本文由 上海恪敏生物科技有限公司 整理匯編

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• Human VEGF Immunoassay Quantikine ELISA

  QuantikineELISAThispackageinsertmustbereadinitsentiretybeforeusingthisproduct.Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.CatalogNumberDVE00CatalogNumberSVE00CatalogNumberPDVE00ForthequantitativedeterminationofhumanVascularEndothelialGrowthFactor（VEGF）concentrationsincellculturesupernates,serum,andplasma.MANUFACTUREDANDDISTRIBUTEDBY:USA&Canada|R&DSystems,Inc.614McKinleyPlaceNE,Minneapolis,MN55413,USATEL:（800）343-7475（612）379-2956FAX:（612）656-4400E-MAIL:info@RnDSystems.comDISTRIBUTEDBY:UK&Europe|R&DSystemsEurope,Ltd.19BartonLane,AbingdonSciencePark,AbingdonOX143NB,UKTEL:+44（0）1235529449FAX:+44（0）1235533420E-MAIL:info@RnDSystems.co.ukChina|R&DSystemsChinaCo.,Ltd.24A1HuaMinEmpirePlaza,726WestYanAnRoad,ShanghaiPRC200050TEL:+86（21）52380373FAX:+86（21）52371001E-MAIL:info@RnDSystemsChina.com.cnTABLEOFCONTENTSSECTIONPAGEINTRODUCTION.....................................................................................................................................................................1PRINCIPLEOFTHEASSAY...................................................................................................................................................2LIMITATIONSOFTHEPROCEDURE.................................................................................................................................2TECHNICALHINTS.................................................................................................................................................................2MATERIALSPROVIDED&STORAGECONDITIONS...................................................................................................3OTHERSUPPLIESREQUIRED.............................................................................................................................................4PRECAUTIONS.........................................................................................................................................................................4SAMPLECOLLECTION&STORAGE.................................................................................................................................4REAGENTPREPARATION.....................................................................................................................................................SSAYPROCEDURE.............................................................................................................................................................6CALCULATIONOFRESULTS...............................................................................................................................................7TYPICALDATA.........................................................................................................................................................................7PRECISION................................................................................................................................................................................8RECOVERY................................................................................................................................................................................8SENSITIVITY.............................................................................................................