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NAD 激酶(NAD kinase, NADK) 試劑盒說(shuō)明書(shū)

本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-02 10:00 8010閱讀次數(shù)

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NAD激酶(NADkinase,NADK)試劑盒說(shuō)明書(shū)(50T)一、測(cè)定意義:NADK是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一催化NAD磷酸化生成NADP的酶,可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。二、測(cè)定原理:NADK催化NAD生成NADP,NADP可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH,NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,使氧化型噻唑藍(lán)(MTT)還原為還原型MTT,通過(guò)在600nm下測(cè)定MTT的還原速度(OD值變化)可反映出NADK活性的大小。三、試驗(yàn)中所需的儀器和設(shè)備:600nm可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水四、試劑的組成和配制:提取液:60mL×1瓶,4℃保存3個(gè)月;試劑一:基質(zhì)緩沖液5mL×1瓶,4℃保存;試劑二:基質(zhì)緩沖液50mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入300μL雙蒸水充分溶解,用不完的試劑-20℃保存;試劑四:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入300μL雙蒸水充分溶解,用不完的試劑-20℃保存;試劑五:標(biāo)準(zhǔn)液1mL×1支,-20℃保存;試劑五:稀釋液10mL×1瓶,4℃保存;試劑六:粉劑×2支,-20℃保存,用時(shí)每支加入275μL雙蒸水充分溶解,用不完的試劑-20℃保存;試劑七:粉劑×1支,-20℃保存,用時(shí)加入550μL雙蒸水充分溶解,用不完的試劑4℃保存;試劑八:粉劑×1支,4℃保存,用時(shí)加入550μL雙蒸水充分溶解,用不完的試劑4℃保存;試劑九:液體×1支140μL,4℃長(zhǎng)期保存;五、粗酶液的提取:準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量,按重量體積比(g/mL)加入9倍提取液,制成10%勻漿。20000g/min離心30min,取上清液待測(cè),同時(shí)測(cè)定組織蛋白含量。上述過(guò)程必須在0-4℃環(huán)境中進(jìn)行。六、測(cè)定步驟:空白孔B標(biāo)準(zhǔn)孔S測(cè)定孔U對(duì)照孔C粗酶液(μL)2020試劑一(μL)707070試劑三(μL)5試劑四(μL)55試劑五(μL)100蒸餾水(μL)305充分混勻,35℃水浴15min,之后立即在沸水浴中煮沸2min試劑二(μL)870870870870試劑六(μL)10101010試劑七(μL)10101010試劑八(μL)10101010試劑九(μL)2.82.82.82.8充分混勻后在600nm下測(cè)定30秒的吸光值和3分鐘30秒時(shí)的吸光值注意點(diǎn):1.粗酶液的提取必須在0℃-4℃中操做完成,以防止酶變性失活。2.除試劑一外,其它所有試劑在測(cè)定過(guò)程中都必須在冰上放置。3.試劑九為有毒物質(zhì),請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。4.此試劑盒僅適用于動(dòng)植物組織中NADK活性的測(cè)定。七、動(dòng)植物組織中NADK活力單位的計(jì)算:NADP標(biāo)準(zhǔn)曲線制作:將10mmol/L的NADP標(biāo)準(zhǔn)品用試劑五中的稀釋液分別稀釋成5mmol/L、1mmol/L、0.1mmol/L溶液,按照測(cè)定操作表中標(biāo)準(zhǔn)孔體系測(cè)定不同濃度的NADP標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值差。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為:y=0.164χ+0.004(χ為NADP濃度,mmol/L;y為吸光值)推出:χ=(y0.004)÷0.164(χ為NADP濃度,mmol/L;y為吸光值)單位定義:每mg組織蛋白在在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1umolNADP為1個(gè)酶活力單位。組織中NADK活力=(U/mgprot)ΔODU:測(cè)定孔3分鐘30秒時(shí)的吸光值-30秒時(shí)的吸光值ΔODC:對(duì)照孔3分鐘30秒時(shí)的吸光值-30秒時(shí)的吸光值反應(yīng)時(shí)間:15分鐘Cprot:測(cè)試蛋白濃度0.164÷反應(yīng)時(shí)間÷Cprot(ΔODU-ΔODC)-0.004ShanghaisolarbioBioscience&TechnologyCo.,LTD上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷(xiāo)售生化試劑、實(shí)驗(yàn)耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體,并能提供技術(shù)支持的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。公司秉承“以客戶(hù)為ZX,以產(chǎn)品為保障、以誠(chéng)信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨”的發(fā)展理念,在依靠客戶(hù)的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長(zhǎng)。公司組織結(jié)構(gòu)清晰,內(nèi)部管理科學(xué),擁有一支既分工細(xì)致又高度合作的年輕化隊(duì)伍,保持了各個(gè)部門(mén)之間的GX合作運(yùn)轉(zhuǎn),充分保障了公司在充滿(mǎn)競(jìng)爭(zhēng)的市場(chǎng)中處于領(lǐng)xian地位。公司注重與業(yè)界精英合作,目前公司已經(jīng)和Amersham、Amresco、Axygen、BD、Corning、Dragon、Eppendorf、企業(yè)結(jié)成緊密的合作伙伴關(guān)系,代理其領(lǐng)xian世界的產(chǎn)品,并在全國(guó)各地設(shè)有分銷(xiāo)機(jī)構(gòu)。我們將以高度的責(zé)任感和出色的產(chǎn)品質(zhì)量為客戶(hù)提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和實(shí)驗(yàn)技術(shù)解決方案。豐富的經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)良的品質(zhì)、充足的庫(kù)存、準(zhǔn)確的交貨時(shí)間、極具競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格,所有這些都保證了我們向您提供的是Z專(zhuān)業(yè)Zyou質(zhì)的服務(wù)!立足北京,上海,輻射全國(guó),隨著產(chǎn)品營(yíng)銷(xiāo)戰(zhàn)略的不斷延伸,我們將逐步發(fā)展成為yi流的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶(hù)一起,利用各自的資源優(yōu)勢(shì)和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神,為ZG生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。為了更好、更全面的發(fā)展,現(xiàn)公司正在誠(chéng)招各地dai理商和招聘若干銷(xiāo)售、研發(fā)人員,歡迎垂詢(xún)并期待您的加入!NAD激酶(NADkinase,NADK)試劑盒上海索寶特價(jià)【021-54100800】聯(lián)系方式上海索萊寶生物科技有限公司電話(huà):021-6485566518018609966傳真:021-54261506郵編:200233地址:上海市欽江路15號(hào)14層郵箱:solarbio@126.com網(wǎng)址:www.shsolarbio.com優(yōu)質(zhì)試劑質(zhì)量放心價(jià)格Zdi為ZG生物產(chǎn)業(yè)做貢獻(xiàn)

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