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大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
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2013-12-11 00:00 164閱讀次數(shù)
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大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
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大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
- 大鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-11 00:00
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人可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒
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小鼠可溶性瘦素受體(sLR)檢測試劑盒
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2015-07-31 00:00
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人可溶性瘦素受體(sLR)檢測試劑盒
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大鼠瘦素(LEP)ELISA試劑盒
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2013-12-11 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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人瘦素受體(Leptin R)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人瘦素受體(LeptinR)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人LeptinR單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的LeptinR與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人LeptinR,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,LeptinR濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中LeptinR濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):20ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。正常標(biāo)本測定前用標(biāo)本稀釋液至少作1:20稀釋(取10ul,加標(biāo)本稀釋液190ul,稀釋20倍)。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)LeptinR含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的LeptinR檢測濃度小于15pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人LeptinR。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠瘦素(leptin)ELISA試劑盒使用說明書
- 南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠,試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠瘦素(leptin)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠瘦素(leptin)水平。用純化的大鼠瘦素(leptin)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(leptin),再與HRP標(biāo)記的瘦素(leptin)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(leptin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠瘦素(leptin)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:9μg/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為6μg/L,4μg/L,2μg/L,1μg/L,0.5μg/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:0.3μg/L-8μg/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體(TNFsR-)ELISA試劑盒
- 大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體(TNFsR-)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-11 00:00
課件
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大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒
- 大鼠可溶性白介素6受體(sIL-6R)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-22 20:31
操作手冊
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大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體(TNFsR-)ELISA試劑盒
- 大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體(TNFsR-)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-22 17:53
產(chǎn)品樣冊
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大鼠白介素1可溶性受體(IL-1sR)ELISA試劑盒
- 大鼠白介素1可溶性受體(IL-1sR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 17:30
專利
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大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)ELISA試劑盒
- 大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-20 22:44
安裝說明
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DRG瘦素ELISA試劑盒
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer4DRG瘦素ELISA試劑盒(德國DRG:EIA-2395)1、說明DRG公司的瘦素酶免試劑盒可用于人血清和血漿中瘦素的定量檢測。此檢測試劑盒僅供體外診斷用。2、實驗原理DRG公司的瘦素酶免實驗是一種基于夾心法原理的固相酶免吸附實驗(ELISA)。反應(yīng)板上的微檢測孔包被有能結(jié)合瘦素分子上獨特抗原位點的單克隆抗體。一份含有內(nèi)源性瘦素的病人樣本在包被孔中與特異性兔抗瘦素抗體進(jìn)行孵育,之后就會形成一個夾心復(fù)合物。孵育后,用洗滌液洗去未結(jié)合的物質(zhì),再加入過氧化物酶標(biāo)記的抗兔抗體以檢測結(jié)合在包被板上的瘦素的量。加入底物溶液后,顯出的顏色強度與病人樣品中瘦素的濃度成正比。3、試劑盒成分1)包被板,12×8孔,可拆,微孔中包被了抗瘦素抗體(單克?。?)標(biāo)準(zhǔn)品(0-5),6支凍干型0.5mL,濃度:0,2,5,25,50,100ng/ml,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑3)質(zhì)控品,2支,200ul,即用,2個濃度(低與高),具體數(shù)值與范圍請見試劑瓶標(biāo)簽或QC質(zhì)控單。內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑。4)實驗緩沖液,1支,11ml,即用,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑5)抗血清,1支,11ml,即用,單克隆瘦素抗血清,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑。6)酶復(fù)合物,1支,11ml,即用,辣根過氧酶標(biāo)記的抗兔復(fù)合物,內(nèi)含0.3%的Proclin防腐劑7)TMB底物液,1支,14ml,即用8)終止液,1支,14ml,即用,內(nèi)含0.5M的H2SO4,避免接觸終止液,以免刺激皮膚或灼燒皮膚。9)洗滌液(40×),1支30ml注:零標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)視需要而定。4、實驗所需器材(但試劑盒不提供)1)酶標(biāo)儀(450±10nm)(如DRG公司的酶標(biāo)儀)2)極ng確取樣槍3)吸水紙。4)蒸餾水5、貯存條件未開啟的試劑在28℃下貯存,在有效期內(nèi)可以保持活性。不要使用過期試劑。酶聯(lián)物、底物溶液、標(biāo)準(zhǔn)品和零標(biāo)準(zhǔn)品必須在28℃下貯存。微孔反應(yīng)板必須在28℃下貯存。一旦包裝袋被打開,必須將它小心地嚴(yán)封起來。6、樣品采集1)血清:靜脈穿刺采集全血,待其凝血,在室溫下離心分離血清。未完全凝血前請勿離心,接受了抗凝劑ZL的病人樣品可能需要更長的凝血時間。2)血漿:將全血采集到含有抗凝劑的離心管,采集后立即離心分離。3)樣品的儲存:實驗開始前應(yīng)用蓋子將樣品密封好,2-8℃下可存放24個小時,如實驗之前需將樣品貯存更長的時間,應(yīng)當(dāng)將樣品凍存于-20℃的環(huán)境下,并且只能凍存一次,不能反復(fù)凍存。解凍的樣本在實驗之前必須要上下倒置幾次。7、樣品的稀釋:在**次實驗中,要是樣品的濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品,則樣品應(yīng)用按實驗步驟所描述用零標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋,并重新檢測。并且在計算濃度時需乘上此稀釋因子。例子:a)按1:10稀釋:10μL的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)。b)按1:100釋?。?0μL按a)稀釋的血清+90μL的零標(biāo)準(zhǔn)品(充分搖勻)8、實驗步驟所有的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品都必須做雙份檢測以確保所有的檢測條件都一樣。每一次實驗都有一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。1)將所需數(shù)目的板條置于板架上。。2)用一次性吸嘴將標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和樣品分別15μL加入相應(yīng)的檢測孔中。3)每孔加入100μL的檢測緩沖液。4)充分混合10秒,在此步驟中充分混合非常重要。5)室溫下溫育120分鐘。6)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。注意:洗板步驟是否正確操作會明顯影響實驗的靈敏度和極ng確度。7)每孔加入100μL抗血清。8)在室溫下溫育30分鐘。9)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。10)每孔加入100μL酶聯(lián)物。11)在室溫下溫育30分鐘。12)快速棄去檢測孔中的內(nèi)含物,每孔用300μL的洗滌液洗板三次,在吸水紙上拍干以除去殘余液體。13)每孔加入100μL底物液。14)室溫溫育15分鐘。15)每孔加入50μL終止液以終止酶反應(yīng)。16)在加終止液后10分鐘內(nèi)于450±10nm處讀取OD值。9、結(jié)果計算1)計算每個標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和病人樣本的平均吸光度值。2)用吸光度值作為縱坐標(biāo)(y),濃度值作為橫坐標(biāo)(x),以每個標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值對其相應(yīng)的濃度值進(jìn)行標(biāo)繪,作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。3)用每一樣品的平均吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上確定其相應(yīng)的濃度。4)自動計算方法:在IFU上,它用四參數(shù)曲線已自動計算出結(jié)果。其它的歸納方法可能會得出稍微不同的結(jié)果。5)樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取。樣品中HPL濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。在計算樣品濃度時就應(yīng)當(dāng)把此稀釋因子考慮進(jìn)去。10、參考值我們強烈建議各個實驗市都建立自己的正常值和異常值。以下結(jié)果是以一定量正常人群的血液樣本為準(zhǔn)得出的實驗結(jié)果:人群ng/ml男性3.84±1.79女性7.36±3.73本譯文僅供參考,詳情請以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司公司地址:深圳市蛇口沿山路10號6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費電話:800-8306296傳真:0755-2681443[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒
- 人瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 22:30
安裝說明
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大鼠瘦素(Leptin)檢測試劑盒
- 大鼠瘦素(Leptin)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-14 10:15
操作手冊
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大鼠(Rat)瘦素(Leptin)ELISA 檢測試劑盒說明書
- 本試劑僅供研究使用標(biāo)本:組織勻漿試驗原理:Leptin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Leptin濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將Leptin和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Leptin的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品:40ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗Leptin抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型自備材料蒸餾水。加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:40ng/ml(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。20ng/ml(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ng/ml(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0ng/ml(3號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5ng/ml(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.25ng/ml(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Leptin標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Leptin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-40ng/ml4、敏感度:0.1ng/ml[詳細(xì)]
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2018-09-28 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠可溶性白細(xì)胞介素2受體(sIL-2R)ELISA試劑盒
- 大鼠可溶性白細(xì)胞介素2受體(sIL-2R)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2015-04-16 00:00
實驗操作
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大鼠白介素2可溶性受體鏈(IL-2sR)ELISA試劑盒
- 大鼠白介素2可溶性受體鏈(IL-2sR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-30 01:24
期刊論文
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