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瘦素抵抗原理
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2018-12-30 10:00 1712閱讀次數(shù)
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瘦素抵抗原理造成瘦素抵抗,產(chǎn)生負性心肌肌力作用血漿中瘦素的水平通常與體重,尤其是身體內(nèi)脂肪組織的變化呈正相關(guān)。臨床上肥胖癥患者多出現(xiàn)不同程度的血液瘦素水平上升。由于瘦素的正常生理功能主要是通過瘦素受體介導(dǎo)的,肥胖癥中瘦素水平的上升直接造成了瘦素受體水平的反饋性下調(diào)或是受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受阻,這就是瘦素抵抗(LeptinResistance)。 瘦素抵抗的出現(xiàn)是直接由循環(huán)中瘦素水平上升而引起的。作一個非常恰當?shù)谋扔?,瘦素抵抗在肥胖癥中的地位類似于胰島素抵抗在2型糖尿病中的角色。生理水平的瘦素可引起血管舒張,對心肌功能無明顯影響,而病理水平的瘦素可促進大量氧化自由基的產(chǎn)生,進而產(chǎn)生明顯的負性心肌肌力作用。有證據(jù)表明,病理水平的瘦素引起的負性心肌肌力作用可能是通過內(nèi)皮素受體(ET-1Receptor)及其下游的還原型輔酶Ⅱ(NAPDH)氧化酶的激活來實現(xiàn)的。NAPDH氧化酶的激活直接產(chǎn)生大量超氧陰離子。這些結(jié)果在瘦素過剩的db/db小鼠模型中已獲得證實。上海易利生物科技有限公司主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,生物試劑,標準品,抗體,培養(yǎng)基,血清,細胞等科研產(chǎn)品。
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瘦素抵抗原理
- 瘦素抵抗原理造成瘦素抵抗,產(chǎn)生負性心肌肌力作用血漿中瘦素的水平通常與體重,尤其是身體內(nèi)脂肪組織的變化呈正相關(guān)。臨床上肥胖癥患者多出現(xiàn)不同程度的血液瘦素水平上升。由于瘦素的正常生理功能主要是通過瘦素受體介導(dǎo)的,肥胖癥中瘦素水平的上升直接造成了瘦素受體水平的反饋性下調(diào)或是受體后信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受阻,這就是瘦素抵抗(LeptinResistance)。 瘦素抵抗的出現(xiàn)是直接由循環(huán)中瘦素水平上升而引起的。作一個非常恰當?shù)谋扔?,瘦素抵抗在肥胖癥中的地位類似于胰島素抵抗在2型糖尿病中的角色。生理水平的瘦素可引起血管舒張,對心肌功能無明顯影響,而病理水平的瘦素可促進大量氧化自由基的產(chǎn)生,進而產(chǎn)生明顯的負性心肌肌力作用。有證據(jù)表明,病理水平的瘦素引起的負性心肌肌力作用可能是通過內(nèi)皮素受體(ET-1Receptor)及其下游的還原型輔酶Ⅱ(NAPDH)氧化酶的激活來實現(xiàn)的。NAPDH氧化酶的激活直接產(chǎn)生大量超氧陰離子。這些結(jié)果在瘦素過剩的db/db小鼠模型中已獲得證實。上海易利生物科技有限公司主營產(chǎn)品:ELISA試劑盒,生物試劑,標準品,抗體,培養(yǎng)基,血清,細胞等科研產(chǎn)品。[詳細]
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠瘦素(leptin)說明書
- 大鼠瘦素(leptin)說明書[詳細]
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2015-07-03 00:00
應(yīng)用文章
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DRG瘦素ELISA試劑盒
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4DRG瘦素ELISA試劑盒(德國DRG:EIA-2395)1、說明DRG公司的瘦素酶免試劑盒可用于人血清和血漿中瘦素的定量檢測。此檢測試劑盒僅供體外診斷用。2、實驗原理DRG公司的瘦素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合瘦素分子上獨特抗原位點的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性瘦素的病人樣本在包被孔中與特異性兔抗瘦素抗體進行孵育,之后就會形成一個夾心復(fù)合物。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的物質(zhì),再加入過氧化物酶標記的抗兔抗體以檢測結(jié)合在包被板上的瘦素的量。加入底物溶液后,顯出的顏色強度與病人樣品中瘦素的濃度成正比。3、試劑盒成分1)包被板,12×8孔,可拆,微孔中包被了抗瘦素抗體(單克隆)2)標準品(0-5),6支凍干型0.5mL,濃度:0,2,5,25,50,100ng/ml,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑3)質(zhì)控品,2支,200ul,即用,2個濃度(低與高),具體數(shù)值與范圍請見試劑瓶標簽或QC質(zhì)控單。內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑。4)實驗緩沖液,1支,11ml,即用,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑5)抗血清,1支,11ml,即用,單克隆瘦素抗血清,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑。6)酶復(fù)合物,1支,11ml,即用,辣根過氧酶標記的抗兔復(fù)合物,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑7)TMB底物液,1支,14ml,即用8)終止液,1支,14ml,即用,內(nèi)含0.5M的H2SO4,避免接觸終止液,以免刺激皮膚或灼燒皮膚。9)洗滌液(40×),1支30ml注:零標準品應(yīng)視需要而定。4、實驗所需器材(但試劑盒不提供)1)酶標儀(450±10nm)(如DRG公司的酶標儀)2)極ng確取樣槍3)吸水紙。4)蒸餾水5、貯存條件未開啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑。酶聯(lián)物、底物溶液、標準品和零標準品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開,必須將它小心地嚴封起來。6、樣品采集1)血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下離心分離血清。未完全凝血前請勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人樣品可能需要更長的凝血時間。2)血漿:將全血采集到含有抗凝劑的離心管,采集后立即離心分離。3)樣品的儲存:實驗開始前應(yīng)用蓋子將樣品密封好,2-8℃下可存放24個小時,如實驗之前需將樣品貯存更長的時間,應(yīng)當將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下,并且只能凍存一次,不能反復(fù)凍存。解凍的樣本在實驗之前必須要上下倒置幾次。7、樣品的稀釋:在**次實驗中,要是樣品的濃度高于Z高標準品,則樣品應(yīng)用按實驗步驟所描述用零標準品進行稀釋,并重新檢測。并且在計算濃度時需乘上此稀釋因子。例子:a)按1:10稀釋:10μL的血清+90μL的零標準品(充分搖勻)。b)按1:100釋?。?0μL按a)稀釋的血清+90μL的零標準品(充分搖勻)8、實驗步驟所有的標準品、質(zhì)控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有的檢測條件都一樣。每一次實驗都有一條標準曲線。1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。。2)用一次性吸嘴將標準品質(zhì)控品和樣品分別15μL加入相應(yīng)的檢測孔中。3)每孔加入100μL的檢測緩沖液。4)充分混合10秒,在此步驟中充分混合非常重要。5)室溫下溫育120分鐘。6)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和極ng確度。7)每孔加入100μL抗血清。8)在室溫下溫育30分鐘。9)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。