本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 646閱讀次數(shù)

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• ELISA實驗常見問題

  異常：白板結(jié)果描述：顯色步驟結(jié)束后酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。原因分析：試劑已過有效期，或不同試劑盒組分混用，檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。對策：不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測HbsAb板用于測HBsAg等；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。如盛標(biāo)本的試管四周常有血痂，易脫落，應(yīng)遠(yuǎn)離酶標(biāo)板。Elisa試劑盒超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號；試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行留存，受高溫影響；實驗前檢查試劑的組分及批號，確認(rèn)試劑未過期。孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作，保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫?；ò?，一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和留存方法不當(dāng)造成，放置時間（自然放置1~2h）及離心轉(zhuǎn)（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意。試劑、樣品用前未平衡至室溫從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡，20分鐘左右。錯加、漏加試劑底物、顯色劑A或B嚴(yán)格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。實驗結(jié)束后，陰陽性對照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱，待測標(biāo)本中可能不含強(qiáng)陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的，如有懷疑，可復(fù)檢標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑，酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用proclin、硫柳汞等其他防腐劑，陰陽性對照正常，但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用酶標(biāo)對吸頭的污染以及對盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象；避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈，顯色劑在光照條件下放置過久，實驗前已變藍(lán)，顯色劑A、B未使用前避光留存，孵育溫度過高或孵育時間過長；孵育溫度應(yīng)控制在37-38℃，孵育時間嚴(yán)格按照說明書操作。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于2-8℃，如需長期留存，應(yīng)置于-20℃以下留存。不要將ELISA試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。出現(xiàn)隨機(jī)性的花板、跳孔現(xiàn)象樣品離心不完全，反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細(xì)胞成分；充分離心，3000rpm6分鐘以上。儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配，重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配，靈敏度過高、板底高、高背景終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對照、質(zhì)控正常，標(biāo)本陰性標(biāo)本，OD值過高。特別是洗滌時每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現(xiàn)象，嚴(yán)格按說明書要求洗板。洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力，確認(rèn)盛酶標(biāo)的容器不含酶YZ劑如疊氮鈉等，確認(rèn)配制洗液的容器已洗干凈。加樣時交叉污染；加標(biāo)本時盡量避免交叉污染。[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA實驗中常見問題的解決