................................................................8LINEARITY.................................................................................................................................................................................9CALIBRATION..........................................................................................................................................................................9SAMPLEVALUES..................................................................................................................................................................10SPECIFICITY...........................................................................................................................................................................11REFERENCES.........................................................................................................................................................................12PLATELAYOUT.....................................................................................................................................................................13www.RnDSystems.com1INTRODUCTIONVascularendothelialgrowthfactor（VEGForVEGF-A）,alsoknownasvascularpermeabilityfactor（VPF）,isapotentmediatorofbothangiogenesisandvasculogenesisinthefetusandadult（1-3）.ItisamemberofthePDGFfamilythatischaracterizedbythepresenceofeightconservedcysteineresiduesinacystineknotstructureandtheformationofantiparalleldisulfide-linkeddimers（4）.Humansexpressalternatelysplicedisoformsof121,145,165,183,189,and206aminoacids（aa）inlength（4）.VEGF165appearstobethemostabundantandpotentisoform,followedbyVEGF121andVEGF189（3,4）.IsoformsotherthanVEGF121containbasicheparin-bindingregionsandarenotfreelydiffusible（4）.HumanVEGF165shares88%aasequenceidentitywithcorrespondingregionsofmouseandratVEGF.VEGFisexpressedinmultiplecellsandtissuesincludingskeletalandcardiacmuscle（5,6）,hepatocytes（7）,osteoblasts（8）,neutrophils（9）,macrophages（10）,keratinocytes（11）,brownadiposetissue（12）,CD34+stemcells（13）,endothelialcells（14）,fibroblasts,andvascularsmoothmusclecells（15）.VEGFexpressionisinducedbyhypoxiaandcytokinessuchasIL-1,IL-6,IL-8,oncostatinMandTNF-α（3,4,9,16）.VEGFisoformsaredifferentiallyexpressedduringdevelopmentandintheadult（3）.VEGFdimersbindtotworelatedreceptortyrosinekinases,VEGFR1（alsocalledFlt-1）andVEGFR2（Flk-1/KDR）,andinducetheirhomodimerizationandautophosphorylation（3,4,7,17,18）.Thesereceptorshavesevenextracellularimmunoglobulin-likedomainsandanintracellularsplittyrosinekinasedomain.Theyareexpressedonvascularendothelialcellsandarangeofnon-endothelialcells.AlthoughVEGFaffinityishighestforbindingtoVEGFR1,VEGFR2appearstobetheprimarymediatorofVEGFangiogenicactivity（3,4）.VEGF165alsobindsthesemaphorinreceptor,neuropilin-1,whichpromotescomplexformationwithVEGFR2（19）.VEGFisbestknownforitsroleinvasculogenesis.Duringembryogenesis,VEGFregulatestheproliferation,migration,andsurvivalofendothelialcells（3,4）,thusregulatingbloodvesseldensityandsize,butplayingnoroleindeterminingvascularpatterns.VEGFpromotesboneformationthroughosteoblastandchondroblastrecruitmentandisalsoamonocytechemoattractant（20-22）.Afterbirth,VEGFmaintainsendothelialcellintegrityandisapotentmitogenformicro-andmacro-vascularendothelialcells.Inadults,VEGFfunctionsmainlyinwoundhea領(lǐng)andthefemalereproductivecycle（3）.Indiseasedtissues,VEGFpromotesvascularpermeability.Itisthusthoughttocontributetotumormetastasisbypromotingbothextravasationandtumorangiogenesis（23,24）.VariousstrategieshavebeenemployedtherapeuticallytoantagonizeVEGF-mediatedtumorangiogenesis（25）.CirculatingVEGFlevelscorrelatewithdiseaseactivityinautoimmunediseasessuchasrheumatoidarthritis,multiplesclerosisandsystemiclupuserythematosus（26）.TheQuantikineHumanVEGFImmunoassayisa4.5hoursolidphaseELISAdesignedtomeasureVEGF165levelsincellculturesupernates,serum,andplasma.ItcontainsSf21-expressedrecombinanthumanVEGF165andantibodiesraisedagainsttherecombinantprotein.ResultsobtainedfornaturallyoccurringhumanVEGFandrecombinanthumanVEGF121showedlinearcurvesthatwereparalleltothestandardcurvesobtainedusingtheQuantikineHumanVEGFImmunoassaystandards.TheseresultsindicatethatthiskitcanbeusedtodeterminerelativemassvaluesfornaturalhumanVEGF.2Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.PRINCIPLEOFTHEASSAYThisassayemploysthequantitativesandwichenzymeimmunoassaytechnique.AmonoclonalantibodyspecificforVEGFhasbeenpre-coatedontoamicroplate.StandardsandsamplesarepipettedintothewellsandanyVEGFpresentisboundbytheimmobilizedantibody.Afterwashingawayanyunboundsubstances,anenzyme-linkedpolyclonalantibodyspecificforVEGFisaddedtothewells.Followingawashtoremoveanyunboundantibody-enzymereagent,asubstratesolutionisaddedtothewellsandcolordevelopsinproportiontotheamountofVEGFboundintheinitialstep.Thecolordevelopmentisstoppedandtheintensityofthecolorismeasured.LIMITATIONSOFTHEPROCEDUREFORRESEARCHUSEONLY.NOTFORUSEINDIAGNOSTICPROCEDURES.Thekit首ldnotbeusedbeyondtheexpirationdateonthekitlabel.Donotmixorsubstitutereagentswiththosefromotherlotsorsources.ItisimportantthattheCalibratorDiluentselectedforthestandardcurvebeconsistentwiththesamplesbeingassayed.Ifsamplesgeneratevalueshigherthanthehigheststandard,dilutethesampleswiththeappropriateCalibratorDiluentandrepeattheassay.Anyvariationinstandarddiluent,operator,pipettingtechnique,washingtechnique,incubationtimeortemperature,andkitagecancausevariationinbinding.Variationsinsamplecollection,processing,andstoragemaycausesamplevaluedifferences.Thisassayisdesignedtoeliminateinterferencebysolublereceptors,bindingproteins,andotherfactorspresentinbiologicalsamples.UntilallfactorshavebeentestedintheQuantikineImmunoassay,thepossibilityofinterferencecannotbeexcluded.TECHNICALHINTSWhenmixingorreconstitutingproteinsolutions,alwaysavoidfoaming.Toavoidcross-contamination,changepipettetipsbetweenadditionsofeachstandardlevel,betweensampleadditions,andbetweenreagentadditions.Also,useseparatereservoirsforeachreagent.Toensureaccurateresults,properadhesionofplatesealersduringincubationstepsisnecessary.Whenusinganautomatedplatewasher,addinga30secondsoakperiodfollowingtheadditionofWashBuffer,and/orrotatingtheplate180degreesbetweenwashstepsmayimproveassayprecision.SubstrateSolution首ldremaincolorlessuntiladdedtotheplate.KeepSubstrateSolutionprotectedfromlight.SubstrateSolution首ldchangefromcolorlesstogradationsofblue.StopSolution首ldbeaddedtotheplateinthesameorderastheSubstrateSolution.ThecolordevelopedinthewellswillturnfrombluetoyellowuponadditionoftheStopSolution.WellsthataregreenincolorindicatethattheStopSolutionhasnotmixedthoroughlywiththeSubstrateSolution.www.RnDSystems.com3MATERIALSPROVIDED&STORAGECONDITIONSStoretheunopenedkitat2-8°C.Donotusepastkitexpirationdate.PARTPART#CATALOG#DVE00CATALOG#SVE00DESCRIPTIONSTORAGEOFOPENED/RECONSTITUTEDMATERIALVEGFMicroplate8902181plate6plates96wellpolystyrenemicroplate（12stripsof8wells）coatedwithamousemonoclonalantibodyagainstVEGF.Returnunusedwellstothefoilpouchcontainingthedesiccantpack.Resealalongentireedgeofzip-seal.Maybestoredforupto1monthat2-8°C.