10)每孔加入100μL酶聯(lián)物。11)在室溫下溫育30分鐘。12)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。13)每孔加入100μL底物液。14)室溫溫育15分鐘。15)每孔加入50μL終止液以終止酶反應(yīng)。16)在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值。9、結(jié)果計算1)計算每個標準品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(y),濃度值作為橫坐標(x),以每個標準品的吸光度值對其相應(yīng)的濃度值進行標繪,作一標準曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標準曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動計算方法:在IFU上,它用四參數(shù)曲線已自動計算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會得出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標準曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于Z高標準品的必須用進行進一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應(yīng)當把此稀釋因子考慮進去。10、參考值我們強烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準得出的實驗結(jié)果:人群ng/ml男性3.84±1.79女性7.36±3.73本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。ZGdu家總代理:深圳市科潤達生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費電話:800-8306296傳真:0755-2681443[詳細]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
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豬瘦素(LEP)ELISA試劑盒
- 豬瘦素(LEP)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-12 00:00
課件
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大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒
- 大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-11 00:00
標準
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人瘦素(LEP)檢測試劑盒
- 人瘦素(LEP)檢測試劑盒[詳細]
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2015-03-16 00:00
標準
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瘦素(leptin)ELISA試劑盒說明
- 瘦素(leptin)ELISA試劑盒說明[詳細]
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2016-07-29 00:00
應(yīng)用文章
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小鼠瘦素(LEP)試劑盒使用方法
- 檢測范圍:96T30pg/ml-800pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘦素(LEP)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠瘦素(LEP)水平。用純化的小鼠瘦素(LEP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(LEP),再與HRP標記的瘦素(LEP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(LEP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠瘦素(LEP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1600pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個[詳細]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊
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瘦素受體(長) Leptinreceptor單抗
- 應(yīng)用瘦素受體(長)Leptinreceptor單抗實驗:試驗驗證過適用于Westernblotting實驗、免疫組化實驗(Immunohistochemistry)、ELISA實驗。Leptinreceptor單抗?說明書,請打電話詢要。乳腺癌相關(guān)抗原包裝規(guī)格:0.1ml、0.2mlAnti-Leptinreceptor:鼠源單抗、兔源多抗重要提示:瘦素受體(長)Leptinreceptor單抗避免重復(fù)凍融,專為科研實驗使用。歡迎打電話咨詢詳情!Ang-Ⅰ,人(Ang-Ⅰ)Elisa試劑盒NBB培養(yǎng)基鹽酸喹那普利標準品人Elisa-血管內(nèi)皮細胞粘附分子1試劑盒,(VCAM-1/CD106)試劑盒IL-1β,魚類(IL-1β)Elisa試劑盒10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基顆粒?兔Elisa-甲狀腺素Elisa試劑盒,(T4)試劑盒ACA-IgM,小鼠(ACA-IgM)Elisa試劑盒3%NaCl硫化氫生化管人Elisa-孕激素/孕酮試劑盒,(PROG)試劑盒5-氨基水楊酸,美沙拉秦標準品小鼠Elisa-葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽試劑盒,(GIP)試劑盒Cav-1,人(Cav-1)Elisa試劑盒人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)elisa試劑盒St-Ag,人(St-Ag)Elisa試劑盒磷酸西他列汀一水標準品人Elisa-脫氧膠原吡啶交聯(lián)試劑盒,(DPD)試劑盒含糖牛肉湯培養(yǎng)基[詳細]
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2018-11-05 10:00
產(chǎn)品樣冊
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瘦素(LEP)ELISA試劑盒使用說明
- 瘦素(LEP)ELISA試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%瘦素(LEP)ELISA試劑盒檢測范圍:0.2μg/L-8μg/L瘦素(LEP)ELISA試劑盒實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠瘦素(LEP)水平。用純化的大鼠瘦素(LEP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(LEP),再與HRP標記的瘦素(LEP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(LEP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠瘦素(LEP)濃度。瘦素(LEP)ELISA試劑盒樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。瘦素(LEP)ELISA試劑盒操作步驟:標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為6μg/L,4μg/L,2μg/L,1μg/L,0.5μg/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。瘦素(LEP)ELISA試劑盒注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。瘦素(LEP)ELISA試劑盒保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-05 10:00