  ELISA操作常見問題1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。5．溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結(jié)果。7．邊緣效應(yīng)使用96孔板的ELISA測定中，常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)”，即外周孔顯色較ZX孔深。經(jīng)研究證實在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體，在實驗室的常規(guī)ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與ZX孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應(yīng)”，并且可提高測定的重復(fù)性。8．顯色顯色一定要控制時間,根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時間過短，結(jié)果偏低；顯色時間過長，空白或者非特異性顯色增加。9．比色比色要注意波長的選擇。以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用，而前者比色波長為450nm，后者為492nm，濾光片需根據(jù)要求隨時更換。因此，容易出現(xiàn)濾光片錯用的問題。其次，單波長或雙波長比色選擇的問題。所謂的單波長比色即是通常的以對顯色具有Zda吸收的波長如450nm或492nm進(jìn)行比色測定；而雙波長雙色則酶標(biāo)儀在敏感波長如450nm和非敏感波長如630nm下各測定一次，敏感波上下的吸光度測定值為樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度與板孔上指紋、刮痕、灰塵等臟物所致的吸光度之和；非敏感波長下測定即改變波長至一定值，使得樣本測定酶反應(yīng)特異顯色的吸光度值為零，此時測得的吸光度即為臟物的吸光度值。Z后酶標(biāo)儀給出的數(shù)值為敏感波長下的吸光度值與非常感波長下的吸光度值的差。因此，雙波長比色測定具有能排除由微滴板本身、板孔內(nèi)標(biāo)本的非特異吸收、指紋、刮痕、灰塵等對特異顯色測定吸光度的影響的優(yōu)點。由于ELISA測定中單個空白孔的非特異吸收上有一定程度的不確定性，也就是說每次測定或同次測定空白孔位置的不同均有可能得到不同吸光度測定值，故而在ELISA測定比色時，**是使用雙波長比色。綜上所述，盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結(jié)果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。操作過程中可能出現(xiàn)的問題和解決方法問題可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低1、試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高盡量縮短運輸時間，夏季應(yīng)放冰塊降溫2、試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。3、培養(yǎng)箱溫度不足37℃注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意4、保溫時間不足校正定時鐘準(zhǔn)確定時5、洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數(shù)增加按說明書要求保留洗滌時間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)6、移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，**一次性使用7、蒸餾水水質(zhì)有問題使用新鮮合格的蒸餾水8、底物作用時間不足準(zhǔn)確定時背景深，全部呈有色,1、洗滌不充分，洗后未拍干，樣品中其它成分殘留或酶標(biāo)記物殘留濃縮洗液準(zhǔn)確配制；10倍濃縮洗滌液如有結(jié)晶則應(yīng)讓結(jié)晶于室溫全部溶解后再量取稀釋；充分洗滌，徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應(yīng)棄去不用，不要反復(fù)使用，否則易造成污染2、樣品污染樣品應(yīng)新鮮采集，或低溫保存，防止污染3、培養(yǎng)箱溫度超過37℃或反應(yīng)時間過長調(diào)整培養(yǎng)箱溫度，準(zhǔn)確定時4、吸嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不徹底吸嘴盡可能一次性使用5、蒸餾水被污染使用新鮮蒸餾水6、酶等試劑混用不同批號試劑勿混用7、一次實驗的標(biāo)本量過多，加樣時間太長，導(dǎo)致實際反應(yīng)時間延長合理安排實驗，避免幾塊酶標(biāo)板同時加樣重復(fù)性不佳1、樣品數(shù)量多少不一，加樣時間有長有短重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與**次接近2、保溫時間不一致，洗滌條件不一致，操作人員不一致重復(fù)測定標(biāo)本，操作條件、人員等應(yīng)盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成的不一致的可能性3、加樣量不一致樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴出現(xiàn)白板，陽性對照不顯色顯色液變質(zhì)更換新的顯色液洗滌液配制有誤請按說明書所示稀釋倍數(shù)配制未加酶結(jié)合物而認(rèn)為已加入注意不要漏加終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜镆菏褂妹看渭右呵熬鶓?yīng)看清標(biāo)簽[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

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• ELISA實驗中常見問題及解決方法

  ELISA中常見問題及解決方法ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我公司將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法1選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2加樣可能原因：a.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；b.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；c.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶液濺出孔外。解決辦法：a.標(biāo)本為血清：**將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10T，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。b.加樣后及時放入孵箱。c.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。d.如果采用AT或其他全自動加樣，**選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。e.標(biāo)本較多時，請分批操作。3孵育可能原因：a.孵育時未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗徹底；b.孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法：a.貼封片或加蓋；b.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間。4洗板可能原因：a.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。b.采用半自動洗板機(jī)洗板時，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。c.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：a.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后**在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干；b.合理安排，或多用幾臺洗板機(jī)。5顯色可能原因：a.顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑；b.加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法：a.顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用；b.加樣時保持顯色劑不外流；c.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。6終止可能原因：如加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。7讀板如讀板時板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸;盡可能實現(xiàn)ELISA檢測標(biāo)準(zhǔn)自動化，有效提高檢測質(zhì)量。在實際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測每一份標(biāo)本，才能保證檢測質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動酶標(biāo)儀，這對于實現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。[詳細(xì)]

  2018-09-02 10:00

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• 小鼠ELISA試劑盒在實驗中常見問題匯總

  小鼠ELISA試劑盒在實驗中常見問題匯總點擊次數(shù)：21發(fā)布時間：2013-8-28檢測用所有試劑全部都為進(jìn)口試劑，適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，靈敏度極高。我們專業(yè)的ELISA技術(shù)服務(wù)，保證對所售任何產(chǎn)品一概負(fù)責(zé)到底，每一份實驗結(jié)果都真實可靠!　　小鼠ELISA試劑盒注意事項：　　1）在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定?！　?）我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測，對收集后及時進(jìn)行檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集?biāo)本，請將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條液體類標(biāo)本：　　大鼠ELISA試劑盒包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等?！　?）血清：　　室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心?！　?）血漿：　　應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心?！　?）尿液：　　用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行?！　?）細(xì)胞培養(yǎng)上清：　　A、檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。　　B、檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。　　5）組織標(biāo)本：　　小鼠ELISA試劑盒切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。[詳細(xì)]

