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2024-09-16 04:16 537閱讀次數(shù)

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• ELISA常見問題

  ELISA常見問題[詳細(xì)]

  2024-09-16 04:16

  應(yīng)用文章

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• ELISA實(shí)驗(yàn)常見問題

  異常：白板結(jié)果描述：顯色步驟結(jié)束后酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對(duì)照不顯色。原因分析：試劑已過有效期，或不同試劑盒組分混用，檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對(duì)應(yīng)的試劑盒。對(duì)策：不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用。整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯(cuò)加其他試劑造成，如同時(shí)操作兩對(duì)半試劑時(shí)，測(cè)HbsAb板用于測(cè)HBsAg等；實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)所有組分均屬于對(duì)應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂，易脫落，應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。Elisa試劑盒超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)；試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行留存，受高溫影響；實(shí)驗(yàn)前檢查試劑的組分及批號(hào)，確認(rèn)試劑未過期。孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作，保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。花板，一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成，放置時(shí)間（自然放置1~2h）及離心轉(zhuǎn)（3000r/min）、離心時(shí)間（15min）應(yīng)引起注意。試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡，20分鐘左右。錯(cuò)加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，陰陽性對(duì)照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱，待測(cè)標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的，如有懷疑，可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑，酶免實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用proclin、硫柳汞等其他防腐劑，陰陽性對(duì)照正常，但質(zhì)控、參考品或個(gè)別弱陽性標(biāo)本未能檢出。不同試劑盒或不同批號(hào)的試劑不能混用酶標(biāo)對(duì)吸頭的污染以及對(duì)盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象；避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈，顯色劑在光照條件下放置過久，實(shí)驗(yàn)前已變藍(lán)，顯色劑A、B未使用前避光留存，孵育溫度過高或孵育時(shí)間過長(zhǎng)；孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時(shí)間嚴(yán)格按照說明書操作。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于2-8℃，如需長(zhǎng)期留存，應(yīng)置于-20℃以下留存。不要將ELISA試劑盒長(zhǎng)時(shí)間置于常溫下，按使用規(guī)定儲(chǔ)藏。出現(xiàn)隨機(jī)性的花板、跳孔現(xiàn)象樣品離心不完全，反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細(xì)胞成分；充分離心，3000rpm6分鐘以上。儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配，重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配，靈敏度過高、板底高、高背景終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對(duì)照、質(zhì)控正常，標(biāo)本陰性標(biāo)本，OD值過高。特別是洗滌時(shí)每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現(xiàn)象，嚴(yán)格按說明書要求洗板。洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力，確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶YZ劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。加樣時(shí)交叉污染；加標(biāo)本時(shí)盡量避免交叉污染。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

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• ELISA試劑盒常見問題及對(duì)策

  ELISA試劑盒常見問題及對(duì)策[詳細(xì)]

  2015-08-25 00:00

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• ELISA中常見問題及解決方法

  下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：1.選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2.加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）；3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。更多資料請(qǐng)下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細(xì)]

  2018-10-08 10:01

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• ELISA實(shí)驗(yàn)操作中常見問題分析

  ELISA實(shí)驗(yàn)操作中常見問題分析：由于ELISA（酶聯(lián)免疫試驗(yàn)）具有靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實(shí)驗(yàn)重要環(huán)節(jié)中的一個(gè)，但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家，我們必須對(duì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識(shí)。優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象（就是空白、陰性、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高）是各個(gè)廠家洗板機(jī)調(diào)試中經(jīng)常遇到的問題。現(xiàn)將ELISA實(shí)驗(yàn)操作中注意事項(xiàng)總結(jié)如下，以期給大家?guī)硪恍﹩l(fā)，以改善洗板機(jī)的安裝調(diào)試水平，提高臨床檢測(cè)質(zhì)量。小鼠elisa試劑盒更多資料請(qǐng)下載文件[詳細(xì)]

  2018-10-08 10:01

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• ELISA操作常見問題及其解決方法

  ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。5．溫育溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗Z為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時(shí)間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?，不同試劑盒有不同的溫育時(shí)間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時(shí)間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗板對(duì)于ELISA測(cè)定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。更多ELISA操作常見問題及其解決方法請(qǐng)見附件......[詳細(xì)]

  2024-09-30 14:23

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• ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題的解決

