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胰島素ELISA試劑盒

本文由 深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司 整理匯編

2018-11-14 10:00 476閱讀次數(shù)

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Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4胰島素ELISA試劑盒(德國(guó)DRG:EIA2935)1、前言說明DRG公司的胰島素酶免試劑盒可用于人血清和血漿中(加入了肝素或檸檬酸的血漿)胰島素的定量檢測(cè)。此檢測(cè)試劑盒僅供體外診斷用。胰島素是調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的主要激素,它由朗格漢氏小島的β細(xì)胞合成分泌,并以前胰島素的前體形式存在,前胰島素可加工形成C肽和胰島素。這兩種激素都以等量形式分泌到門脈循環(huán)中。成熟的胰島素分子由兩條多肽鏈組成,A鏈和B鏈(分別21個(gè)和30個(gè)氨基酸)。這兩條鏈通過鍵內(nèi)二硫鍵而連接到一起。胰島素的分泌主要受血漿葡萄糖濃度的影響,這種激素有一系列重要的代謝功能。它的主要功能是通過葡萄糖的運(yùn)送來控制外周組織中葡萄糖的攝取和利用。胰島素和其它低血糖激素的作用(如YZ肝糖原的異生和糖原分解)可被高血糖激素(胰高血糖素,腎上腺素,生長(zhǎng)激素和皮質(zhì)醇)的作用中和掉。在胰島素依賴性的糖尿?。↖DDM)和其它疾病例如垂體機(jī)能減退疾病中,胰島素的濃度會(huì)明顯降低。在非胰島素依賴性的糖尿病患者、肥胖患者、胰島素瘤患者和一些內(nèi)分泌功能紊亂(如庫(kù)欣綜合癥和支端肥大癥)患者的體內(nèi),其胰島素的水平會(huì)上升。2、實(shí)驗(yàn)原理DRG公司的胰島素酶免實(shí)驗(yàn)是一種基于夾心法原理的固相酶聯(lián)免吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA),反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔包被有能結(jié)合胰島素分子上獨(dú)特抗原位點(diǎn)的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性胰島素的病人樣本在包被孔中與酶聯(lián)物進(jìn)行孵育,該酶聯(lián)物是一種生物素標(biāo)記的抗胰島素抗體。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物。在第二次溫育時(shí),鏈親和素過氧酶復(fù)合物結(jié)合到生物素化抗胰島素抗體上,過氧酶復(fù)合物的結(jié)合量與樣品中胰島素的濃度成正比。加入底物液后,所顯示的顏色強(qiáng)度與病人樣品中胰島素的濃度成正比。3、試劑盒成分1)微孔板:12×8,96孔,包被抗胰島素的單克隆抗體。2)零標(biāo)準(zhǔn)品:1支,3ml,即用,0μIU/ml。3)標(biāo)準(zhǔn)品1-5:5支,1ml,即用,6.25;12.5;25;50;100μlU/ml。4)酶聯(lián)物:1支,5ml,即用,生物素化的鼠單克隆抗體。5)酶復(fù)合物:1支,7ml,即用,辣根過氧化物-鏈親和素復(fù)合物。6)TMB底物液:1支14ml即用。7)終止液:1支14ml即用包含0.5M硫酸,請(qǐng)勿接觸終止液,以免刺激或著燒皮膚。8)洗滌液:1瓶,30ml,40倍濃縮,見試劑準(zhǔn)備。注意:用樣品稀釋的零標(biāo)準(zhǔn)品視需要而定。4、實(shí)驗(yàn)所需材料(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀2)標(biāo)準(zhǔn)移液器3)吸水紙4)蒸餾水5、試劑的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性所有的未開啟的試劑在2-8℃下儲(chǔ)存至保質(zhì)期,不要使用過期的試劑。所有開啟的試劑應(yīng)在2-8℃下儲(chǔ)存。一旦打開微孔板的包裝,需將其重新密封。6、樣品的準(zhǔn)備將所有的試劑和所需要的板條在使用前平衡至室溫。洗滌液:用1170ml的蒸餾水稀釋30ml濃縮的洗滌液,Z終得到的容積為1200ml,稀釋好的洗滌液在室溫下可穩(wěn)定存放兩個(gè)星期。7、樣品的收集此ELISA試劑盒可使用血清也可使用(只有肝素或檸檬酸鹽抗凝的血漿)血漿作為樣品。不能使用明顯溶血黃疸和脂血的樣品。血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下離心分離血清。血漿:將全血采集到含有抗凝劑的離心管,采集后立即離心分離。8、樣品的儲(chǔ)存:樣品蓋好蓋子后,可在實(shí)驗(yàn)前2-8℃下儲(chǔ)存5天,要更長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存,應(yīng)在-20℃下凍存。在開始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品。9、樣品的稀釋:在**次實(shí)驗(yàn)中,要是樣品的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品,則樣品應(yīng)用按實(shí)驗(yàn)步驟所描述的10倍或100倍稀釋。在計(jì)算濃度時(shí)需乘以此稀釋度。例子:a)按1:10稀釋:10μL的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)。b)按1:100釋?。?0μL按a)稀釋的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)10、實(shí)驗(yàn)步驟所有的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須做雙份檢測(cè)以確保所有微孔的檢測(cè)條件都一樣。1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。。2)用一次性吸嘴將標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和樣品分別25μL加入相應(yīng)的檢測(cè)孔中。3)每孔加入25μL的酶聯(lián)物。4)充分混合10秒,在此步驟中充分混合非常重要。5)室溫下溫育30分鐘。6)快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物,每孔加入400μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確操作會(huì)明顯影響實(shí)驗(yàn)的靈敏度和極ng確度。7)每孔加入50μL的酶復(fù)合物。8)在室溫下溫育30分鐘。9)快速棄去檢測(cè)孔中的內(nèi)含物,每孔加入400μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。10)每孔加入50μL的底物液。11)在室溫下溫育15分鐘。12)每孔加入50μL的終止液終止反應(yīng)。13)在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值。11、計(jì)算結(jié)果:1)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和病人樣品的平均吸光度。2)以吸光率為Y軸,濃度為X軸,按照從標(biāo)準(zhǔn)品中獲得的平均吸光率和其相對(duì)應(yīng)的濃度值,繪制一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)利用樣品的平均吸光率,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出其相應(yīng)的濃度值,4)自動(dòng)方法:使用計(jì)算機(jī)三次方模式四參數(shù)模式或雙對(duì)數(shù)函數(shù)的計(jì)算機(jī)程序可得到結(jié)果。5)樣品的濃度可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。樣品的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的濃度則需進(jìn)一步稀釋。在計(jì)算濃度的時(shí)候,要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。下面是胰島素ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線的典型例子。標(biāo)準(zhǔn)品吸光率(450nm)零標(biāo)準(zhǔn)品(0μIU/ml)0.03標(biāo)準(zhǔn)品1(6.25μIU/ml)0.07標(biāo)準(zhǔn)品2(12.5μIU/ml)0.14標(biāo)準(zhǔn)品3(25μIU/ml)0.35標(biāo)準(zhǔn)品4(50μIU/ml)0.88標(biāo)準(zhǔn)品5(100μIU/ml)2.05參考值:建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的正常值與非正常值。在一明顯正常成年人的研究中,用DRG公司的胰島素ELISA試劑盒進(jìn)行檢測(cè)得到如下數(shù)值:2-25μIU/ml本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431

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