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48T大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA 檢測試劑盒

本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2018-09-27 10:00 503閱讀次數(shù)

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大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿試驗(yàn)原理:ACTH試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知ACTH濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將ACTH和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ACTH的濃度呈比例關(guān)系。自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測試劑盒安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測試劑盒試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的ACTH標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的ACTH含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-800pg/ml4、敏感度:1.0pg/mlDimethylyellow二甲基黃[60-11-7]25gDimethylyellow二甲基黃[60-11-7]25gDimetridazole二甲硝咪唑[551-92-8]100g2,4-Dinitrobenzaldehyde2,4-二硝基苯甲醛[528-75-6]25g1,3-Dinitrobenzene1,3二硝基苯[99-65-0]25g大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素ELISA檢測試劑盒3,5-Dinitrobenzoicacid3,5-二硝基苯甲酸[99-34-3]25g2,4-Dinitrophenylhydrazine2,4-二硝基苯肼[119-26-6]25g2,4-Dinitrophenylhydrazine2,4-二硝基苯肼[119-26-6]100g3,5-Dinitrosalicylicacid二硝基水楊酸[609-99-4]100g3,5-Dinitrosalicylicacid二硝基水楊酸[609-99-4]500g3,5-Dinitro-o-toluamide二硝托胺[148-01-6]250g2,4-Dinitrotoluene2,4二硝基甲苯[121-14-2]250g1,4-Dioxane二氧六烷[123-91-1]500mlDiphenylamine二苯胺[122-39-4]250g1,4-Diphenylbenzene對三聯(lián)苯[92-94-4]100g1,5-Diphenylcarbazide二苯基羰酰二肼[140-22-7]100gsym-Diphenylcarbazone苯基富馬酸[538-62-5]25gDiphenylmethanol二苯甲醇[91-01-0]250gN,N-Diphenylguanidine二苯胍[102-06-7]100gDiphenhydraminehydrochloride鹽酸苯海拉明[147-24-0]250gDiphenylmethane二苯基甲烷[101-81-5]100gDiphenylsulfone二苯砜[127-63-9]10gN,N’-Diphenylthiourea對稱二苯硫脲[102-08-9]25gN,N’-Diphenylurea1,3-二苯基脲[102-07-8]250gN,N’-Diphenylurea1,3-二苯基脲[102-07-8]1kgDIPSOfreeacid3-(N-N-雙(2-羥乙基)氨基)-2-羥基丙磺酸[68399-80-4]25g3-[N,N-bis(2-hydroyethyl)amino-2-hydroxypropanesulfonicacid]sodiumsalt3-(N-N-雙(2-羥乙基)氨基)-2-羥基丙磺酸鈉鹽[102783-62-0]50g

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