17 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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衡器在物聯(lián)網(wǎng)中的應(yīng)用
- 本文以一位木材老板外地實(shí)時(shí)查詢(xún)木材稱(chēng)重情況的事例,介紹了物聯(lián)網(wǎng)整體框架、工作原理及主要功能,從而達(dá)到人不在現(xiàn)場(chǎng)還可以監(jiān)督和處理的目的。繼而說(shuō)明衡器在物聯(lián)網(wǎng)中的現(xiàn)代化的應(yīng)用。[詳細(xì)]
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2018-11-22 17:34
期刊論文
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Orbitrap Exploris GC結(jié)合Compound Discoverer軟件分析酒中的風(fēng)味物質(zhì)及其差異性標(biāo)記物
- 酒中風(fēng)味物質(zhì)的種類(lèi)和含量十分豐富,主要包括醇類(lèi)、醛類(lèi)、酸類(lèi)、酯類(lèi)、芳香族化合物等多種類(lèi)型化合物,這些物質(zhì)是決定酒類(lèi)香氣、口感和風(fēng)格的關(guān)鍵。[詳細(xì)]
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2025-08-25 15:28
應(yīng)用文章
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石化行業(yè) 試劑二甲苯中水分含量的測(cè)定
- 石化行業(yè) 試劑二甲苯中水分含量的測(cè)定[詳細(xì)]
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2019-01-25 09:16
應(yīng)用文章
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采用島津LC-20A結(jié)合ECD723電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)物
- 采用島津LC-20A結(jié)合ECD723電化學(xué)檢測(cè)器檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)物[詳細(xì)]
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2024-09-20 23:24
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