  ELISA操作常見問題1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國(guó)外檢測(cè)血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定，以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個(gè)別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠，樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗(yàn)的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點(diǎn)是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽性，下次測(cè)定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。5．溫育溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗Z為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時(shí)間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因?yàn)?，不同試劑盒有不同的溫育時(shí)間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時(shí)間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測(cè)定的特異性。洗板對(duì)于ELISA測(cè)定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果。7．邊緣效應(yīng)使用96孔板的ELISA測(cè)定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較ZX孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時(shí)，在外周孔與ZX孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測(cè)定的重復(fù)性。8．顯色顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時(shí)間過短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長(zhǎng)，空白或者非特異性顯色增加。9．比色比色要注意波長(zhǎng)的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長(zhǎng)為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問題。其次，單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)比色選擇的問題。所謂的單波長(zhǎng)比色即是通常的以對(duì)顯色具有Zda吸收的波長(zhǎng)如450nm或492nm進(jìn)行比色測(cè)定；而雙波長(zhǎng)雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長(zhǎng)如450nm和非敏感波長(zhǎng)如630nm下各測(cè)定一次，敏感波上下的吸光度測(cè)定值為樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長(zhǎng)下測(cè)定即改變波長(zhǎng)至一定值，使得樣本測(cè)定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時(shí)測(cè)得的吸光度即為臟物的吸光度值。Z后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長(zhǎng)下的吸光度值與非常感波長(zhǎng)下的吸光度值的差。因此，雙波長(zhǎng)比色測(cè)定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對(duì)特異顯色測(cè)定吸光度的影響的優(yōu)點(diǎn)。由于ELISA測(cè)定中單個(gè)空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測(cè)定或同次測(cè)定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測(cè)定值，故而在ELISA測(cè)定比色時(shí)，**是使用雙波長(zhǎng)比色。綜上所述，盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單，但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多，分布在測(cè)定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對(duì)常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法問題可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低1、試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng)，溫度太高盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫2、試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意4、保溫時(shí)間不足校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)5、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長(zhǎng)、洗滌次數(shù)增加按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，**一次性使用7、蒸餾水水質(zhì)有問題使用新鮮合格的蒸餾水8、底物作用時(shí)間不足準(zhǔn)確定時(shí)背景深，全部呈有色,1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染2、樣品污染樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時(shí)4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底吸嘴盡可能一次性使用5、蒸餾水被污染使用新鮮蒸餾水6、酶等試劑混用不同批號(hào)試劑勿混用7、一次實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本量過多，加樣時(shí)間太長(zhǎng)，導(dǎo)致實(shí)際反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)合理安排實(shí)驗(yàn)，避免幾塊酶標(biāo)板同時(shí)加樣重復(fù)性不佳1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與**次接近2、保溫時(shí)間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致重復(fù)測(cè)定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性3、加樣量不一致樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴出現(xiàn)白板，陽性對(duì)照不顯色顯色液變質(zhì)更換新的顯色液洗滌液配制有誤請(qǐng)按說明書所示稀釋倍數(shù)配制未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

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• ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題及解決方法

  ELISA中常見問題及解決方法ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我公司將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法1選擇試劑選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：a.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；b.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）；c.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶液濺出孔外。解決辦法：a.標(biāo)本為血清：**將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10T，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。b.加樣后及時(shí)放入孵箱。c.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。d.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，**選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。e.標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。3孵育可能原因：a.孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；b.孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法：a.貼封片或加蓋；b.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。4洗板可能原因：a.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。b.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。c.反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。解決辦法：a.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后**在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；b.合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。5顯色可能原因：a.顯色劑配制后放置時(shí)間過長(zhǎng)或使用過期顯色劑；b.加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法：a.顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；b.加樣時(shí)保持顯色劑不外流；c.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。6終止可能原因：如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。7讀板如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

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• 色譜常見問題

  色譜常見問題[詳細(xì)]

  2011-12-16 00:00

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  箱式電爐常見問題[詳細(xì)]

  2014-08-28 00:00

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  馬弗爐常見問題[詳細(xì)]

  2024-09-15 09:21

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• 電子天平常見問題

  電子天平常見問題[詳細(xì)]

  2024-09-28 01:07

  標(biāo)準(zhǔn)

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• 小鼠ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)中常見問題匯總

  小鼠ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)中常見問題匯總點(diǎn)擊次數(shù)：21發(fā)布時(shí)間：2013-8-28檢測(cè)用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑，適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，靈敏度極高。我們專業(yè)的ELISA技術(shù)服務(wù)，保證對(duì)所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底，每一份實(shí)驗(yàn)結(jié)果都真實(shí)可靠!　　小鼠ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：　　1）在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定?！　?）我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。1-3天左右檢測(cè)的樣本可儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集?biāo)本，請(qǐng)將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條液體類標(biāo)本：　　大鼠ELISA試劑盒包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等?！　?）血清：　　室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心?！　?）血漿：　　應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心?！　?）尿液：　　用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行?！　?）細(xì)胞培養(yǎng)上清：　　A、檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清?！　、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。　　5）組織標(biāo)本：　　小鼠ELISA試劑盒切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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  ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析[詳細(xì)]

  2024-09-28 12:26

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  pH計(jì)常見問題[詳細(xì)]

  2015-01-22 00:00

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  快速水質(zhì)分析儀常見問題[詳細(xì)]

  2010-06-29 00:00

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  AT自動(dòng)電位滴定儀常見問題[詳細(xì)]

  2012-05-28 00:00

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• CRYSTAF-TREF 的常見問題

  CRYSTAF-TREF 的常見問題[詳細(xì)]

  2011-09-22 00:00

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• TREF常見問題分析

  TREF常見問題分析[詳細(xì)]

  2011-09-22 00:00

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• CRYSTAF 常見問題分析

  CRYSTAF 常見問題分析[詳細(xì)]

  2011-09-22 00:00

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