產(chǎn)品樣冊
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小鼠瘦素(LEP)酶聯(lián)免疫分析
- 小鼠瘦素(LEP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T30pg/ml-800pg/ml使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘦素(LEP)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠瘦素(LEP)水平。用純化的小鼠瘦素(LEP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(LEP),再與HRP標記的瘦素(LEP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(LEP)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠瘦素(LEP)濃度。[詳細]
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠瘦素(Leptin)檢測試劑盒
- 大鼠瘦素(Leptin)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-14 10:15
操作手冊
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人瘦素(LEP)ELISA試劑盒
- 人瘦素(LEP)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-20 13:38
安裝說明
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小鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒
- 小鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-29 01:16
課件
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豬瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒
- 豬瘦素(LEP)ELISA檢測試劑盒[詳細]
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2015-05-28 00:00
應(yīng)用文章
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人瘦素(Leptin)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人瘦素(Leptin)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人Leptin單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的Leptin與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人Leptin,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,Leptin濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中Leptin濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清、血漿建議作1:5稀釋(取20ul,加標本稀釋液80ul,稀釋5倍)。2.標準品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)Leptin含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的Leptin檢測濃度小于30pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人Leptin。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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牛瘦素(leptin)說明書間接法
- www.biokanu.com牛瘦素(leptin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。使用目的:本試劑盒用于測定牛血清,血漿及相關(guān)液體樣本中瘦素(leptin)的含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用間接法測定標本中牛瘦素(leptin)水平。用純化的牛瘦素(leptin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的瘦素(leptin)標準品和未知濃度的瘦素(leptin)待檢樣品,溫育后,加入生物素標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(leptin)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中牛瘦素(leptin)濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶8標準品S1(3600ng/L)0.5ml×1瓶2鏈霉親和素-HRP6ml×1瓶標準品S2(2400ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條標準品S3(1200ng/L)0.5ml×1瓶4生物素標記的抗-IgG抗體6ml×1瓶標準品S4(600ng/L)0.5ml×1瓶5顯色劑A液6ml×1瓶標準品S5(300ng/L)0.5ml×1瓶6顯色劑B液6ml×1/瓶9說明書1份7終止液6ml×1瓶10封板膜2張標本要求1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融操作步驟根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。然后在標準品孔中加入標準品50μl,在樣本反應(yīng)孔中加入50微升樣本,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。加生物素標記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘洗滌:操作同4。加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。洗滌:操作同4。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。線形范圍:200ng/L-4000ng/L規(guī)格:96人份/盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒
- 人瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒[詳細]
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2024-09-28 22:30
安裝說明
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大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
- 大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-11 00:00
課件
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人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
- 人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒[詳細]
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2013-12-09 00:00
操作手冊
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