*VEGFStandard8902203vials18vials2000pg/vialofrecombinantVEGF165inabufferedproteinbasewithpreservatives;lyophilized.DiscardtheVEGFstocksolutionanddilutionsafter4hours.Useafreshstandardforeachassay.VEGFConjugate8902191vial6vials21mL/vialofapolyclonalantibodyagainstVEGFconjugatedtohorseradishperoxidasewithpreservatives.Maybestoredforupto1monthat2-8°C.*AssayDiluentRD1W8951171vial6vials11mL/vialofabufferedproteinbasewithpreservatives.CalibratorDiluentRD5K8951191vial6vials21mL/vialofabufferedproteinbasewithpreservatives.Forcellculturesupernatesamples.CalibratorDiluentRD6U8951481vial6vials21mL/vialofanimalserumwithpreservatives.Forserum/plasmasamples.WashBufferConcentrate8950031vial6vials21mL/vialofa25-foldconcentratedsolutionofbufferedsurfactantwithpreservatives.ColorReagentA8950001vial6vials12mL/vialofstabilizedhydrogenperoxide.ColorReagentB8950011vial6vials12mL/vialofstabilizedchromogen（tetramethylbenzidine）.StopSolution8950321vial6vials6mL/vialof2Nsulfuricacid.PlateSealersN/A4strips24stripsAdhesivestrips.*Providedthisiswithintheexpirationdateofthekit.DVE00containssufficientmaterialstorunanELISAonone96wellplate.SVE00（SixPak）containssufficientmaterialstorunELISAsonsix96wellplates.ThiskitisalsoavailableinaPharmPak（R&DSystems,Catalog#PDVE00）.PharmPakscontainsufficientmaterialstorunELISAson50microplates.Specificvialcountsofeachcomponentmayvary.Pleaserefertotheliteratureaccompanyingyourorderforspecificvialcounts.4Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.OTHERSUPPLIESREQUIREDMicroplatereadercapableofmeasuringabsorbanceat450nm,withthecorrectionwavelengthsetat540nmor570nm.Pipettesandpipettetips.Deionizedordistilledwater.Squirtbottle,manifolddispenser,orautomatedmicroplatewasher.500mLgraduatedcylinder.Polypropylenetesttubesfordilutionofstandards.HumanVEGFControls（optional;availablefromR&DSystems）.PRECAUTIONSCalibratorDiluentRD6Ucontainssodiumazidewhichmayreactwithleadandcopperplumbingtoformexplosivemetallicazides.Flushwithlargevolumesofwaterduringdisposal.VEGFisdetectableinsaliva.Takeprecautionarymeasurestopreventcontaminationofthekitreagentswhilerunningtheassay.TheStopSolutionprovidedwiththiskitisanacidsolution.Wearprotectivegloves,clothing,eye,andfaceprotection.Washhandsthoroughlyafterhand領(lǐng).SAMPLECOLLECTION&STORAGEThesamplecollectionandstorageconditionslistedbelowareintendedasgeneralguidelines.Samplestabilityhasnotbeenevaluated.CellCultureSupernates-Cellculturesupernates首ldcontainatleast1%fetalcalfserumforstabilityoftheVEGF.Removeparticulatesbycentrifugationandassayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat≤-20°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Serum-Useaserumseparatortube（SST）andallowsamplestoclotfor30minutesbeforecentrifugationfor15minutesat1000xg.Removeserumandassayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat≤-20°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.Plasma-CollectplasmausingEDTA,heparin,orcitrateasananticoagulant.Centrifugefor15minutesat1000xgwithin30minutesofcollection.Assayimmediatelyoraliquotandstoresamplesat≤-20°C.Avoidrepeatedfreeze-thawcycles.www.RnDSystems.com5REAGENTPREPARATIONBringallreagentstoroomtemperaturebeforeuse.WashBuffer-Ifcrystalshaveformedintheconcentrate,warmtoroomtemperatureandmixgentlyuntilthecrystalshavecompletelydissolved.Dilute20mLofWashBufferConcentrateintodeionizedordistilledwatertoprepare500mLofWashBuffer.SubstrateSolution-ColorReagentsAandB首ldbemixedtogetherinequalvolumeswithin15minutesofuse.Protectfromlight.200μLoftheresultantmixtureisrequiredperwell.VEGFStandard-ReconstitutetheVEGFStandardwith1.0mLofCalibratorDiluentRD5K（forcellculturesupernatesamples）orCalibratorDiluentRD6U（forserum/plasmasamples）.Thisreconstitutionproducesastocksolutionof2000pg/mL.Allowthestandardtositforaminimumof15minuteswithgentleagitationpriortomakingdilutions.ForCellCultureSupernateSamples:Usepolypropylenetubes.Pipette500μLofCalibratorDiluentRD5Kintoeachtube.Usethestocksolutiontoproduceadilutionseries（below）.Mixeachtubethoroughlybeforethenexttransfer.The1000pg/mLdilutionservesasthehighstandard.CalibratorDiluentRD5Kservesasthezerostandard（0pg/mL）.500μLStd.2000pg/mL1000pg/mL500pg/mL250pg/mL125pg/mL62.5pg/mL31.2pg/mL15.6pg/mL500μL500μL500μL500μL500μL500μL500μLStd.2000pg/mL1000pg/mL500pg/mL250pg/mL125pg/mL62.5pg/mL31.2pg/mL500μL500μL500μL500μL500μLForSerum/PlasmaSamples:Usepolypropylenetubes.Pipette500μLofCalibratorDiluentRD6Uintoeachtube.Usethestocksolutiontoproduceadilutionseries（below）.Mixeachtubethoroughlybeforethenexttransfer.Theundilutedstandardservesasthehighstandard（2000pg/mL）.CalibratorDiluentRD6Uservesasthezerostandard（0pg/mL）6Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.ASSAYPROCEDUREBringallreagentsandsamplestoroomtemperaturebeforeuse.Itisrecommendedthatallstandards,samples,andcontrolsbeassayedinduplicate.1.Prepareallreagents,workingstandards,andsamplesasdirectedintheprevioussections.2.Removeexcessmicroplatestripsfromtheplateframe,returnthemtothefoilpouchcontainingthedesiccantpack,andreseal.3.ForCellCultureSupernateSamples:Add50μLofAssayDiluentRD1Wtoeachwell.ForSerum/PlasmaSamples:Add100μLofAssayDiluentRD1Wtoeachwell.4.ForCellCultureSupernateSamples:Add200μLofStandard,control,orsampleperwell.ForSerum/PlasmaSamples:Add100μLofStandard,control,orsampleperwell.Coverwiththeadhesivestripprovidedandincubatefor2hoursatroomtemperature.Aplatelayoutisprovidedtorecordthestandardsandsamplesassayed.5.Aspirateeachwellandwash,repeatingtheprocesstwiceforatotalofthreewashes.Washbyfil領(lǐng)eachwellwithWashBuffer（400μL）usingasquirtbottle,manifolddispenser,orautowasher.Completeremovalofliquidateachstepisessentialtogoodperformance.Afterthelastwash,removeanyremainingWashBufferbyaspiratingordecanting.Inverttheplateandblotitagainstcleanpapertowels.6.Add200μLofVEGFConjugatetoeachwell.Coverwithanewadhesivestrip.Incubatefor2hoursatroomtemperature.7.Repeattheaspiration/washasinstep5.8.Add200μLofSubstrateSolutiontoeachwell.Protectfromlight.ForCellCultureSupernateSamples:Incubatefor20minutesatroomtemperature.ForSerum/PlasmaSamples:Incubatefor25minutesatroomtemperature.9.Add50μLofStopSolutiontoeachwell.Ifcolorchangedoesnotappearuniform,gentlytaptheplatetoensurethoroughmixing.Ifthecolorinthewellsisgreenorthecolorchangedoesnotappearuniform,gentlytaptheplatetoensurethoroughmixing.10.Determinetheopticaldensityofeachwellwithin30minutes,usingamicroplatereadersetto450nm.Ifwavelengthcorrectionisavailable,setto540nmor570nm.Ifwavelengthcorrectionisnotavailable,subtractreadingsat540nmor570nmfromthereadingsat450nm.Thissubtractionwillcorrectforopticalimperfectionsintheplate.Readingsmadedirectlyat450nmwithoutcorrectionmaybehigherandlessaccurate.www.RnDSystems