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促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒準確性

本文由 研域(上海)化學試劑有限公司 整理匯編

2018-09-19 10:00 312閱讀次數(shù)

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促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒用于測定猴血清、血漿及相關液體樣本中促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)含量。實驗原理促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)水平。用純化的猴促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH),再與HRP標記的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中猴促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)濃度。準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。靈敏度:Zdi檢測濃度小于10pg/ml。特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒操作步驟1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

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