  2018-09-19 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA常見問題

  ELISA常見問題[詳細(xì)]

  2024-09-16 04:16

  應(yīng)用文章

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• ELISA試劑盒常見問題及對策

  ELISA試劑盒常見問題及對策[詳細(xì)]

  2015-08-25 00:00

  選購指南

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• ELISA中常見問題及解決方法

  下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法：1.選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。2.加樣可能原因：1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）；3）加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。更多資料請下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細(xì)]

  2018-10-08 10:01

  產(chǎn)品樣冊

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• ELISA實驗操作中常見問題分析

  ELISA實驗操作中常見問題分析：由于ELISA（酶聯(lián)免疫試驗）具有靈敏度較高、特異性好的特點，已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實驗重要環(huán)節(jié)中的一個，但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家，我們必須對影響ELISA實驗結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識。優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象（就是空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高）是各個廠家洗板機(jī)調(diào)試中經(jīng)常遇到的問題?，F(xiàn)將ELISA實驗操作中注意事項總結(jié)如下，以期給大家?guī)硪恍﹩l(fā)，以改善洗板機(jī)的安裝調(diào)試水平，提高臨床檢測質(zhì)量。小鼠elisa試劑盒更多資料請下載文件[詳細(xì)]

  2018-10-08 10:01

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• ELISA操作常見問題及其解決方法

  ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以降低非特異性反應(yīng)，使特異性的抗原抗體反應(yīng)充分體現(xiàn)出來。一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴(yán)格按使用說明書操作，如某些產(chǎn)品應(yīng)取10μl樣品進(jìn)行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進(jìn)行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)確，檢測結(jié)果出現(xiàn)問題。2．試劑盒平衡試劑盒中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應(yīng)不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。3．樣品和試劑的混勻稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。4．加樣在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。5．溫育溫育是ELISA測定中影響測定成敗Z為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。Z為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。一些操作者，擅自改變說明書操作，使用自己喜歡的溫育時間和溫育溫度，這樣造成一些不必要的麻煩。因為，不同試劑盒有不同的溫育時間和溫育溫度的選擇，隨意更改溫育時間或者溫育溫度將導(dǎo)致試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。6．洗板固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù)，需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來，以保證ELISA測定的特異性。洗板對于ELISA測定來說，也是極其關(guān)鍵的一步。洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘，甩去板孔中洗液后，一定要大力拍干；及時更換吸水紙，尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去，否則可能影響試驗結(jié)果。更多ELISA操作常見問題及其解決方法請見附件......[詳細(xì)]

  2024-09-30 14:23

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  2024-09-19 03:52

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  2009-03-09 00:00

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  Elisa實驗比色方法，酶標(biāo)比色儀簡稱酶標(biāo)儀，通常指專用于測讀ELISA結(jié)果吸光度的光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設(shè)計。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要性能指標(biāo)有：測讀速度、讀數(shù)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、極ng確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標(biāo)儀的讀數(shù)一般可極ng確到0.001，準(zhǔn)確性為±1%，重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說，若某孔測得的A值為1.083，則該孔相對于空氣的真實A值應(yīng)為1.083±0.01（1.073~1.093），重復(fù)測定數(shù)次，其A值均應(yīng)1.083±0.05（1.078~1.088）在之間。酶標(biāo)儀的可測范圍視各酶標(biāo)儀的性能而不同。普通的酶標(biāo)儀在0.000~2.000，新型號的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900，甚至更高。超出可測上限的A值常以"*"或"over"或其它符號表示。應(yīng)注意可測范圍與線性范圍的不同，線性范圍常小于可測范圍，比如某一酶標(biāo)儀的可測范圍為0.000~2.900，而其線性范圍僅0.000~2.000，這在定量ELISA中制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時應(yīng)予注意。酶標(biāo)儀不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時室溫宜在15~30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。Elisa實驗比色方法，測讀A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波長。有的酶標(biāo)儀可用雙波長式測讀，即每孔先后測讀兩次，**次在Z適波長（W1），第二次在不敏感波長（W2），兩次測定間不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm為W1，630nm為W2，Z終測得的A值為兩者之差（W1-W2）。雙波長式測讀可減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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