.com7CALCULATIONOFRESULTSAveragetheduplicatereadingsforeachstandard,control,andsampleandsubtracttheaveragezerostandardopticaldensity.Createastandardcurvebyreducingthedatausingcomputersoftwarecapableofgeneratingafourparameterlogistic（4-PL）curvefit.Asanalternative,constructastandardcurvebyplottingthemeanabsorbanceforeachstandardonthey-axisagainsttheconcentrationonthex-axisanddrawabestfitcurvethroughthepointsonthegraph.ThedatamaybelinearizedbyplottingthelogoftheVEGFconcentrationsversusthelogoftheO.D.andthebestfitlinecanbedeterminedbyregressionanalysis.Thisprocedurewillproduceanadequatebutlessprecisefitofthedata.Ifsampleshavebeendiluted,theconcentrationreadfromthestandardcurvemustbemultipliedbythedilutionfactor.TYPICALDATAThesestandardcurvesareprovidedfordemonstrationonly.Astandardcurve首ldbegeneratedforeachsetofsamplesassayed.（pg/mL）O.D.AverageCorrected00.0740.0750.07615.60.1180.1200.0450.12131.20.1590.1590.0840.15962.50.2460.2440.1690.2421250.3840.3810.3060.3782500.6660.6680.5930.6695001.2581.2601.1851.26310002.3022.2682.1932.233（pg/mL）O.D.AverageCorrected00.0680.0700.07131.20.1070.1080.0380.11062.50.1490.1510.0810.1531250.2300.2300.1600.2302500.3770.3820.3120.3875000.6570.6780.6080.69910001.2611.2711.2011.28120002.1592.2022.1322.246CALIBRATORDILUENTRD5KCALIBRATORDILUENTRD6U8Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.PRECISIONIntra-assayPrecision（Precisionwithinanassay）Threesamplesofknownconcentrationweretestedtwentytimesononeplatetoassessintraassayprecision.Inter-assayPrecision（Precisionbetweenassays）Threesamplesofknownconcentrationweretestedinfortyseparateassaystoassessinterassayprecision.CELLCULTURESUPERNATEASSAYIntra-AssayPrecisionInter-AssayPrecisionSample123123n202020404040Mean（pg/mL）29.112353132.8128495Standarddeviation1.95.018.42.86.433.0CV（%）6.54.13.58.55.06.7SERUM/PLASMAASSAYIntra-AssayPrecisionInter-AssayPrecisionSample123123n202020404040Mean（pg/mL）53.723591064.52501003Standarddeviation3.610.646.25.717.461.7CV（%）6.74.55.18.87.06.2RECOVERYTherecoveryofVEGFspikedtothreedifferentlevelsthroughouttherangeoftheassayinvariousmatriceswasevaluated.SampleTypeAverage%RecoveryRangeCellculturemedia（n=5）10295-111%Serum（n=5）10292-115%EDTAplasma（n=5）9782-113%Heparinplasma（n=5）9382-102%Citrateplasma（n=5）10088-113%SENSITIVITYUsingCalibratorDiluentRD5Ktheminimumdetectabledose（MDD）ofVEGFistypicallylessthan5.0pg/mL.UsingCalibratorDiluentRD6UtheMDDistypicallylessthan9.0pg/mL.TheMDDwasdeterminedbyaddingtwostandarddeviationstothemeanopticaldensityvalueoftwentyzerostandardreplicatesandcalculatingthecorrespondingconcentration.www.RnDSystems.com9LINEARITYToassesslinearityoftheassay,sampleswerespikedwithhighconcentrationsofVEGFanddilutedwiththeappropriateCalibratorDiluenttoproducesampleswithvalueswithinthedynamicrangeoftheassay.Cellculturemedia（n=5）Serum（n=5）EDTAplasma（n=5）Heparinplasma（n=5）Citrateplasma（n=5）1:2Average%ofExpected9897979495Range（%）94-10091-10382-10787-9990-1001:4Average%ofExpected9697989394Range（%）93-9993-10491-10685-9889-991:8Average%ofExpected9396969292Range（%）88-10293-10389-10685-10185-971:16Average%ofExpected9394949492Range（%）88-10591-10184-10683-10385-98CALIBRATIONThisimmunoassayiscalibratedagainstahighlypurifiedSf21-expressedrecombinanthumanVEGF165producedatR&DSystems.TheNIBSC/WHOVEGF165preparation02/286（recombinanthumanDNA）wasevaluatedinthiskit.Thedoseresponsecurveofthestandard02/286parallelstheQuantikinestandardcurve.ToconvertsamplevaluesobtainedwiththeQuantikineHumanVEGFkittoapproximateNIBSC/WHO02/286Units,usetheequationbelow.NIBSC/WHO（02/286）approximatevalue（U/mL）=0.002xQuantikineVEGFvalue（pg/mL）Note:BasedondatageneratedinApril2011.10Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.SAMPLEVALUESSerum/Plasma-SamplesfromapparentlyhealthyvolunteerswereevaluatedforthepresenceofVEGFinthisassay.Nomedicalhistorieswereavailableforthedonorsusedinthisstudy.SampleTypeMeanofDetectable（pg/mL）%DetectableRange（pg/mL）Serum（n=37）22010062-707EDTAplasma（n=37）6124ND-115Heparinplasma（n=37）4122ND-55Citrateplasma（n=37）___0NDND=Non-detectableCellCultureSupernates-Humanperipheralbloodmononuclearcells（1x106cells/mL）wereculturedinRPMIsupplementedwith5%fetalcalfserum,50μMβ-mercaptoethanol,2mML-glutamine,100U/mLpenicillin,and100μg/mLstreptomycinsulfate.Thecellswereculturedunstimulatedorstimulatedwith10μg/mLPHAfor1and5days.AliquotsofthecellculturesupernateswereremovedandassayedforlevelsofnaturalVEGF.ConditionDay1（pg/mL）Day5（pg/mL）Unstimulated356332Stimulated141440www.RnDSystems.com11SPECIFICITYThisassayrecognizesnaturalandrecombinanthumanVEGF.ThisassayalsorecognizesrecombinanthumanVEGF165b.Thefactorslistedbelowwerepreparedat50ng/mLinCalibratorDiluentandassayedforcrossreactivity.Preparationsofthefollowingfactorsat50ng/mLinamid-rangeVEGFcontrolwereassayedforinterference.Thefollowingfactorsshowednocross-reactivityorinterference.Recombinanthuman:PDGF-AAPDGF-ABPDGF-BBPDGF-CCPDGF-DDPlGFPlGF-2VEGF165/PlGFVEGF-B167VEGF-CVEGF-DVEGFR3Recombinantmouse:PDGF-CCPlGF-2VEGF120VEGF164VEGFR3Recombinantrat:PDGF-AAPDGF-ABPDGF-BBVEGF164Recombinantzebrafish:VEGFNaturalproteins:humanPDGFporcinePDGFVEGF-relatedfactorsshowingcross-reactivityorinterference.RecombinanthumanVEGFR1/Flt-1Interferenceatlevels≥500pg/mLRecombinanthumanVEGFR2/KDRInterferenceatlevels≥2000pg/mLRecombinantmouseVEGFR1/Flk-1Interferenceatlevels≥500pg/mLRecombinantmouseVEGFR2/KDRInterferenceatlevels≥4000pg/mLRecombinantcanineVEGFCross-reactsapproximately67%RecombinantfelineVEGFCross-reactsapproximately82%12Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.REFERENCES1.Leung,D.W.etal.（1989）Science246:1306.2.Keck,P.J.etal.（1989）Science246:1309.3.Byrne,A.M.etal.（2005）J.Cell.Mol.Med.9:777.4.Robinson,C.J.andS.E.Stringer（2001）J.Cell.Sci.114:853.5.Richardson,R.S.etal.（1999）Am.J.Physiol.277:H2247.6.Sugishita,Y.etal.（2000）Biochem.Biophys.Res.Commun.268:657.7.Yamane,A.etal.（1994）Oncogene9:2683.8.Goad,D.L.etal.（1996）Endocrinology137:2262.9.Gaudry,M.etal.（1997）Blood90:4153.10.Mclaren,J.etal.（1996）J.Clin.Invest.98:482.11.Diaz,B.V.etal.（2000）J.Biol.Chem.275:642.12.Asano,A.etal.（1997）Biochem.J.328:179.13.Bautz,F.etal.（2000）Exp.Hematol.28:700.14.Namiki,A.etal.（1995）J.Biol.Chem.270:31189.15.Nauck,M.etal.（1997）Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.16:398.16.Angelo,L.S.andR.Kurzrock（2007）Clin.CancerRes.13:2825.17.Neufeld,G.etal.（1999）FASEB.J.13:9.18.Kowalewski,M.P.etal.（2005）Accession#ABB82619.19.Pan,Q.etal.（2007）J.Biol.Chem.282:24049.20.Dai,J.andA.B.Rabie（2007）J.Dent.Res.86:937.21.Breier,G.（2000）Semin.Thromb.Hemost.26:553.22.Barleon,B.etal.（1996）Blood87:3336.23.Weis,S.M.andD.A.Cheresh（2005）Nature437:497.24.Thurston,G.（2002）J.Anat.200:575.25.Grothey,A.andE.Galanis（2009）Nat.Rev.Clin.Oncol.6:507.26.Carvalho,J.F.etal.（2007）J.Clin.Immunol.27:246.www.RnDSystems.com13PLATELAYOUTUsethisplatelayouttorecordstandardsandsamplesassayed.14Forresearchuseonly.Notforuseindiagnosticprocedures.[詳細(xì)]

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• Human uPAR Quantikine ELISA Kit

  HumanuPARQuantikineELISAKit[詳細(xì)]

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• Human HMW Adiponectin Quantikine ELISA Kit

  HumanHMWAdiponectinQuantikineELISAKit[詳細(xì)]

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• 人（Human）血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）ELISA檢測試劑盒

  人（Human）血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用試驗(yàn)原理：VEGF試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知VEGF濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將VEGF和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中VEGF的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制：試劑盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）塑料膜板蓋1塊半塊標(biāo)準(zhǔn)品：480ng/ml1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白對照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素標(biāo)記的抗VEGF抗體1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）親和鏈酶素-HRP1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）自備材料：1.蒸餾水。2.加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。4.樣品收集、處理及保存方法：1、血清……操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。5、保存……如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。操作注意事項(xiàng)：●試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存?！駥?shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)?！癫挥玫钠渌噭?yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。●使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器?！袷褂酶蓛舻乃芰先萜髋渲孟礈煲?。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品?！竦孜顰應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。●加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣?！癜凑照f明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。安全性：1.避免直接接觸終止液和底物A、B，一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。2.實(shí)難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。試劑的準(zhǔn)備：1.標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：480ng/ml（6號標(biāo)準(zhǔn)品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul240ng/ml（5號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液120ng/ml（4號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60ng/ml（3號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30ng/ml（2號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15ng/ml（1號標(biāo)準(zhǔn)品）100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml（空白對照）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul2.洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。試劑盒性能：1.靈敏度：Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。操作步驟：1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷與分析：1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的VEGF標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的VEGF含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。3、檢測值范圍：0-480ng/ml4、敏感度：1.0ng/ml上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，酶免試劑盒，試劑盒，進(jìn)口抗體，血清，標(biāo)準(zhǔn)品，培養(yǎng)基，生物試劑、ATCC細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)耗材等。電話：021-60517348QQ：2675483613[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

  產(chǎn)品樣冊

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• 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

  人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-05 00:00

  其它

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• 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒說明書

  血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒說明書[詳細(xì)]

  2016-07-25 00:00

  安裝說明

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• 豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

  豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2015-05-27 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒

  電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒（用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗豬VEGF單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的VEGF與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗豬VEGF，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，VEGF濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中VEGF濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：40ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成40ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）檢測程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)VEGF含量。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的VEGF檢測濃度小于30pg/ml。2.特異性：可同時檢測重組或天然的豬VEGF。不與豬其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔，每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 犬血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

  犬血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。[詳細(xì)]

  2023-08-18 11:43

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  人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-25 00:10

  選購指南

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• 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

  大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-28 18:08

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• 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒

  小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-20 03:55

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  血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒說明[詳細(xì)]

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  雞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-29 13:46

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  2015-10-09 00:00

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  Human AMH ELISA kit[詳細(xì)]

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  Human 8-OHDG elisa試劑盒[詳細(xì)]

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• 猴血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）

  www.biokanu.com猴血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于測定猴血清，細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的含量。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中猴血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF））水平。用純化的猴血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）抗原，再與HRP標(biāo)記的VEGF抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的VEGF呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中猴血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）抗原濃度。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：1350pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為900pg/ml，600pg/ml，300pg/ml，150pg/ml，75pg/ml）。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng)：1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。（此圖僅供參考）試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測范圍：30pg/ml-1000pg/ml保存條件及有效期：1.試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2018-09-22 10:00

  產(chǎn)品樣冊

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• 豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）ELISA試劑盒說明書

  豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)ELISA試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用檢測范圍：20ng/L-800ng/L使用目的：本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)水平。用純化的豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)，再與HRP標(biāo)記的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（1600ng/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800ng/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液400ng/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200ng/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ng/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ng/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物請避光保存。7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9．本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個月[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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